◎ 黃綺敏，馮華業(yè)，李美珍，邱富源，江志鵬

（無限極（中國）有限公司，廣東 江門 529100）

蒲公英是菊科植物蒲公英（Taraxacum mongolicumHand.-Mazz.）、堿地蒲公英（Taraxacum borealisinenseKitam.）或同屬數(shù)種植物的干燥全草[1]。蒲公英提取物是以蒲公英為原料，經(jīng)水提取、過濾、濃縮、干燥等工序制成的提取物[2]。蒲公英提取物中含有菊苣酸、咖啡酸等成分[3-5]，現(xiàn)代藥理研究表明，蒲公英提取物具有提高免疫力[6]、降血糖[7]、輔助保護(hù)肝損傷[8-9]等作用。

目前在國內(nèi)外未發(fā)現(xiàn)蒲公英提取物的官方質(zhì)量評(píng)價(jià)方法[10]。本研究建立了蒲公英提取物的菊苣酸含量測定方法，并測定了不同產(chǎn)地的蒲公英提取物中菊苣酸含量，為初步評(píng)價(jià)蒲公英提取物的質(zhì)量提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

HP1200型高效液相色譜儀，包括二極管陣列檢測器，美國Agilent公司；KQ-400KDE型高功率數(shù)控超聲波清洗器，昆山市超聲儀器有限公司。

菊苣酸標(biāo)準(zhǔn)品（CAS號(hào)70831-56-0、批號(hào)110831-201906），中國食品藥品檢定研究院，含量以91.5%計(jì)；咖啡酸標(biāo)準(zhǔn)品（CAS號(hào)70831-56-0，批號(hào)111959-201903），中國食品藥品檢定研究院，含量以88.8%計(jì)；甲醇為色譜純，德國Merck公司；乙腈為色譜純，德國Merck公司；其他試劑均為分析純，水為純化水。

蒲公英提取物由適量蒲公英藥材加8倍量水煎煮3次，合并濾液，70 ℃減壓濃縮，經(jīng)噴霧干燥而得。10批蒲公英提取物來源于4個(gè)廠家，編號(hào)1～10。

1.2 方法

1.2.1 菊苣酸的含量測定

（1）對(duì)照品溶液配制。精密稱取菊苣酸對(duì)照品約8 mg于500 mL棕色容量瓶中，用50%甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，制成16 μg·mL-1的菊苣酸對(duì)照品溶液。

（2）試品溶液配制。精密稱取本品約0.5 g，置于具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇50 mL，稱定重量，超聲（250 W，40 kHz）處理30 min，取出，放冷，再稱定重量，用50%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，用0.45 μm的針式過濾器過濾，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。

（3）菊苣酸含量測定。精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶各10 μL，注入液相色譜儀測定。根據(jù)所得對(duì)照品溶液和供試品溶液色譜圖中菊苣酸峰面積計(jì)算供試品中的菊苣酸含量。

1.2.2 色譜條件

（1）色譜柱。十八烷基鍵合硅膠柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：以乙腈為流動(dòng)相A，以0.1%磷酸溶液為流動(dòng)相B。

（2）采用梯度洗脫。0～14 min流動(dòng)相A由13%上升到15%，流動(dòng)相B由87%下降到85%；14～29 min流動(dòng)相A由15%上升到18%，流動(dòng)相B由85%下降到82%；29～35 min流動(dòng)相A由18%上升到26%，流動(dòng)相B由82%下降到74%；35～48 min保持A為26%，B為74%。波長323 nm；柱溫35 ℃；流速1.0 mL·min-1；進(jìn)樣量10 μL；理論塔板數(shù)按菊苣酸計(jì)不低于5 000。

1.2.3 方法學(xué)考察

（1）線性關(guān)系考察。精密稱取菊苣酸對(duì)照品6.940 mg置于250 mL容量瓶中，加50%甲醇溶解制成儲(chǔ)備液，再精密吸取該儲(chǔ)備液1.0 mL、2.0 mL、4.0 mL、6.0 mL、8.0 mL和10.0 mL分別至10 mL容量瓶中，加50%甲醇定容至刻度，搖勻，測定峰面積。

（2）精密度試驗(yàn)。取1.2.1項(xiàng)中制備的菊苣酸對(duì)照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣6次，分別計(jì)算峰面積及保留時(shí)間的RSD值。

（3）穩(wěn)定性試驗(yàn)。精密稱取蒲公英提取物（批號(hào)CPGY-C-925138），按1.2.1項(xiàng)中制備的供試品溶液，分別于0 h、2 h、4 h、6 h、12 h和24 h測定。

（4）重復(fù)性試驗(yàn)。精密稱取同批號(hào)蒲公英提取物（批號(hào)CPGY-C-925138）同一天內(nèi)按1.2.1項(xiàng)中制備的6份供試品溶液，按1.2.2項(xiàng)中色譜條件測定。

（5）回收率試驗(yàn)。取菊苣酸對(duì)照品12.06 mg置500 mL棕色容量瓶中，加50%甲醇溶解并定容，分別吸取該對(duì)照品溶液2.5 mL、5.0 mL、7.5 mL各3組，分別加入已各自精密稱取同批號(hào)蒲公英提取物約0.25 g的9個(gè)具塞錐形瓶中，按1.2.1制成供回收率測定用供試品溶液，注入液相色譜儀測定，計(jì)算菊苣酸的回收率。

2 結(jié)果與分析

2.1 線性關(guān)系考察

以菊苣酸對(duì)照品的濃度（μg·mL-1）為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，求得回歸方程Y=0.357 6X-0.074 9，R2=0.999 9。結(jié)果表明菊苣酸在2.709 4～27.093 8 μg·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.2 精密度試驗(yàn)

以菊苣酸計(jì)，保留時(shí)間和峰面積的RSD值為0.31%，不對(duì)稱度不高于1.1，理論塔板數(shù)約33 000，證明儀器精密度良好。

2.3 穩(wěn)定性試驗(yàn)

穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果顯示，供試品中菊苣酸峰面積的RSD為0.12%（n=6），表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.4 重復(fù)性試驗(yàn)

菊苣酸平均含量為0.047%，RSD為1.35%，分離度大于1.5，表明該方法重復(fù)性良好。

2.5 回收率試驗(yàn)

平均回收率為96.55%（92%～105%），表明該方法準(zhǔn)確度良好。

2.6 樣品含量測定

10批蒲公英提取物中菊苣酸含量以干燥品計(jì)算在0.047%～0.360%，平均值約為0.23%，其中陜西B產(chǎn)地的含量偏高，為0.33%～0.36%；陜西A產(chǎn)地的含量最低，約為0.047%，但是每個(gè)產(chǎn)地本身數(shù)據(jù)差異較小，結(jié)果見表1。

3 結(jié)論與討論

上述方法學(xué)驗(yàn)證表明，測定蒲公英提取物中菊苣酸含量的高效液相色譜法的適應(yīng)性、精密度、線性關(guān)系、準(zhǔn)確度等均符合要求，該方法穩(wěn)定、可靠，可以作為蒲公英提取物中菊苣酸的含量測定方法。研究發(fā)現(xiàn)，不同產(chǎn)地的蒲公英提取物的菊苣酸含量存在一定差異，這可能與蒲公英藥材本身的生長環(huán)境、采收時(shí)間、加工工藝等因素有關(guān)，有待進(jìn)一步研究。