鄭丹陽(yáng)，石姝彤，李晨露，許信剛，周宏超，拓曉玲，楊程梓，黃光東*，張 琪*

(1.西北農(nóng)林科技大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，陜西楊凌 712100；2.陜西中科基因檢測(cè)技術(shù)有限公司，陜西西安 710010)

口蹄疫、豬繁殖與呼吸綜合征、豬瘟、豬偽狂犬病、豬圓環(huán)病毒病是當(dāng)前規(guī)?；i場(chǎng)危害較為嚴(yán)重的疫病，給養(yǎng)豬業(yè)帶來較大的經(jīng)濟(jì)損失?？谔阋呤且环N人畜共患病，傳播速度快、傳播途徑廣，仔豬的死亡率極高，疫區(qū)發(fā)病率可高達(dá) 100%，顯著特征為豬蹄、口腔黏膜、乳房及乳頭等處形成水泡并逐步潰爛，口蹄疫是危害世界各國(guó)畜牧業(yè)最嚴(yán)重的疫病之一[1-3]；豬繁殖與呼吸綜合征又稱豬藍(lán)耳病，該病對(duì)豬群的繁殖功能有著很大的影響，仔豬斷乳前后最容易發(fā)生該病，死亡率能夠達(dá)到40%～100%[4-5]；豬瘟主要經(jīng)由病豬的尿液、糞便以及各種分泌物散播病毒，從而感染不同年齡的豬群，該病具有較高傳染性和致死性，對(duì)養(yǎng)豬業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損害[6-7]；豬在感染偽狂犬病毒后能引起發(fā)熱、母豬流產(chǎn)、仔豬神經(jīng)癥狀等臨床表現(xiàn)，初生仔豬感染率和死亡率可達(dá)100%[8]。隨著養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展，偽狂犬病不斷蔓延擴(kuò)大，給養(yǎng)豬業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失[9-10]；豬圓環(huán)病毒2型造成的危害也十分嚴(yán)重，雖然母豬可以產(chǎn)仔，但大多數(shù)不能存活，出現(xiàn)斷代現(xiàn)象，該病也成為影響?zhàn)B豬業(yè)的主要疫病之一[11-12]。本研究通過對(duì)陜西省部分規(guī)模化豬場(chǎng)送檢的20 233份血清樣品和1 633份病料樣品進(jìn)行檢測(cè)，了解5種疫病疫苗免疫后抗體水平情況及病原感染情況，為陜西省豬場(chǎng)疫病的防控提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 樣品采集 2019年1月至2019年12月由陜西省部分規(guī)?；i場(chǎng)送檢的20 233份血清樣品和1 633份病料。每份樣品需進(jìn)行記錄并編號(hào)，置于-20℃保存?zhèn)溆?表1)。

表1血清樣品采集情況

1.1.2 主要試劑 口蹄疫抗體檢測(cè)試劑盒、豬繁殖與呼吸綜合征抗體檢測(cè)試劑盒、豬瘟抗體檢測(cè)試劑盒、偽狂犬病病毒gB抗體檢測(cè)試劑盒均購(gòu)自IDEXX公司；豬圓環(huán)病毒2型抗體檢測(cè)試劑盒購(gòu)自深圳芬德生物技術(shù)有限公司；DNA提取試劑盒、Trizol試劑、反轉(zhuǎn)錄試劑盒購(gòu)自天根生化科技有限公司，其他試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。

1.1.3 主要儀器設(shè)備 PCR儀(K960)，力康生物醫(yī)療科技控股有限公司產(chǎn)品；電泳儀(DYY-6C)北京市六一儀器廠；凝膠成像分析系統(tǒng)(GenoSens 1800)北京賽智創(chuàng)業(yè)科技有限公司產(chǎn)品；臺(tái)式離心機(jī)(H1650-W)，湖南湘儀實(shí)驗(yàn)室儀器開發(fā)有限公司產(chǎn)品；高速冷凍離心機(jī)(D3024R)，美國(guó)貝克曼股份有限公司產(chǎn)品；全自動(dòng)制冰碎冰機(jī)，常熟市凌科電器有限公司；超凈工作臺(tái)(VD-1300)蘇潔凈化技術(shù)有限公司產(chǎn)品；電子天平(DTC)，亞津電子科技公司產(chǎn)品。

1.2 方法

1.2.1 5種疫病抗體的檢測(cè) 口蹄疫、豬繁殖與呼吸綜合征、豬瘟、偽狂犬病病毒gB抗體檢測(cè)按照IDEXX公司ELISA抗體檢測(cè)試劑盒說明書進(jìn)行操作和結(jié)果判定；豬圓環(huán)病毒2型抗體檢測(cè)按照深圳芬德生物技術(shù)有限公司抗體檢測(cè)試劑盒說明書進(jìn)行操作和結(jié)果判定。

1.2.2 病毒的PCR/RT-PCR檢測(cè)

1.2.2.1 病毒DNA的提取 將組織剪碎，研磨，反復(fù)凍融3次，12 000 r/min離心2 min，取上清200 μL于EP管中，按照天根生化科技有限公司DNA提取試劑盒說明書提取病毒基因組DNA，將獲得的DNA溶于20 μL TE中。

1.2.2.2 病毒RNA的提取和cDNA的合成 將組織剪碎，研磨，反復(fù)凍融3次，12 000 r/min離心2 min，取上清200 μL于EP管中，按照Trizol試劑使用說明提取病毒基因組RNA，再按照天根生化科技有限公司反轉(zhuǎn)錄試劑盒說明書合成cDNA，將獲得的cDNA溶于20 μL無RNA酶水中。

1.2.2.3 病毒的檢測(cè) 口蹄疫病毒(FMDV)、豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)、豬瘟病毒(CSFV)、偽狂犬病病毒(PRV)和豬圓環(huán)病毒2型(PCV2)5種病原檢測(cè)引物由陜西中科基因檢測(cè)技術(shù)有限公司提供，反應(yīng)體系和反應(yīng)條件參照文獻(xiàn)[13]操作。

2 結(jié)果

2.1 疫苗免疫后5種病毒病血清抗體檢測(cè)結(jié)果

用于檢測(cè)口蹄疫抗體的4 089份血清樣品中，陽(yáng)性數(shù)為3 136份，陽(yáng)性率為76.69%；用于檢測(cè)豬繁殖與呼吸綜合征抗體的5516份血清樣品中，陽(yáng)性數(shù)為4 692份，陽(yáng)性率為85.06%；用于檢測(cè)豬瘟抗體的4 881份血清樣品中，陽(yáng)性數(shù)為4 300份，陽(yáng)性率為88.10%；用于檢測(cè)偽狂犬病病毒gB抗體的2810份血清樣品中，陽(yáng)性數(shù)為2 367份，陽(yáng)性率為84.23%；用于檢測(cè)豬圓環(huán)病毒2型抗體的420份血清樣品中，陽(yáng)性數(shù)為399份，陽(yáng)性率為95%(表2)。

2.2 未免疫疫苗的5種病毒病血清抗體檢測(cè)結(jié)果

用于檢測(cè)口蹄疫抗體的1 065份血清樣品中，陽(yáng)性數(shù)為450份，陽(yáng)性率為42.25%；用于檢測(cè)豬繁殖與呼吸綜合征抗體的743份血清樣品中，陽(yáng)性數(shù)為210份，陽(yáng)性數(shù)為28.26%；用于檢測(cè)豬瘟抗體的284份血清樣品中，陽(yáng)性數(shù)為136份，陽(yáng)性率為47.89%；用于檢測(cè)偽狂犬病病毒gB抗體的332份血清樣品中，陽(yáng)性數(shù)為72份，陽(yáng)性率為21.69%；用于檢測(cè)豬圓環(huán)病毒2型抗體的93份血清樣品中，陽(yáng)性數(shù)為82份，陽(yáng)性率為88.17%(表3)。

表2疫苗免疫后5種病毒病血清抗體檢測(cè)結(jié)果

表3未免疫疫苗的5種病毒病血清抗體檢測(cè)結(jié)果

2.3 5種病毒病病原檢測(cè)結(jié)果

用于檢測(cè)口蹄疫的226份樣品中，陽(yáng)性數(shù)為1份，陽(yáng)性率為0.44%；用于檢測(cè)豬繁殖與呼吸綜合征的654份樣品中，陽(yáng)性數(shù)為71份，陽(yáng)性率為10.86%；用于檢測(cè)豬瘟的328份樣品中，陽(yáng)性數(shù)為31份，陽(yáng)性率為9.45%；用于檢測(cè)偽狂犬的144份樣品中，陽(yáng)性數(shù)為4份，陽(yáng)性率為2.78%；用于檢測(cè)豬圓環(huán)病毒2型的281份樣品中，陽(yáng)性數(shù)為40份，陽(yáng)性率為14.23%(表4)。

3 討論

本研究對(duì)2019年陜西省20 233份血清樣品和1 633份病料樣品進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果表明，F(xiàn)MD、PRRS、CSF、PR-gB、PCV2疫苗免疫后抗體陽(yáng)性率均較高，其中PCV2免疫抗體陽(yáng)性率最高(95%)，F(xiàn)MD免疫抗體陽(yáng)性率最低(76.69%)，但也符合國(guó)家免疫要求(70%以上)；PCV2野毒感染抗體陽(yáng)性率高達(dá)88.17%，其次是CSF和FMD，野毒感染抗體陽(yáng)性率分別為47.89%和42.25%；PRRS和PR-gB野毒感染抗體陽(yáng)性率相對(duì)來說最低，分別為28.26%和21.69%，但均達(dá)到20%以上?？梢钥闯觯琍CV2、CSF、FMD、PRRS和PR野毒感染情況嚴(yán)重，應(yīng)該加強(qiáng)管理，定期免疫，以達(dá)到凈化目的。5種病毒抗原檢測(cè)結(jié)果顯示，PCV2、PRRSV和CSFV陽(yáng)性率較高，分別為14.23%、10.86%和9.45%，說明PCV2、PRRSV和CSFV在陜西省的流行情況較為嚴(yán)重，應(yīng)該加以重視。

針對(duì)本次檢測(cè)結(jié)果，相關(guān)豬場(chǎng)需要積極采取措施來降低PCV2、CSFV、FMDV、PRRSV和PRV的感染率。必須做好防疫監(jiān)測(cè)，對(duì)豬群進(jìn)行血清學(xué)調(diào)查，有針對(duì)性地預(yù)防接種，對(duì)于健康豬群的豬場(chǎng)最好采取自繁自養(yǎng)，如果必需進(jìn)行引種時(shí)，應(yīng)對(duì)引種豬場(chǎng)進(jìn)行考察，在充分了解之后方可引種，且豬群到場(chǎng)之后必須隔離1個(gè)月，在該過程中應(yīng)進(jìn)行防疫，經(jīng)過檢測(cè)確認(rèn)合格后才可作為留種[14]；其次要加強(qiáng)豬場(chǎng)日常管理和飼養(yǎng)管理，科學(xué)的飼養(yǎng)管理是養(yǎng)豬生產(chǎn)的關(guān)鍵，可以提高豬群的生產(chǎn)力，豬場(chǎng)應(yīng)配有消毒設(shè)備，且豬場(chǎng)應(yīng)適當(dāng)通風(fēng)透氣，保持豬場(chǎng)衛(wèi)生良好、干燥舒適，營(yíng)造冬暖夏涼的環(huán)境，還應(yīng)確保飼料營(yíng)養(yǎng)水平合理，促使豬群健康生長(zhǎng)[15-16]。近年來FMD、PRRS、CSF、PR、PCV仍是影響?zhàn)B豬業(yè)發(fā)展的重要因素，做好免疫預(yù)防工作，定期檢測(cè)抗體水平，制定更加完善的防控措施，仍是規(guī)模化豬場(chǎng)疫病防控工作的重中之重。