馮鎖民，李惠民，張 帝，張 博，陳 程，李金娟

(1.西安醫(yī)學院 藥學院，陜西 西安 710021；2.商洛職業(yè)技術學院，陜西 商州 726000)

阿卡波糖是世界第一個上市的α-糖苷酶抑制劑[1]，既可以用于Ⅱ型糖尿病患者的治療，也可用于Ⅰ型糖尿病病人的口服用藥[2-4]。該藥僅在腸道發(fā)揮作用，很少吸收進入血液循環(huán)，因此對肝腎功能無不良影響，也不影響體重，在口服降糖藥物市場占據(jù)較大份額[5]。但該藥需要一日多次給藥，對需要長期用藥的糖尿病患者來說，依從性不是很好，因此開發(fā)阿卡波糖的緩釋制劑很有必要[6-7]。作者通過選擇不同種類的疏水性載體材料，采用熔融法和溶劑法[8-9]，分別與阿卡波糖按不同的比例制成固體分散體，采用建立的高效液相色譜法測定不同固體分散體的溶出度并進行比較，篩選出緩釋效果最好的載體材料及最佳比例，為阿卡波糖緩釋制劑的研究奠定基礎。

1 實驗部分

1.1 試劑與儀器

乙基纖維素：廣州市佳信行化工科技有限公司；十八醇：天津市化學試劑六廠；十六醇：西安悅來醫(yī)藥科技有限公司；單硬脂酸甘油酯：天津市光復精細化工研究所；硬脂酸：天津市天新精細化工開發(fā)中心；無水磷酸氫二鈉、醋酸銨：天津市科密歐化學試劑有限公司；以上試劑均為分析純；白蜂蠟：化學純，滄州康鑫蜂蠟膠業(yè)有限公司；甲醇、乙腈：色譜純，Merck公司；磷酸二氫鉀：分析純，濰坊市科創(chuàng)化工有限公司；水：純凈水，天水娃哈哈食品有限公司；阿卡波糖原料藥：批號2013108，純度96.3%，麗珠集團新北江制藥股份有限公司；阿卡波糖對照品：批號00808-201203，純度95.8%，中國食品藥品鑒定研究院。

高效液相色譜系統(tǒng)：1260，Welchrom-C18柱：4.6 mm×150 mm，5 μm，美國安捷倫Agilent科技有限公司；電子天平：FA1004B，上海越平科學儀器有限公司；智能藥物溶出儀：D-800LS，天津市天大天發(fā)科技有限公司；旋轉蒸發(fā)器：SENCO，上海申生科技有限公司；電熱恒溫水浴鍋：HSYZ-SP，北京市永光明醫(yī)療儀器廠。

1.2 實驗方法

1.2.1 溶劑法制備阿卡波糖-乙基纖維素固體分散體

分別稱取阿卡波糖原料藥100 mg與載體材料乙基纖維素(A)，按質量比1∶1(A1)，1∶2(A2)，1∶4(A3)，1∶8(A4)的比例制備固體分散體。方法是先將不同比例量的乙基纖維素用體積分數(shù)90%乙醇溶解，再加入比例量的阿卡波糖，補加乙醇攪拌至充分溶解。在65 ℃下減壓旋轉蒸發(fā)除去溶劑,放入冰箱冷凍1 h。取出放入干燥器中干燥，其后刮出固體分散體，編號收集備用。

1.2.2 熔融法制備阿卡波糖固體分散體

分別取載體材料十六醇、十八醇、單硬脂酸甘油酯、硬脂酸、白蜂蠟，于70 ℃水浴上加熱完全熔融，按不同比例加入阿卡波糖原料藥攪拌充分混勻后(見表1)，迅速轉移至冰箱中冷凍固化12 h，取出，室溫下置真空干燥器中48 h，研細，過篩，即得。

表1 熔融法制備阿卡波糖固體分散體的比例

1.2.3 HPLC法測定阿卡波糖的含量

參照國家藥品標準阿卡波糖含量測定法[10]，在Agilent 1260型HPLC色譜儀上，色譜柱Welchrom-C18(150 mm×4.6 mm，5 μm)；流動相：以磷酸鹽緩沖液(取磷酸二氫鉀600 mg、無水磷酸氫二鈉279 mg，加水溶解并稀釋至1 000 mL)-乙腈(體積比為93∶7)為流動相；流速：1.5 mL/min；檢測波長：210 nm；柱溫：40 ℃；進樣量20 μL。在上述色譜條件下測定，理論塔板數(shù)以阿卡波糖峰計算大于2 500。

1.2.4 阿卡波糖固體分散體溶出度測定方法

采用溶出度測定第二法中的漿法[11-13]。取約相當于阿卡波糖150 mg的固體分散體，放入純化水900 mL為溶出介質的溶出儀中，轉速為50 r/min，溫度為(37±0.5)℃。分別于0.5、1、2、3、4、6、8、10、12 h，吸取溶出介質5 mL并用純化水補足，過0.45 μm微孔濾膜，取續(xù)濾液20 μL注入高效液相色譜儀，按照1.2.3測定含量，計算相應各時間點的累積溶出度。

1.2.5 溶出曲線的繪制

將所制備的阿卡波糖固體分散體，按照1.2.4溶出度的測定方法，計算累積溶出度，以其為縱坐標，時間為橫坐標，繪制溶出曲線。

2 結果與討論

2.1 HPLC測定阿卡波糖方法學考察結果

稱量阿卡波糖對照品10.56 mg，置5 mL容量瓶中，加純化水定容即得質量濃度為2.112 mg/mL的對照品儲備液。再用純化水稀釋配成質量濃度為0.012 5，0.025，0.05，0.1，0.2，0.4 mg/mL系列對照品溶液。按照1.2.3 色譜條件，分別進樣20 μL，測定記錄各質量濃度對照品溶液的峰面積。以峰面積(A)和質量濃度(ρ) 進行線性回歸得到方程：A=2 500ρ+56.25(r=0.999 9)。結果表明，ρ(阿卡波糖)=0.012 6～0.404 7 mg/mL，質量濃度與峰面積線性關系良好。

阿卡波糖HPLC色譜圖見圖1。由圖1a可知，阿卡波糖峰達到基線分離，出峰時間tR≈1.55 min。

同一質量濃度(0.031 7 mg/mL)對照品溶液連續(xù)進樣6次，記錄阿卡波糖峰面積，計算峰面積的RSD為1.2%(n=6)，表明該方法精密度良好。

同一批阿卡波糖樣品溶液連續(xù)進樣6次，記錄峰面積，根據(jù)峰面積計算相對標準偏差RSD為0.76%(n=6)，表明該方法重復性良好。樣品溶液的HPLC色譜圖見圖1b,可見在該條件下，各成分之間無干擾，分離良好。

取同一質量濃度供試溶液(0.052 8 mg/mL)，分別在0、1、2、4、8、12 h進樣檢測，考察樣品溶液的穩(wěn)定性。結果表明阿卡波糖峰面積的RSD為0.14%(n=6)，表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

取已知質量(4.048 mg)的樣品9份，每3份一組，分別置于25 mL的容量瓶中，精密加入對照品儲備液(按2.112 mg的80%、100%和120%比例)，用純化水稀釋至刻度，進樣測定，記錄峰面積，并進行計算。結果平均加樣回收率為99.0%，RSD為1.1%(n=9)。表明該方法準確度高，可靠性強。

在HPLC法測定阿卡波糖片的溶出度中，有文獻報道用氨基柱[13]，但因該柱靈敏度低，因此阿卡波糖的投入量要大，至少300 mg，實驗選用C18柱，投樣量150 mg，這與國家標準[10]及大多數(shù)文獻報道相一致[5-6,11-12]，但流速要大于等于1.5 mL/min。另外，溶出介質用純化水而不是常規(guī)的人工胃液(pH=1～2)，這是因為謝向陽等[13]在阿卡波糖片溶出度研究中發(fā)現(xiàn)阿卡波糖片在pH=1.2和pH=4的酸性環(huán)境中的溶出度要小于pH=6.8中性條件下的溶出度，而pH=6.8的溶出曲線與純化水相似，這一結論也與國家標準[10]溶出介質選用純化水相吻合。

t/mina 阿卡波糖對照品

t/minb 阿卡波糖樣品圖1 阿卡波糖對照品及樣品HPLC圖

2.2 阿卡波糖-乙基纖維素(A)固體分散體溶出度測定結果

阿卡波糖與乙基纖維素按不同比例制備的固體分散體溶出度測定結果見圖2。

t/h圖2 阿卡波糖-乙基纖維素固體分散體溶出曲線

由圖2可知，所有乙基纖維素與阿卡波糖制備的固體分散體溶出度都要比單純的阿卡波糖片低[阿卡波糖片，95.1%(0.5 h)，98.8%(1 h)，100.0%(2 h)，下同]，表明乙基纖維素對阿卡波糖的釋放具有緩釋效果，但以A1、A3阻滯作用最強，而A3符合緩釋制劑的釋藥要求[14]，即8 h后釋藥逐漸增加，因此阿卡波糖與乙基纖維素按質量比1∶4(A3)制備的固體分散體緩釋效果最好。

2.3 阿卡波糖-十六醇固體分散體(B)溶出度測定結果

阿卡波糖與十六醇按不同比例制備的固體分散體溶出度測定結果見圖3。

t/h圖3 阿卡波糖十六醇固體分散體溶出曲線

由圖3可知，所有十六醇與阿卡波糖制備的固體分散體溶出度都要比單純的阿卡波糖片低，表明十六醇對阿卡波糖的釋放均具有阻滯作用，但以B3緩釋作用最強，因此阿卡波糖與十六醇按質量比1∶5(B3)制備的固體分散體緩釋效果最好。

2.4 阿卡波糖-十八醇固體分散體(C)溶出度測定結果

阿卡波糖與十八醇按不同比例制備的固體分散體溶出度測定結果見圖4。

t/h圖4 阿卡波糖-十八醇固體分散體溶出曲線

由圖4可知，所有十八醇與阿卡波糖制備的固體分散體溶出度都要比單純的阿卡波糖片低，表明十八醇對阿卡波糖的釋放均具有阻滯作用，但以C3緩釋作用最強，因此阿卡波糖與十八醇按質量比1∶5(C3)制備的固體分散體緩釋效果最好。

2.5 阿卡波糖-單硬脂酸甘油酯固體分散體(D)溶出度測定結果

阿卡波糖與單硬脂酸甘油酯按不同比例制備的固體分散體溶出度測定結果見圖5。

t/h圖5 阿卡波糖-單硬脂酸甘油酯固體分散體溶出曲線

由圖5可知，所有單硬脂酸甘油酯與阿卡波糖制備的固體分散體溶出度都要比單純的阿卡波糖片低，表明單硬脂酸甘油酯對阿卡波糖的釋放均具有阻滯作用，但以D1緩釋作用最強，因此阿卡波糖與單硬脂酸甘油酯按質量比1∶1(D1)制備的固體分散體緩釋效果最好。

2.6 阿卡波糖-硬脂酸固體分散體(E)溶出度測定結果

阿卡波糖與硬脂酸按不同比例制備的固體分散體溶出度測定結果見溶出曲線圖6。

t/h圖6 阿卡波糖-硬脂酸固體分散體溶出曲線

由圖6可知，所有硬脂酸與阿卡波糖制備的固體分散體溶出度都要比單純的阿卡波糖片低，表明硬脂酸對阿卡波糖的釋放均有阻滯作用，但以E4阻滯作用最強，因此阿卡波糖與硬脂酸按質量比1∶7(E4)制備的固體分散體緩釋效果最好。

2.7 阿卡波糖-白蜂蠟固體分散體(F)溶出度測定結果

阿卡波糖與白蜂蠟按不同比例制備的固體分散體溶出度測定結果見圖7。

t/h圖7 阿卡波糖-白蜂蠟固體分散體溶出曲線

由圖7可知，所有白蜂蠟與阿卡波糖制備的固體分散體溶出度都要比單純的阿卡波糖片低，表明白蜂蠟對阿卡波糖的釋放均有阻滯作用，但以F3阻滯作用最強，因此阿卡波糖與白蜂蠟按質量比1∶3(F3)制備的固體分散體緩釋效果最好。

2.8 6種載體材料最佳比例的固體分散體的溶出度測定結果比較

以上實驗篩選出每種載體材料中，溶出度最低的最佳固體分散體比例，其不同時間溶出度測定結果見圖8。

t/h圖8 優(yōu)選出各種載體材料阿卡波糖固體分散體溶出曲線

由圖8可知，這些最佳比例的固體分散體溶出度都要比阿卡波糖片低，但以A3溶出度相對較低且符合緩釋制劑的要求，即在所有載體材料中，以阿卡波糖與乙基纖維素按質量比1∶4制備的固體分散體緩釋效果最好。

根據(jù)藥物的性質，選用不同的載體材料，利用固體分散體技術[8,15-17]既可增加難溶藥物的溶解度，提高其溶出度，對于水溶性大的藥物，又可延緩藥物的釋放，為開發(fā)其緩釋制劑提供方便。作者采用溶劑法制備的阿卡波糖-乙基纖維素固體分散體，由于阿卡波糖是以分子狀態(tài)高度分散在載體材料乙基纖維素中，即形成固態(tài)溶液[18]，因此阿卡波糖的溶出度要比其他疏水性材料制備的要低，釋藥相對較慢。而在阿卡波糖與乙基纖維素固體分散體的溶出曲線中，A3(阿卡波糖與乙基纖維素質量比為1∶4)的溶出曲線與其他比例明顯不一樣，即在8 h后釋放明顯加快，分析可能原因是藥物阿卡波糖是通過乙基纖維素內(nèi)部錯綜復雜的孔道緩慢釋放出來，隨著時間的推移，乙基纖維素骨架破碎崩解，導致藥物釋放突然加快。當然乙基纖維素的生產(chǎn)廠家、黏度、粒徑、用量等因素對水溶性藥物的釋放都有影響[19]，這方面有待進一步的實驗驗證。

另外采用熔融法制備的阿卡波糖疏水性固體分散體，由于藥物是以無定型狀態(tài)分散在載體材料中[20]，因此藥物的溶出度要比相應的分子狀態(tài)的高。為了使阿卡波糖的釋藥更好的符合緩釋制劑的要求，制劑更加穩(wěn)定，可以采用聯(lián)合載體材料制備固體分散體[16-17]，或與緩釋制劑的骨架材料配合使用，這方面工作有待進一步研究。

3 結 論

利用疏水性載體材料乙基纖維素，十六醇，十八醇，單硬脂酸甘油酯，硬脂酸，白蜂蠟，分別與阿卡波糖按不同的比例制成固體分散體，用建立的HPLC方法測定制備的阿卡波糖固體分散體的溶出度，結果表明阿卡波糖與各載體材料最佳質量比固體分散體溶出度由小到大的順序依次為乙基纖維素(1∶4,A3)，硬脂酸(1∶7,E4),十六醇(1∶5,B3)，單硬脂酸甘油酯(1∶1,D1),十八醇(1∶5,C3),白蜂蠟(1∶3,F3)。顯而易見，以乙基纖維素為載體材料，采用溶劑法，阿卡波糖與之按質量比1∶4制備的固體分散體溶出度最低，緩釋效果最好。這一結果可以為阿卡波糖緩釋制劑的研制提供參考依據(jù)。