王亞麗，閆順華，沙拉麥提·艾力

（新疆維吾爾自治區(qū)藥品檢驗研究院；國家藥品監(jiān)督管理局中藥（維藥）質(zhì)量控制重點實驗室，烏魯木齊830054）

蕓香為蕓香科蕓香屬植物（Ruta graveolens L.）的干燥地上部分，主要含揮發(fā)油、脂肪油、黃酮類、生物堿、香豆素類等成分，具有清熱解毒，涼血散瘀等功效，臨床上用于治感冒發(fā)熱、風火牙痛、頭痛，跌打扭傷[1]。臨床研究表明，生物堿類成分是蕓香鎮(zhèn)痛、解痙和鎮(zhèn)靜的重要藥用物質(zhì)基礎(chǔ)，其中蕓香堿、茵芋堿和白鮮堿均具有鎮(zhèn)痛、解痙和鎮(zhèn)靜作用?；ń范舅貙龠秽愣顾仡愄烊换衔?，有抗實驗性心律失常、鎮(zhèn)痛、抗炎、松弛大鼠子宮、家兔回腸和血管平滑肌、抑制豚鼠心臟等作用[4-8]。本實驗采用高效液相色譜法同時測定蕓香中蕓香堿、花椒毒素、茵芋堿和白鮮堿等4個成分的含量，現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 LC-2010A型高效液相色譜儀（日本島津公司），XS205DU型電子天平（梅特勒-特倫多公司）。

1.2 試藥 蕓香堿（Adooq Bioscoence公司，L13917B001）；茵芋堿（麥克林公司，C10650228）；花椒毒素（Bepure公司，190521004，）；白鮮堿（中國食品藥品檢定研究院，111654-200602）；乙腈（色譜級，F(xiàn)isher公司）；水為純化水；其他試劑均為分析純。

1.3 藥材 實驗用藥材20190701（S1）、20190922（S2）、20190821（S3）、20190722（S4）、20190915（S5）、20190801（S6）均采集于新疆伊犁地區(qū)，經(jīng)中國科學院新疆生態(tài)與地理研究所研究員馮纓鑒定，均為蕓香科植物蕓香（Rata graveolens L.）的全草。

2 方法與結(jié)果

2.1 對照品溶液的制備 分別稱取蕓香堿、茵芋堿、花椒毒素和白鮮堿，加甲醇制成每1 mL含蕓香堿11.66μg、花椒毒素22.40μg、茵芋堿30.20μg和白鮮堿22.84μg的混合溶液，備用。

2.2 供試品溶液的制備 稱取供試品0.5 g置錐形瓶中，加氨水4 mL浸潤30 min，加二氯甲烷-甲醇（4∶1）混合溶液40 mL，置于80℃水浴回流1 h，放冷，靜置，過濾，蒸干，殘渣用甲醇溶解并定量稀釋至5 mL，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.3 色譜條件 色譜柱為Agilent Eclipse C18（250 mm×4.6 mm，5μm），流動相為乙腈-0.02 mol/L甲酸銨，梯度洗脫（0～10 min，21∶79；10～15 min，25∶75；25～30 min，30∶70；30～35 min，35∶65；35～40 min，40∶60；40～45 min，45∶55；45～55 min，50∶50；55～60 min，21∶79）；流速為1.0 mL/min；檢測波長為330 nm；柱溫35℃，進樣量為10μL。按上述色譜條件下，混合對照品和蕓香樣品中色譜峰可達到基線分離，見圖1。

圖1蕓香樣品HPLC色譜圖

2.4 方法學考察

2.4.1 回歸方程的建立 吸取“2.1”項下對照品溶液0.5、1、2、2.5、5、10 mL分別置于10 mL容量瓶中，定容至刻度，按“2.3”項下色譜條件測定，以峰面積值（A）對進樣量（C）進行回歸，繪制標準曲線，回歸方程及線性范圍,見表1。

2.4.2 精密度實驗 吸取“2.2”項下供試品溶液，按“2.3”項下的色譜條件，連續(xù)進樣6次，記錄色譜峰峰面積，計算得到蕓香堿、花椒毒素、茵芋堿、白鮮堿峰面積的RSD分別為1.37%，1.53%，1.48%，1.44%，表明儀器精密度良好。

表1線性關(guān)系考察結(jié)果（n=6)

2.4.3 穩(wěn)定性實驗 取“2.2”項下的供試品溶液，分別于0、2、4、8、12、24 h，按“2.3”項下的色譜條件進樣，記錄色譜峰峰面積，計算得到蕓香堿、花椒毒素、茵芋堿、白鮮堿峰面積的RSD分別為0.55%，0.32%，0.57%，1.46%，表明樣品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.4.4 重復性實驗 取同一批蕓香按“2.2”項下方法制備供試品溶液6份，按“2.3”項下色譜條件進樣，記錄色譜峰峰面積，計算得到蕓香堿、花椒毒素、茵芋堿、白鮮堿峰面積的RSD分別為1.77%、1.56%、1.89%、1.47%，表明該方法重復性良好,見表2。

表2重復性考察結(jié)果/（mg/g）

2.4.5 加樣回收率實驗 稱取已知含量的蕓香6份，每份0.25 g，分別吸取“2.1”項下對照品溶液1.5 mL，按“2.2”項下方法制備供試品溶液，按“2.3”項下色譜條件進樣，記錄色譜峰峰面積，計算得到蕓香堿、花椒毒素、茵芋堿、白鮮堿的平均加樣回收率分別為100.71%、95.25%、106.67%、93.86%，RSD分 別 為2.50%、3.38%、2.38%、0.88%，表明該方法準確度較高，見表3。

表3加樣回收實驗結(jié)果（n＝6）

2.5 樣品含量測定 精密稱取不同批次的蕓香供試品粉末各0.5 g，按“2.2”項下方法制備供試品溶液，按“2.3”項下色譜條件進樣，記錄色譜峰峰面積，計算樣品中蕓香堿、花椒毒素、茵芋堿、白鮮堿的含量，見表4。

表4含量測定結(jié)果/（mg/g）

3 討論

通過紫外全波長掃描測定蕓香堿、花椒毒素、茵芋堿、白鮮堿最大吸收波長分別為324 nm、348 nm、320 nm、348 nm，所以確定檢測波長為330 nm。本實驗還對3批次往年采集的蕓香藥材進行測定，發(fā)現(xiàn)各指標成分含量明顯低于當年采收、陰干的樣品。考慮指標成分受采收加工和貯藏方式的影響，應放于陰涼、通風、干燥處貯存，避免陽光曝曬。本研究采用HPLC法可實現(xiàn)對蕓香藥材中蕓香堿、花椒毒素、茵芋堿和白鮮堿4種成分的良好分離和定量分析，且保留時間穩(wěn)定、操作簡便，可以為蕓香藥材的質(zhì)量控制作為參考依據(jù)。