李肖肖， 陸大祥， 王華東， 戚仁斌， 張珂珂， 王達(dá)安△

（1暨南大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病理生理學(xué)系，國(guó)家中醫(yī)藥管理局病理生理重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東廣州510632；2佛山市第二人民醫(yī)院護(hù)理部，廣東佛山528200）

腎間質(zhì)纖維化（renal interstitial fibrosis，RIF）是多種慢性腎臟疾?。╟hronic kidney disease，CKD）發(fā)展到終末期腎?。╡nd-stage renal disease，ESRD）的共同病理基礎(chǔ)，有效干預(yù)RIF 的發(fā)生發(fā)展是控制CKD 進(jìn)展、延緩腎功能衰竭發(fā)生的關(guān)鍵[1]。疾病蛋白質(zhì)組學(xué)（disease proteomics）通過(guò)全面、系統(tǒng)地觀察疾病狀態(tài)下蛋白質(zhì)組（proteome）的變化規(guī)律來(lái)闡明疾病發(fā)生機(jī)制，并發(fā)現(xiàn)疾病標(biāo)志物和干預(yù)新靶點(diǎn)。本研究采用雙向凝膠電泳（two-dimensional gel electrophoresis，2-DE）和質(zhì)譜（mass spectrometry，MS）技術(shù)，分析大鼠單側(cè)輸尿管梗阻（unilateral ureteral obstruction，UUO）所致RIF 模型的蛋白質(zhì)組表達(dá)模式的變化情況，以期發(fā)掘出有助于探討RIF 發(fā)病規(guī)律的有價(jià)值信息。

材料和方法

1 材料與儀器

甘氨酸、十二烷基硫酸鈉、丙烯酰胺、N，N，N"，N"-四甲基乙二胺、碘乙酰胺、Bradford 法和BCA 法蛋白質(zhì)定量測(cè)定試劑盒及15～150 kD Protein Ladder（Bio-Rad）；二硫蘇糖醇和過(guò)硫酸銨（Amresco）；IPG非線性（pH 4～7，24 cm）干膠條（GE）；考馬斯亮藍(lán)R350（上海生物工程股份有限公司）；ECL 發(fā)光液（Millipore）；β-tubulin 單抗和膜聯(lián)蛋白A5（annexin A5）單抗（Abcom）；HRP 標(biāo)記的抗兔和抗鼠IgG 抗體（上海碧云天生物科技公司）。

5427 R 高速低溫離心機(jī)（Eppendorf）；MBX51 倒置熒光顯微鏡（Olympus）；RM2235 切片機(jī)（Leica）；JB-L7 組織包埋機(jī)（武漢俊杰電子有限公司）；KZ-Ⅱ電動(dòng)組織勻漿器（武漢塞維爾科技有限公司）；手術(shù)器械（上海醫(yī)療器械有限公司）；Ettan IP Gphor 3 等電聚焦系統(tǒng)、SE 600 垂直電泳系統(tǒng)和ImageJ 2-DE 分析軟件（GE Healthcare）；GS800凝膠掃描儀（Bio-Rad）；4800串聯(lián)飛行時(shí)間質(zhì)譜儀（Applied Biosystems）。

2 方法

2.1 UUO大鼠RIF模型構(gòu)建及腎臟組織病理分析

2.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與分組 雄性Wistar大鼠48只，體質(zhì)量180～220 g，購(gòu)于北京華阜康實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司[許可證號(hào)為SCXK（魯）2014-00070]，飼養(yǎng)于暨南大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)管理中心SPF 動(dòng)物飼養(yǎng)房：室溫（23±2）℃，相對(duì)濕度40%～70%，標(biāo)準(zhǔn)顆粒飼料喂養(yǎng)，自由進(jìn)食飲水。48 只大鼠隨機(jī)分為3 組：正常對(duì)照組（control 組）6 只、假手術(shù)組（sham 組）6 只和UUO 模型組（UUO組）36只。

2.1.2 UUO大鼠模型制備與腎臟組織標(biāo)本取材[2]UUO 組大鼠以2%戊巴比妥鈉（20 mg/kg 體重）腹腔注射麻醉后，仰臥固定于手術(shù)臺(tái)上，手術(shù)區(qū)用脫毛膏脫毛，75%乙醇消毒皮膚，腹腔中線中下段作一長(zhǎng)2～3 cm 的縱向皮膚切口，并逐層分離腹壁，輕輕分離右側(cè)輸尿管，用3 號(hào)手術(shù)絲線于輸尿管上下段兩處各作1 道結(jié)扎，逐層縫合腹壁切口，無(wú)菌敷料包裹傷口，待動(dòng)物清醒后放回飼養(yǎng)籠。control 組不作任何手術(shù)處理；sham 組開(kāi)腹后僅進(jìn)行右側(cè)輸尿管鈍性分離，不予結(jié)扎，其他步驟同UUO 組。所有大鼠術(shù)后均肌肉注射獸用頭孢曲松Ⅲ（0.1 mg/kg），每12 h 注射1 次，連續(xù)使用3 d，以預(yù)防術(shù)后感染。UUO 大鼠在術(shù)后第3 天、第7 天、第11 天、第14 天、第21 天和第28天分別隨機(jī)選取6只，處死后取右腎上極組織，浸泡在4%多聚甲醛中固定，作HE 染色及Masson 染色進(jìn)行病理組織學(xué)分析；取右腎下極組織，在適量RIPA 裂解液中勻漿，12 000 r/min 離心20 min，取上清液，采用BCA 法進(jìn)行蛋白定量，加入5×蛋白上樣緩沖液混勻，煮沸10 min，離心5 s后-20℃保存，以備Western blot 分析。control 組和sham 組分別于飼養(yǎng)或手術(shù)后第28天按相同方法取腎臟標(biāo)本。

2.1.3 腎臟組織切片制備及觀察 腎組織標(biāo)本經(jīng)4%多聚甲醛固定過(guò)夜，梯度乙醇脫水、二甲苯透明處理后行石蠟包埋，制成4 μm 切片，分別進(jìn)行HE 染色和Masson 染色。HE 染色：蘇木素水溶液染色5 min，自來(lái)水沖洗1 min，1%鹽酸乙醇分化2 s，自來(lái)水沖洗1 min，伊紅水溶液染色5 min，自來(lái)水沖洗1 min，用濃度由低到高的乙醇脫水處理，二甲苯處理使組織透明，中性樹(shù)膠封片；置于倒置顯微鏡下觀察、采集圖像。Masson 染色：蘇木素染色5 min，麗春紅酸性染液染色10 min，苯胺藍(lán)染液染色6 min；中性樹(shù)膠封片；置于倒置顯微鏡下觀察、采集圖像。

2.2 差異蛋白質(zhì)組學(xué)分析方法

2.2.1 實(shí)驗(yàn)標(biāo)本采集、蛋白質(zhì)提取和定量 按2.1.1方法制備UUO模型，共3只大鼠，術(shù)后7 d處死動(dòng)物取雙腎組織標(biāo)本，以左側(cè)健腎（non-obstructive kidney）與右側(cè)梗阻腎（obstructed kidney）作對(duì)照行2-DE 分析。腎臟組織加入適量全細(xì)胞裂解液，用勻漿器勻漿，冰浴超聲裂解，4℃、14 000×g離心40 min，取上清；采用Bradford法進(jìn)行蛋白質(zhì)定量，-80℃低溫保存。

2.2.2 2-DE分析方法 一向等點(diǎn)聚焦電泳：干膠條水化：將樣品溶液加入水化盤，然后放入干膠條浸泡12 h；膠條上槽：等電聚焦盤內(nèi)加6 mL 覆蓋油，將泡好的膠條放入盤內(nèi)；上樣：上樣成分包括樣品蛋白、1%二硫蘇糖醇、1% IPG Buffer、溴酚藍(lán)，總體積460 μL，蛋白上樣量為1 200 μg；依次等電聚焦：500 V×1 h、1 000 V×1 h、10 000 V×3 h、10 000 V×4 h，總電壓約60 kV。二向SDS-PAGE：按說(shuō)明書安裝制膠架和電泳槽，按12.5%SDS-PAGE 凝膠配方進(jìn)行配膠，加入過(guò)硫酸銨、N，N，N"，N"-四甲基乙二胺和正丁醇，灌膠，凝固過(guò)夜。膠條平衡：平衡管先后加入含二硫蘇糖醇平衡液及含碘乙酰胺平衡液，各平衡15 min。取出平衡后膠條，放入灌制好凝膠的玻璃板內(nèi)，緊貼膠面，加上槽液到上下槽液面相平，以2 W/gel×1 h、17 W/gel×4.5 h 電泳（溴酚藍(lán)跑到底）?？捡R斯亮藍(lán)染色：取出電泳后凝膠，放入250 mL 固定液中固定10 min，然后將凝膠放入盛有考馬斯亮藍(lán)的染色盤中，搖床上室溫染色3 h。上述實(shí)驗(yàn)重復(fù)3 次。凝膠圖像的掃描和分析：用凝膠掃描儀對(duì)染色后的凝膠進(jìn)行掃描，獲得凝膠電泳圖像，通過(guò)ImageJ 2-DE 軟件進(jìn)行蛋白質(zhì)差異表達(dá)分析，選取在不同樣本中表達(dá)差異均超過(guò)1.5倍的蛋白點(diǎn)作為差異表達(dá)蛋白質(zhì)。

2.2.3 差異蛋白質(zhì)的MS 鑒定 選取19 個(gè)差異倍數(shù)顯著、斑點(diǎn)清晰的差異蛋白質(zhì)點(diǎn)，切膠后使用胰蛋白酶進(jìn)行膠內(nèi)酶解，酶解產(chǎn)物采用基質(zhì)輔助激光解吸附電離-飛行時(shí)間質(zhì)譜法（matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry，MALDI-TOF-MS）進(jìn)行分析。MS 獲得的肽質(zhì)量指紋譜通過(guò)Mascot 軟件在NCBI 蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫(kù)中進(jìn)行檢索，選擇種屬為大鼠。

2.3 Western blot 分析 取2.1.2 方法制備的蛋白質(zhì)提取液進(jìn)行SDS-PAGE：5%濃縮膠電泳60 V×25 min，12%分離膠電泳120 V×1 h，至溴酚藍(lán)到達(dá)膠的底端附近終止。電泳后凝膠以350 mA×1 h 轉(zhuǎn)至PVDF 膜；PVDF 膜用5%牛血清白蛋白封閉，于常溫下?lián)u床振蕩孵育2 h，TBST 洗膜3 次，每次5 min；加入抗annexin A5 抗體（1∶500）或內(nèi)參照β-tubulin 抗體（1∶1 000）常溫下?lián)u床振蕩孵育2 h，TBST 洗膜3次，每次5 min；加入HRP標(biāo)記的II抗（1∶5 000），常溫振蕩孵育1 h，TBST 洗膜3 次，每次5 min；加入配制好的ECL 化學(xué)發(fā)光液，放入暗匣中曝光，再進(jìn)行顯影、定影；利用ImageJ 軟件對(duì)顯影蛋白條帶進(jìn)行灰度分析。

3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（mean±SD）表示。采用SPSS 22.0 進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。多組間比較采用單因素方差分析（one-way ANOVA），兩兩比較采用Bonferroni法。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié)果

1 各組大鼠腎組織切片HE染色觀察結(jié)果

光鏡下觀察可見(jiàn)，與control 組相比，sham 組腎組織無(wú)明顯變化，腎小球形態(tài)正常、無(wú)萎縮，腎小管排列整齊、無(wú)擴(kuò)張，腎小管上皮細(xì)胞形態(tài)規(guī)整，腎間質(zhì)未見(jiàn)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)和纖維增生；在各UUO 組梗阻側(cè)腎臟可見(jiàn)不同程度的組織病變，其中，術(shù)后第3 天僅出現(xiàn)腎小管擴(kuò)張，腎小球無(wú)明顯改變，無(wú)明顯間質(zhì)增生；術(shù)后第7 天除腎小管擴(kuò)張外，腎間質(zhì)有少量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)及極輕微增生，未見(jiàn)明顯腎小球變化；術(shù)后第11 天腎小管進(jìn)一步擴(kuò)張，間質(zhì)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)加重，腎間質(zhì)出現(xiàn)輕度增生，腎小球結(jié)構(gòu)尚完整；術(shù)后第14、21 和28 天，腎小球逐漸變形、萎縮，腎小管上皮細(xì)胞萎縮或消失，術(shù)后第14天RIF明顯，術(shù)后第21和28天出現(xiàn)廣泛大面積的RIF，見(jiàn)圖1。

2 各組大鼠腎組織切片Masson染色觀察結(jié)果

光鏡下觀察可見(jiàn)，與control 組相比，sham 組腎組織無(wú)明顯變化，腎小管排列整齊、無(wú)擴(kuò)張，腎小管上皮細(xì)胞形態(tài)規(guī)整，腎間質(zhì)未見(jiàn)增生、無(wú)明顯藍(lán)染，腎小球形態(tài)正常；在各UUO組梗阻側(cè)腎臟所見(jiàn)與HE染色結(jié)果一致，逐漸出現(xiàn)腎小管擴(kuò)張，腎小管上皮細(xì)胞萎縮，腎小球變形、萎縮，腎間質(zhì)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)、纖維組織增生，代表腎間質(zhì)纖維增生的藍(lán)染逐漸加重；其中，術(shù)后第3 天腎間質(zhì)無(wú)明顯藍(lán)染，術(shù)后第7 天出現(xiàn)輕微腎間質(zhì)藍(lán)染，表明腎間質(zhì)有少量膠原纖維沉積，術(shù)后第11 天腎間質(zhì)增生藍(lán)染進(jìn)一步加重，術(shù)后第14 天開(kāi)始腎間質(zhì)增生藍(lán)染明顯，術(shù)后第21 和28天出現(xiàn)大面積腎間質(zhì)增生藍(lán)染，表明腎間質(zhì)膠原纖維廣泛沉積，見(jiàn)圖2。

Figure 1. Pathological sections of kidney tissue with HE staining in different groups.圖1 各組大鼠腎臟組織切片HE染色光鏡下觀察結(jié)果

Figure 2. Pathological sections of kidney tissue with Masson staining in different groups.圖2 各組大鼠腎臟組織切片Masson染色光鏡下觀察結(jié)果

3 UUO大鼠RIF早期的2-DE分析結(jié)果

將UUO 造模后第7 天的健側(cè)腎（non-obstructive kidney）與梗阻腎（obstructed kidney）的組織蛋白質(zhì)提取液行2-DE 及考馬斯亮藍(lán)染色（圖3），經(jīng)ImageJ 2-DE 圖像分析軟件分析，共獲得重復(fù)出現(xiàn)、表達(dá)量差異≥±1.5 倍的差異蛋白質(zhì)點(diǎn)166 個(gè)。其中，與健側(cè)腎相比，梗阻腎出現(xiàn)上調(diào)蛋白質(zhì)81 個(gè)，下調(diào)蛋白質(zhì)85個(gè)。圖4 為從2-DE 圖像上選取的用于MS 鑒定的19個(gè)差異蛋白質(zhì)點(diǎn)的截圖（每組截圖的左側(cè)為健側(cè)腎，右側(cè)為梗阻腎）。

Figure 3. The two-dimensional gel electrophoresis profiles of the proteins from non-obstructive kidney（A）and obstructed kidney（B）tissues in UUO rats.圖3 UUO大鼠健側(cè)腎與梗阻腎組織蛋白質(zhì)的雙向凝膠電泳結(jié)果

Figure 4. The screenshots of 19 differential proteins chosen for identification by MS. The left image of each pair showed the protein from non-obstructive kidney，while the right one showed the protein from obstructed kidney.圖4 19個(gè)作質(zhì)譜鑒定的差異蛋白質(zhì)截圖

4 差異蛋白質(zhì)的MS分析結(jié)果

19 個(gè)差異蛋白質(zhì)點(diǎn)的MALDE-TOP-MS 結(jié)果經(jīng)Mascot 軟件查詢蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫(kù)，獲得蛋白質(zhì)的基本信息，見(jiàn)表1；經(jīng)UniProt 數(shù)據(jù)庫(kù)及相關(guān)研究文獻(xiàn)檢索到相應(yīng)蛋白質(zhì)的功能注釋，見(jiàn)表2。

5 Western blot分析的結(jié)果

Western bolt 分析結(jié)果顯示，sham 組annexin A5蛋白有少量表達(dá)，UUO 各組annexin A5 蛋白表達(dá)量均顯著高于sham 組（P＜0.05），以UUO 術(shù)后第3 天表達(dá)量最高，之后隨著梗阻時(shí)間的延長(zhǎng)而逐漸下降，但仍顯著高于sham組，見(jiàn)圖5。

討論

RIF 通常呈慢性、進(jìn)行性發(fā)展，當(dāng)發(fā)展到一定階段將難以逆轉(zhuǎn)，因此，早期的干預(yù)對(duì)延緩其進(jìn)展極為重要。蛋白質(zhì)作為生命活動(dòng)的主要參與者，是構(gòu)成動(dòng)態(tài)生命過(guò)程的基礎(chǔ)，許多疾病的發(fā)生與蛋白質(zhì)異常有著密切的關(guān)系；眾多細(xì)胞受體、細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子、酶等蛋白質(zhì)已成為開(kāi)發(fā)藥物的重要靶點(diǎn)；差異蛋白質(zhì)組學(xué)具有傳統(tǒng)蛋白質(zhì)研究方法無(wú)法比擬的高通量分析能力，已成為發(fā)現(xiàn)疾病相關(guān)蛋白質(zhì)的強(qiáng)有力篩選工具。利用差異蛋白質(zhì)組學(xué)方法分析RIF 早期的蛋白質(zhì)組表達(dá)模式變化，將有助于發(fā)掘出闡明其發(fā)病機(jī)制的有用信息，進(jìn)而為開(kāi)發(fā)出新的干預(yù)策略提供重要的思路。

表1 差異蛋白質(zhì)的質(zhì)譜鑒定結(jié)果Table 1. Results of mass spectrometry analysis for differential proteins

本研究的UUO 模型病理分析顯示，輸尿管梗阻后7 d的梗阻腎開(kāi)始出現(xiàn)輕微間質(zhì)纖維化，此時(shí)是組織取材和分析RIF 早期蛋白質(zhì)組變化情況的合適時(shí)間點(diǎn)?？紤]到動(dòng)物蛋白質(zhì)組表達(dá)存在著個(gè)體差異，為降低這種因素對(duì)差異蛋白質(zhì)分析可能造成的影響，我們?cè)?-DE 分析中采用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的梗阻側(cè)腎與健側(cè)腎的自身對(duì)照；共找到表達(dá)量差異≥1.5 倍的蛋白質(zhì)差異點(diǎn)166 個(gè)，其中，梗阻腎表達(dá)為上調(diào)的有81個(gè)，下調(diào)有85個(gè)。我們選取了其中19個(gè)較有代表性的蛋白質(zhì)差異點(diǎn)進(jìn)行MS 分析，鑒定出19 種蛋白質(zhì)，它們的功能涉及血管功能調(diào)節(jié)、細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、氧化應(yīng)激、抗氧化反應(yīng)、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)功能調(diào)節(jié)、能量代謝和細(xì)胞凋亡等多個(gè)方面。

隨后，我們采用Western bolt 對(duì)其中一種差異蛋白annexin A5 在UUO 模型的表達(dá)進(jìn)行了驗(yàn)證，觀察了該蛋白在RIF 發(fā)展過(guò)程中的動(dòng)態(tài)變化情況。這是一種含319 個(gè)氨基酸、由單條多肽鏈構(gòu)成的蛋白質(zhì)，屬于鈣依賴性磷脂結(jié)合蛋白家族成員，具有與磷脂酰絲氨酸（phosphatidylserine，PS）特異性結(jié)合的特性，以鈣離子依賴的方式與磷脂膜相結(jié)合；其基因ANXA5定位于4號(hào)染色體長(zhǎng)臂2區(qū)6～8帶處，含13個(gè)外顯子和12 個(gè)內(nèi)含子；是哺乳動(dòng)物細(xì)胞中含量最豐富、分布最廣泛的一種膜聯(lián)蛋白[3-4]。文獻(xiàn)資料顯示，annexin A5 參與許多生理和病理過(guò)程，包括參與凝血、炎癥反應(yīng)、細(xì)胞遷移和增殖、細(xì)胞凋亡和膜運(yùn)輸?shù)然顒?dòng)的調(diào)節(jié)過(guò)程。該蛋白于1985 年被發(fā)現(xiàn)具有抗凝血作用而被命名為抗凝蛋白；它具有抗凝血功能是因?yàn)槟芘cPS 結(jié)合而掩蓋血小板膜上的磷脂結(jié)合位點(diǎn)，阻礙凝血因子與膜磷脂結(jié)合而激活的凝血啟動(dòng)過(guò)程[5]。此外，annexin A5還能下調(diào)組織因子（tissue factor，TF）的表達(dá)[6]。既往研究資料表明，annexin A5參與細(xì)胞凋亡的調(diào)節(jié)過(guò)程；在細(xì)胞凋亡早期，PS 從胞膜內(nèi)側(cè)轉(zhuǎn)位到外側(cè)，PS 的轉(zhuǎn)位會(huì)誘導(dǎo)周圍的吞噬細(xì)胞識(shí)別并清除凋亡細(xì)胞，但annexin A5與PS 有極高的親和力，兩者結(jié)合會(huì)阻礙PS 的暴露，從而抑制吞噬細(xì)胞對(duì)凋亡細(xì)胞的識(shí)別和結(jié)合，進(jìn)而抑制凋亡進(jìn)程[7]。Hawkins 等[8]報(bào)道，敲除ANXA5基因的DT40 細(xì)胞因缺乏annexin A5 而無(wú)法發(fā)生鈣離子依賴的細(xì)胞凋亡，這也說(shuō)明annexin A5 具有抗凋亡活性。還有研究資料顯示，annexin A5 可能參與器官纖維化過(guò)程。Luo 等[9]報(bào)道，硅誘導(dǎo)的肺纖維化小鼠血漿和肺組織annexin A5 含量顯著升高，并證實(shí)硅誘導(dǎo)的肺纖維化小鼠TGF-β1 和IL-1 表達(dá)的上調(diào)是依賴于annexin A5 的，他們認(rèn)為annexin A5 通過(guò)促進(jìn)巨噬細(xì)胞活化、促進(jìn)肺部炎癥而介導(dǎo)肺纖維化的發(fā)生。Buckley 等[10]報(bào)道，特發(fā)性肺纖維化患者肺泡灌洗液中含高濃度可溶性annexin A5，annexin A5的高表達(dá)與肺部炎癥和纖維化存在顯著相關(guān)性；此外，經(jīng)annexin A5 處理的肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞能刺激培養(yǎng)的成纖維細(xì)胞增殖及炎癥因子和促纖維化細(xì)胞因子的釋放。最近有研究報(bào)道，annexin A5 通過(guò)促進(jìn)自噬體向溶酶體的遞送來(lái)促進(jìn)自噬[11]。我們Western bolt 的檢測(cè)結(jié)果表明，UUO 術(shù)后大鼠梗阻腎的annexin A5 表達(dá)明顯高于正常水平，隨后逐漸回降，但在RIF 整個(gè)發(fā)病過(guò)程中始終高于正常水平。然而，目前尚未見(jiàn)有關(guān)annexin A5與RIF 發(fā)病之間相關(guān)性的研究報(bào)道。綜上所述，annexin A5 與細(xì)胞凋亡、炎癥調(diào)節(jié)、肺纖維化發(fā)生等病理生理過(guò)程有一定相關(guān)性，那么annexin A5在RIF 發(fā)病過(guò)程到底起何種作用？為什么annexin A5 的表達(dá)在RIF 早期明顯增高后又有所回降，這種回降對(duì)RIF 的發(fā)生發(fā)展有何意義？annexin A5 這種變化情況是否意味著annexin A5僅僅在RIF早期的某種或某些病理變化中發(fā)揮重要作用，而非在RIF 整個(gè)發(fā)病過(guò)程都起主導(dǎo)作用？這些都很值得深入探討，通過(guò)進(jìn)一步研究或許能揭示RIF發(fā)病過(guò)程中過(guò)去不曾被認(rèn)識(shí)的規(guī)律。

表2 各差異蛋白質(zhì)功能的UniProt數(shù)據(jù)庫(kù)查詢結(jié)果Table 2. Functions of the differential proteins retrieved from UniProt database

Figure 5. Expression level of annexin A5 in each group. Mean±SD. n=3. *P＜0.05 vs sham group.圖5 各組大鼠的annexin A5表達(dá)情況