黃創(chuàng)新 胡鵬

隨著我國醫(yī)療技術(shù)的技術(shù),對常見腫瘤疾病的盡早發(fā)現(xiàn)及治療取得一定成績,其中乳腺癌作為女性群體最為常見的惡性腫瘤疾病,需有效治療,評估預(yù)后［1］。根據(jù)臨床研究可知,HER-2 基因擴增、蛋白過表達乳腺癌患者預(yù)后差,HER-2 和表皮生長因子的基因產(chǎn)物有廣泛的同源性,是表皮生長因子受體家族中表達廣泛的受體,可促進腫瘤新生血管生成,促進腫瘤細胞存活,增加腫瘤細胞的侵襲力,可作為預(yù)測乳腺癌預(yù)后的可靠依據(jù)［2］。為此,本次研究對乳腺癌患者行HER-2基因檢測的意義進行了探討,報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2018 年1 月～2019 年12 月本單位38 例手術(shù)切除乳腺癌石蠟標(biāo)本,檢測HER-2 基因狀態(tài),所有患者均經(jīng)手術(shù)病理確診為原發(fā)性乳腺癌［3］?；颊吣挲g33～75 歲,平均年齡(51.02±3.26)歲,臨床分期：Ⅰ期7 例,Ⅱ期21 例,Ⅲ期10 例。

1.2 方法

1.2.1 IHC 法 蠟塊連續(xù)切片,厚度3 μm,置入60℃烤箱脫蠟,確保本中均有腫瘤組織。65℃烤片2～4 h,浸泡于二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ脫蠟各20 min,100%酒精20 min,95%酒精20 min,85%酒精20 min,水沖,切片置入0.3%過氧化氫-甲醇溶液中,室溫下孵育10 min,水沖,磷酸緩沖液(PBS)洗,置入抗原修復(fù)液內(nèi)微波修復(fù)10 min,PBS 液洗,滴50 μl 山羊血清,室溫下孵育10 min,加一抗,37℃下孵育60 min,PBS 液洗,加物素化二抗工作液,37℃下孵育30 min,PBS 液洗,DAB 顯色3～10 min,水洗、蘇木素淡染,藍化,脫水,透明,中性樹膠封片。

1.2.2 FISH 法 蠟塊切片,取多塊3 μm 切片放置在玻片上,置于65℃下過夜烘烤,浸于二甲苯中室溫脫蠟2 次,各10 min,浸入100%乙醇5 min,100%乙醇2 min,85%乙醇2 min,70%乙醇2 min,浸入去離子水中3 min,50℃下30%(W/V)酸性亞硫酸鈉處理切片20～30 min,2X SSC 溶液中漂洗2 次,0.1 MHCI 浸泡5～10 min。2X SSC 溶液中漂洗2 次,乙醇脫水,丙酮固定,加熱玻片至56℃。標(biāo)記雜交區(qū)域,玻片(73±1)℃變性,乙醇梯度脫水,按照雜交緩沖液7 μl,去離子水1 μl,探針2 μl 配置,探針混合物73℃變性,探針46℃封閉,滴玻片雜交去,封片,42℃雜交。采用甲酰胺洗滌方案,暗處干燥玻片,15 μl DAPI 復(fù)染色,觀察。

1.3 觀察指標(biāo) 分析FISH 法與IHC 法檢測HER-2基因狀態(tài)結(jié)果以及HER-2 基因擴增的相關(guān)因素。HER-2 基因擴增的相關(guān)因素包括乳腺癌患者年齡、月經(jīng)狀態(tài)、腫瘤直徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、臨床分期、組織學(xué)分級、雌激素受體、孕激素受體。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS20.0 統(tǒng)計學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)。計數(shù)資料以率(%)表示,采用χ2檢驗。P＜0.05 表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 FISH 法與IHC 法檢測HER-2 基因狀態(tài)結(jié)果分析 FISH 法陽性檢出率44.74%(17/38) 與IHC 法的63.16%(24/38)比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=2.595,P＞0.05)。見表1。

2.2 HER-2 基因擴增相關(guān)因素分析 HER-2 基因擴增患者與HER-2 基因未擴增患者的年齡、雌激素受體情況比較,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。HER-2 基因擴增患者與HER-2 基因未擴增患者的月經(jīng)狀態(tài)、腫瘤直徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期、組織學(xué)分級、孕激素受體情況比較,差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。見表2。

表1 FISH 法與IHC 法檢測HER-2 基因狀態(tài)結(jié)果分析(n)

表2 HER-2 基因擴增相關(guān)因素分析(n)

3 討論

近年來我國乳腺癌檢出率明顯增加,病死率高,備受女性群體重視［4］。為實現(xiàn)對乳腺癌患者的有效治療,需明確預(yù)后因素,針對性制定治療方案,評估治療效果,而預(yù)后因素與腫瘤生長及轉(zhuǎn)移潛能密切相關(guān),包含腫瘤直徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、臨床分期、組織學(xué)分級、雌、孕激素受體等,其中HER-2 屬于預(yù)測乳腺癌預(yù)后的標(biāo)記物［5,6］。近年來隨著對HER-2 研究的深入,發(fā)現(xiàn)通過明確HER-2 基因擴增和蛋白過表達評估患者預(yù)后,因此臨床加強FISH 法和IHC 法檢測HER-2 基因HER-2 屬于絡(luò)氨酸激酶受體,對細胞的分裂和生長、細胞生長因子信號傳導(dǎo)具有重要作用,導(dǎo)致信號傳導(dǎo)途徑異常,促使乳腺癌生長和增殖［7］。若HER-2 基因過度表達,則提示乳腺癌患者病情進展快,癌細胞易轉(zhuǎn)移,易復(fù)發(fā),預(yù)后較差。HER-2 定位于染色體17Q21.及活化后傳導(dǎo)致分裂信號,在許多腫瘤細胞中呈高表達。正常細胞中有2 個HER-2 基因,細胞膜上5 萬個蛋白,若HER-2 基因擴增呆滯蛋白過表達,則細胞膜的膜受體數(shù)量達到1 百萬個［8,9］。而且HER-2 的異二聚體靜若表皮生長因子受體(EGFR)與cabl 的偶聯(lián),EGFR 在細胞膜過度表達,加速細胞增殖,促使腫瘤形成及生長［10］。本次研究結(jié)果顯示,FISH 法陽性檢出率44.74%(17/38)與IHC 法的63.16%(24/38)比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=2.595,P＞0.05)。HER-2 基因擴增患者與HER-2 基因未擴增患者的年齡、雌激素受體情況比較,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。HER-2 基因擴增患者與HER-2 基因未擴增患者的月經(jīng)狀態(tài)、腫瘤直徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期、組織學(xué)分級、孕激素受體情況比較,差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。提示可采用FISH 法檢測HER-2 基因狀態(tài),檢出HER-2 基因擴增占比較低,且明確HER-2 基因擴增與乳腺癌患者年齡、雌激素受體密切相關(guān)。HER-2 基因擴增與腫瘤直徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、臨床分期、組織學(xué)分級、孕激素受體等無關(guān)結(jié)果,本次研究結(jié)果納入患者少,需進一步擴大研究范圍,深入研究。

綜上所述,乳腺癌患者行HER-2 基因檢測可采用FISH 法,可明確ER-2 基因擴增,對評估乳腺癌患者預(yù)后有一定價值,研究價值較高。