鄭國(guó)強(qiáng)，朱獻(xiàn)斐

（義烏市中心醫(yī)院 病理科，浙江 義烏322000）

胃癌是一種常見的惡性腫瘤，好發(fā)于老年人。隨著人們生活水平的改善及老齡化加劇，胃癌發(fā)病率呈上升趨勢(shì)，嚴(yán)重影響老年人生活質(zhì)量，威脅其生命安全[1]。胃癌早期癥狀沒有特異性，發(fā)病較為隱匿，大部分患者就診時(shí)已處于晚期，失去最佳治療時(shí)機(jī)[2]。目前，胃癌發(fā)病因素尚未完全明確，其發(fā)病是多基因變異積累的過程，是遺傳因素和環(huán)境因素共同作用的結(jié)果[3-4]。尋找合適的腫瘤治療靶點(diǎn)，對(duì)探索新的治療方法具有重要意義。CD10、CD133 和CD157 作為腫瘤-間質(zhì)相互作用的參與因子，可調(diào)節(jié)細(xì)胞的生長(zhǎng)和分化，導(dǎo)致細(xì)胞間信號(hào)通路改變，與腫瘤生物學(xué)行為關(guān)系緊密，具有成為腫瘤藥物治療新靶點(diǎn)的潛力。近年來研究普遍認(rèn)為，癌組織中CD10、CD133 和CD157 的表達(dá)與多種腫瘤的惡性生物學(xué)行為和不良預(yù)后有關(guān)，認(rèn)為其對(duì)惡性腫瘤具有診斷價(jià)值[5-6]。目前，尚未見CD10、CD133、CD157 與胃癌的相關(guān)性研究。本研究探討CD10、CD133 和CD157 在胃癌組織中的表達(dá)及其臨床意義，為臨床診斷和治療提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2016年3月—2019年3月在義烏市中心醫(yī)院行手術(shù)治療患者的胃癌組織標(biāo)本105 例，并取距腫瘤邊緣≥5 cm 的正常組織作為癌旁組織。其中，男性67 例，女性38 例；年齡65～83 歲，平均（73.42±6.57）歲；腫瘤直徑：＞5 cm 46 例，≤5 cm 59例；腫瘤部位：胃竇73例，賁門-胃底-胃體32例；腫瘤臨床分期：Ⅰ期、Ⅱ期32例，Ⅲ期、Ⅳ期73例；浸潤(rùn)深度：T1、T221 例，T3、T484 例；分化程度：低分化68 例，高、中分化37 例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移70 例。

1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1 納入標(biāo)準(zhǔn)①所有標(biāo)本經(jīng)術(shù)后病理學(xué)證實(shí)；②術(shù)前未接受抗腫瘤治療；③臨床資料和隨訪資料完整。

1.2.2 排除標(biāo)準(zhǔn)①合并其他組織惡性腫瘤；②重要臟器嚴(yán)重異常。

1.3 主要試劑

DAB 顯色試劑盒購(gòu)自北京柏奧泰科技有限公司，生物素標(biāo)記山羊抗兔免疫球蛋白G（IgG）購(gòu)自上海聯(lián)碩生物科技有限公司，CD10 單克隆抗體、CD133 單克隆抗體和CD157 購(gòu)自上海聯(lián)碩生物科技有限公司。

1.4 免疫組織化學(xué)染色法

采用免疫組織化學(xué)染色法測(cè)定癌組織和癌旁組織中CD10、CD133 和CD157 蛋白的表達(dá)。取石蠟標(biāo)本切片3 μm，烤片60 min，將標(biāo)本經(jīng)二甲苯、梯度乙醇脫蠟至水，枸櫞酸鈉緩沖液修復(fù)。采用3%雙氧水處理，PBS 溶液洗滌5 min/次，共3 次。血清封閉30 min 后甩去血清，加入CD10 一抗（1∶200）、CD133 一抗（1∶200）和CD157 一抗（1∶500）4℃過夜；加入生物素標(biāo)記山羊抗兔IgG 二抗，置于37℃條件下孵育30 min，PBS溶液洗滌3次，5 min/次。采用DAB 試劑盒顯色，蘇木精復(fù)染，切片、脫水、封片后于顯微鏡下觀察。

1.5 結(jié)果判定

結(jié)果由本院2 位經(jīng)驗(yàn)豐富的病理科醫(yī)師以雙盲法閱片。評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)包括染色程度和染色范圍（染色細(xì)胞占百分比）。染色強(qiáng)度：無染色為0 分，淡黃色為1分，黃褐色為2分，褐色為3分。染色范圍：無染色為0 分，≤25%為1 分，＞25%～75%為2 分，＞75%～100%為3 分。最終得分=染色強(qiáng)度×染色范圍評(píng)分。0～1 分為陰性（-），2 分為弱陽(yáng)性（+），3～5 分為陽(yáng)性（++），6～9 分為強(qiáng)陽(yáng)性（+++）。

1.6 隨訪

采取門診復(fù)診、電話、微信、上門等多種方式進(jìn)行隨訪，每月隨訪≥1 次，自患者入院隨訪至2020年9月30日，以患者死亡作為隨訪終點(diǎn)事件，計(jì)算患者總生存期?？偵嫫跒榛颊唠S訪開始至任何原因死亡的時(shí)間。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)分析采用SPSS 25.0 統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，比較用χ2檢驗(yàn)；采用Kaplan-Meier法繪制生存曲線，比較用Log-rank χ2檢驗(yàn)；影響因素的分析用Cox 回歸模型，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 癌組織和癌旁組織中CD10、CD133 和CD157蛋白的表達(dá)

癌旁組織中CD10、CD133 和CD157 蛋白表達(dá)很少。癌組織中CD10 蛋白主要表達(dá)于細(xì)胞膜中，呈淡黃色、棕黃色顆粒；CD133 蛋白主要表達(dá)于細(xì)胞膜，呈褐色顆粒；CD157 蛋白主要表達(dá)于細(xì)胞核和胞漿，呈淡黃色甚至褐色。見圖1～3。

圖1 CD10蛋白的表達(dá) （免疫組織化學(xué)染色×200）

圖2 CD133蛋白的表達(dá) （免疫組織化學(xué)染色×200）

圖3 CD157蛋白的表達(dá) （免疫組織化學(xué)染色×200）

2.2 癌組織與癌旁組織中CD10、CD133 和CD157蛋白表達(dá)陽(yáng)性率比較

癌組織與癌旁組織中CD10、CD133 和CD157蛋白表達(dá)陽(yáng)性率比較，經(jīng)χ2檢驗(yàn)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），癌組織CD10、CD133 和CD157蛋白表達(dá)陽(yáng)性率均高于癌旁組織。見表1。

表1 癌組織與癌旁組織中CD10、CD133和CD157蛋白表達(dá)陽(yáng)性率比較 [n=105，例（%）]

2.3 不同臨床病理特征患者的CD10 蛋白表達(dá)陽(yáng)性率比較

不同性別、年齡、腫瘤直徑、腫瘤部位、臨床分期、浸潤(rùn)深度和分化程度患者的CD10 蛋白表達(dá)陽(yáng)性率比較，經(jīng)χ2檢驗(yàn)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的CD10 蛋白表達(dá)陽(yáng)性率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的CD10 蛋白表達(dá)陽(yáng)性率高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者。見表2。

表2 不同臨床病理特征患者的CD10蛋白表達(dá)陽(yáng)性率比較 例（%）

2.4 不同臨床病理特征患者的CD133蛋白表達(dá)陽(yáng)性率比較

不同性別、年齡、腫瘤直徑、腫瘤部位、臨床分期、浸潤(rùn)深度和分化程度患者的CD133 蛋白表達(dá)陽(yáng)性率比較，經(jīng)χ2檢驗(yàn)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的CD133 蛋白表達(dá)陽(yáng)性率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的CD133 蛋白表達(dá)陽(yáng)性率高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者。見表3。

表3 不同臨床病理特征患者的CD133蛋白表達(dá)陽(yáng)性率比較 例（%）

2.5 不同臨床病理特征患者的CD157蛋白表達(dá)陽(yáng)性率比較

不同性別、年齡、腫瘤直徑、腫瘤部位、臨床分期、浸潤(rùn)深度和分化程度患者的CD157 蛋白表達(dá)陽(yáng)性率比較，經(jīng)χ2檢驗(yàn)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的CD157 蛋白表達(dá)陽(yáng)性率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的CD157 蛋白表達(dá)陽(yáng)性率高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者。見表4。

2.6 CD10、CD133 和CD157 蛋白表達(dá)對(duì)患者生存時(shí)間的影響

隨訪至2020年9月30日，中位生存時(shí)間35 個(gè)月。CD10、CD133 和CD157 蛋白表達(dá)陽(yáng)性患者累積生存率優(yōu)于蛋白表達(dá)陰性患者（χ2=5.271、4.892 和6.719，P=0.016、0.023 和0.003）。見圖4～6。

2.7 影響胃癌患者預(yù)后的因素

2.7.1 單因素分析各變量賦值情況見表5。經(jīng)單因素Cox 回歸分析，結(jié)果顯示年齡[=1.783（95% CI：1.324，2.743）]、臨床分期[=1.435（95%CI：1.089，2.453）]、浸 潤(rùn) 深 度[=1.682（95% CI：1.197，2.789）]、淋 巴 結(jié) 轉(zhuǎn) 移[=2.435（95% CI：1.627，3.829）]、CD10 陽(yáng)性表達(dá)[=1.546（95% CI：1.021，2.109）]、CD133 陽(yáng)性表達(dá)[=1.820（95% CI：1.243，3.256）]和CD157 陽(yáng) 性 表 達(dá)[=2.091（95%CI：1.498，3.791）]是影響胃癌患者預(yù)后的因素（P＜0.05）。見表6。

2.7.2 多因素分析以單因素Cox 回歸分析中差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的因素為自變量（年齡、臨床分期、浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、CD10 陽(yáng)性表達(dá)、CD133 陽(yáng)性表達(dá)和CD157 陽(yáng)性表達(dá)）做逐步多因素Cox 回歸分析，引入水準(zhǔn)為0.05，剔除水準(zhǔn)為0.10。結(jié)果顯示：年齡[=1.628（95% CI：1.218，2.940）]、臨床分期[=1.982（95%CI：1.435，3.495）]、浸潤(rùn)深度[=2.653（95%CI：1.782，4.213）]、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移[=3.287（95%CI：1.989，5.456）]、CD10 陽(yáng)性表達(dá)[=2.081（95% CI：1.297，3.241）]、CD133 陽(yáng)性表達(dá)[=1.768 （95% CI：1.190，2.879）]和CD157 陽(yáng)性表達(dá)[=2.463（95%CI：1.797，4.165）]是影響胃癌患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。見表7。

表4 不同臨床病理特征患者的CD157蛋白表達(dá)陽(yáng)性率比較 例（%）

圖4 不同CD10蛋白表達(dá)患者的生存曲線

圖5 不同CD133蛋白表達(dá)患者的生存曲線

圖6 不同CD157蛋白表達(dá)患者的生存曲線

表5 賦值表

表6 胃癌預(yù)后因素的單因素Cox回歸分析參數(shù)

表7 胃癌預(yù)后因素的多因素Cox回歸分析參數(shù)

3 討論

胃癌是嚴(yán)重危害人類健康的一種惡性腫瘤，具有較高的發(fā)病率和病死率[7]。腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移、浸潤(rùn)和生長(zhǎng)主要是細(xì)胞外基質(zhì)、間質(zhì)細(xì)胞及腫瘤細(xì)胞共同作用的結(jié)果[8-9]。而腫瘤的生物學(xué)特性主要由抑癌基因和癌基因調(diào)控，同時(shí)依賴于間質(zhì)形成的微環(huán)境[10-11]。尋找有效的診斷和治療胃癌的方法尤為重要。

CD10 蛋白作為腫瘤-間質(zhì)相互作用的一種參與因子，主要與細(xì)胞表面糖蛋白金屬酶結(jié)合，該蛋白具有中性肽鏈內(nèi)切酶的功能，并且在腫瘤發(fā)生、發(fā)展中具有重要作用[12]。CD10 蛋白主要通過調(diào)節(jié)局部肽濃度，介導(dǎo)細(xì)胞對(duì)激素產(chǎn)生應(yīng)答，因此許多肽敏感細(xì)胞或激素敏感細(xì)胞及相應(yīng)的腫瘤均表達(dá)CD10 抗原[13]。CD10 蛋白能調(diào)節(jié)細(xì)胞的生長(zhǎng)和分化，從而改變細(xì)胞間的信號(hào)通路[14]。本研究結(jié)果顯示，癌組織中CD10 蛋白表達(dá)陽(yáng)性率高于癌旁組織，由此可見胃癌患者CD10 蛋白高表達(dá)；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者CD10 蛋白表達(dá)陽(yáng)性率高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者，且淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移為影響胃癌患者預(yù)后的重要因素，因此CD10 蛋白表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和預(yù)后密切相關(guān)。

CD133 是戊聚糖跨膜糖蛋白，相對(duì)分子質(zhì)量為120 000 kD。CD133 蛋白最初被認(rèn)定為造血干細(xì)胞的特異性標(biāo)志[15]。近年來，有研究發(fā)現(xiàn)CD133 的表達(dá)與胃腸道腫瘤的臨床病理特征及預(yù)后有關(guān)，且隨著CD133 表達(dá)升高，腫瘤的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移發(fā)生率升高，浸潤(rùn)深度加深，分化程度降低[16-17]。缺氧與腫瘤的轉(zhuǎn)移、進(jìn)展關(guān)系密切，其能夠通過上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化過程調(diào)控關(guān)鍵因子，影響腫瘤進(jìn)展。CD133可通過促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的葡萄糖攝取過程，引起缺氧，誘導(dǎo)缺氧誘導(dǎo)因子1α 的產(chǎn)生，刺激腫瘤血管形成，從而提高腫瘤細(xì)胞的侵襲、轉(zhuǎn)移能力。上述機(jī)制在腫瘤細(xì)胞血管形成及能量代謝過程中均發(fā)揮重要作用[18-19]。本研究結(jié)果顯示，癌組織中CD133 蛋白表達(dá)陽(yáng)性率高于癌旁組織，由此可見胃癌患者CD133 蛋白高表達(dá)；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者CD133 蛋白表達(dá)陽(yáng)性率高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者，且淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移為影響胃癌患者預(yù)后的重要因素，因此CD133 蛋白表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和預(yù)后密切相關(guān)。

CD157 作為多功能分子，具有胞外酶和細(xì)胞受體的雙重活性，可與其他跨膜分子相互作用，介導(dǎo)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。有研究顯示，CD157 參與卵巢癌、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等多種疾病的發(fā)生、發(fā)展[20]。本研究結(jié)果顯示，癌組織中CD157 蛋白表達(dá)陽(yáng)性率高于癌旁組織，由此可見胃癌患者CD157 蛋白高表達(dá)；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者CD157 蛋白表達(dá)陽(yáng)性率高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者，且淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移為影響胃癌患者預(yù)后的重要因素，因此CD157 蛋白表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和預(yù)后密切相關(guān)。

綜上所述，CD10、CD133 和CD157 在胃癌組織中高表達(dá)，且與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和預(yù)后密切相關(guān)。