張想，李立郎，楊娟，楊小生，王瑜，王麗，廖秀，李全力，李齊激，王道平，楊艷，李春燕，葛麗娟

（1.貴州大學(xué)釀酒與食品工程學(xué)院，貴州貴陽(yáng) 550025）（2.貴州省中國(guó)科學(xué)院天然產(chǎn)物化學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，貴州貴陽(yáng) 550014）（3.桐梓縣官倉(cāng)鎮(zhèn)農(nóng)業(yè)服務(wù)中心，貴州遵義 563200）

刺梨（Rosa roxbughiiTratt）原產(chǎn)于我國(guó)西南地區(qū)[1]，是我國(guó)特有果樹(shù)資源，果實(shí)富含維生素C[2,3]、SOD[4]、類(lèi)黃酮[5]、氨基酸[6]等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，具有極高的保健和醫(yī)藥價(jià)值[7-9]。在刺梨的食品加工過(guò)程中有近50%的殘?jiān)粊G棄[10]，造成嚴(yán)重的資源浪費(fèi)。刺梨果渣中富含維生素、粗蛋白、膳食纖維、黃酮類(lèi)等活性物質(zhì)[11]。膳食纖維（dietary fiber，DF）是一種功能性的食料，有“第七大營(yíng)養(yǎng)素”之稱(chēng)，膳食纖維的大分子結(jié)構(gòu)使其具備良好的持水性、吸附力等功能特性，具有維持消化系統(tǒng)健康、增強(qiáng)免疫系統(tǒng)、降低膽固醇和高血壓等生理調(diào)節(jié)作用[12]。按溶解特性可分為可溶性膳食纖維（soluble dieary fibre，SDF）和不溶性膳食纖維（insoluble dietary fiber，IDF），SDF 對(duì)多種金屬離子有良好的吸附特性，能促進(jìn)人體代謝和小腸蠕動(dòng)，具有緩解便秘的功能[13]，IDF 可通過(guò)抑制α-淀粉酶的作用降低血糖生成指數(shù)，具有降血糖[14]、降血脂、控制體重[15]等功能。

目前，膳食纖維的提取方法主要有化學(xué)法、酶法、膜分離法、發(fā)酵法等[16]，其中微生物發(fā)酵法是提取可溶性膳食纖維的新型技術(shù)手段，實(shí)現(xiàn)了微生物產(chǎn)酶與酶解過(guò)程的統(tǒng)一，降低生產(chǎn)成本[17]。刺梨果渣中豐富的粗蛋白、纖維素、木質(zhì)素等物質(zhì)可滿(mǎn)足茶樹(shù)菇（Agrocybe aegerita）類(lèi)木腐真菌生長(zhǎng)所需的氮源和碳源[18]。同時(shí)，刺梨果渣含有大量有機(jī)酸物質(zhì)，pH 呈弱酸性，其顆粒良好的通氣率和持水性可為茶樹(shù)菇菌種提供良好的生長(zhǎng)環(huán)境[19]。

便秘是消化系統(tǒng)常見(jiàn)的功能性胃腸道疾病，臨床上表現(xiàn)為大便量少、硬，排出困難，且伴有腹脹、腹部不適、食欲不振等癥狀[20,21]。隨著現(xiàn)代社會(huì)的發(fā)展以及人們飲食結(jié)構(gòu)的改變、精神、心理等因素的影響，便秘發(fā)生率逐年增高，其中精細(xì)飲食習(xí)慣使膳食纖維攝入量減少是形成便秘的重要原因。有研究發(fā)現(xiàn)香蕉[22]、麩皮[23]、菊粉[24]中可溶性膳食纖維能夠增強(qiáng)小腸運(yùn)動(dòng)能力，具有潤(rùn)腸通便的作用。本實(shí)驗(yàn)以刺梨果渣為原料，選用茶樹(shù)菇作為發(fā)酵菌種，研究最佳發(fā)酵工藝條件下所制備得出的刺梨果渣SDF 對(duì)便秘模型小鼠潤(rùn)腸通便的作用，對(duì)果渣資源的利用及可持續(xù)發(fā)展提供可行依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

刺梨果渣：貴州恒力源天然生物科技有限公司新鮮刺梨經(jīng)榨汁等加工后的副產(chǎn)物，干燥處理后備用；茶樹(shù)菇一級(jí)種：貴州省中國(guó)科學(xué)院天然產(chǎn)物化學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室提供；麻仁丸：山西華康藥業(yè)股份有限公司；復(fù)方地芬諾酯片：新鄉(xiāng)市長(zhǎng)樂(lè)制藥有限責(zé)任公司；阿拉伯樹(shù)膠：成都金山化學(xué)試劑有限公司；活性炭粉：天津市光復(fù)科技發(fā)展有限公司；體積分?jǐn)?shù)95%乙醇、CaCl2、KCl、丙酮：天津市致遠(yuǎn)化學(xué)試劑有限公司；α-淀粉酶、蛋白酶、淀粉葡萄糖苷酶、MES-TRIS：大連美侖生物科技有限公司。

PDA 培養(yǎng)基：200 g 馬鈴薯切片，加熱煮沸，過(guò)濾，加入20 g 葡萄糖和18 g 瓊脂，再次加熱煮沸10 min，調(diào)整體積至1 L 后用玻璃棒攪拌溶化均勻后分裝試管，于121 ℃、0.1 MPa 條件下滅菌30 min，冷凝后待用。

1.2 儀器與設(shè)備

DK-98-II 恒溫振蕩水浴箱，天津市泰斯特儀器有限公司；FA2004N 分析天平，上海菁海儀器有限公司；SX2-4-10TZ 馬弗爐，廈門(mén)儀宸科技有限公司；101-2A烘箱，天津市泰斯特儀器有限公司；BZF-50 真空干燥箱，常州諾基儀器有限公司；FE20 pH 計(jì)，梅特勒-托利多儀器有限公司；LDZV-75KBS 不銹鋼壓力蒸汽滅菌鍋，上海申安醫(yī)療器械廠(chǎng)；SW-CJ-2F 雙人雙面凈化工作臺(tái)，蘇州凈化設(shè)備有限公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 菌種的活化

在無(wú)菌條件下將保藏良好的茶樹(shù)菇菌種母種接種到制備好的PDA 斜面固體培養(yǎng)基上，于28 ℃恒溫培養(yǎng)箱種恒溫培養(yǎng)5～7 d，采用以上方法活化3 次。

1.3.2 工藝流程

新鮮刺梨果渣→調(diào)料混勻、配制發(fā)酵培養(yǎng)基→裝瓶、滅菌（121 ℃，30 min）→冷卻后接入活化好的茶樹(shù)菇菌種→發(fā)酵培養(yǎng)（26 ℃條件下，培養(yǎng)至菌絲體長(zhǎng)滿(mǎn)培養(yǎng)基即為發(fā)酵完全）→滅菌→烘干→粉碎（過(guò)200 目篩）→茶樹(shù)菇發(fā)酵刺梨果渣膳食纖維測(cè)定

1.3.3 單因素實(shí)驗(yàn)

參照1.3.2 膳食纖維提取的工藝流程，選取氯化鈣（CaCl2）添加量（%）、氯化鉀（KCl）添加量（%）、糖含添加量（%）、液料比（mL/g）這四個(gè)因素進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，以刺梨果渣膳食纖維得率為指標(biāo)，研究茶樹(shù)菇發(fā)酵在不同條件下對(duì)刺梨果渣膳食纖維得率的影響，單因素實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，見(jiàn)表1。

表1 刺梨果渣膳食纖維單因素實(shí)驗(yàn)水平表Tabel 1 Single factor test level of dietary fiber from Roxburgh rose pomace

1.3.4 響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

表2 響應(yīng)面因素及編碼水平Table 2 Factors and coding levels of response surface

在單因素實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，運(yùn)用Design-Expert 8.06軟件中的Box-Behnken 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)方法，選擇氯化鈣添加量（A）、氯化鈣添加量（B）、糖添加量（C）、液料比（D）為自變量，平菇發(fā)酵SDF 得率為響應(yīng)值進(jìn)行Box-Behnken 響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，各因素的三個(gè)水平采用-1、0、1 進(jìn)行編碼，見(jiàn)表2。

1.3.5 刺梨果渣膳食纖維提取率的測(cè)定

根據(jù)GB 5009.88-2014《食品中膳食纖維的測(cè)定》中所示的酶重量法對(duì)原料的總膳食纖維（TDF）含量、不溶性膳食纖維（IDF）含量及可溶性膳食纖維（SDF）含量進(jìn)行測(cè)定。得率按如下公式計(jì)算：

1.4 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

1.4.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SPF 級(jí)八周齡KM 小鼠96 只，雌雄各半，體重20 g 左右，購(gòu)自遼寧長(zhǎng)生生物技術(shù)股份有限公司，許可證號(hào)：SCXK（遼）2015-0001。

飼養(yǎng)條件：室溫（20±2）℃，濕度55%～65%，光照12 h/d，明暗交替，通風(fēng)潔凈條件良好。購(gòu)入后適應(yīng)環(huán)境7 d。

1.4.2 劑量選擇與分組

小鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后，隨機(jī)分為12 組，每組8只，雌雄各半。前6 組用于小腸運(yùn)動(dòng)實(shí)驗(yàn)，后6 組用于小鼠排便實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)設(shè)置空白對(duì)照組（蒸餾水）、陽(yáng)性對(duì)照組（麻仁丸ig.4 g/kg·bw，根據(jù)藥理試驗(yàn)中人體與小鼠間的等效劑量換算得出[25]）、模型對(duì)照組（蒸餾水并造模）、茶樹(shù)菇發(fā)酵刺梨果渣SDF 低劑量組（ig.0.25 g/kg·bw）、中劑量組（ig.0.5 g/kg·bw）、高劑量組（ig.1 g/kg·bw）。

1.4.3 小鼠小腸推進(jìn)率實(shí)驗(yàn)

小鼠每日灌胃量為0.2 mL/10 g，連續(xù)給予受試品14 d，末次灌胃后各組小鼠禁食不禁水16 h。陽(yáng)性對(duì)照組、模型對(duì)照組和茶樹(shù)菇發(fā)酵刺梨果渣SDF 低、中、高劑量組小鼠灌胃復(fù)方地芬諾酯（ig.10 mg/kg·bw），空白組給予等劑量的蒸餾水，建立便秘模型。造模30 min 后，陽(yáng)性對(duì)照組和茶樹(shù)菇發(fā)酵刺梨果渣SDF 低、中、高劑量組分別灌胃含相應(yīng)受試品的墨汁，空白和模型對(duì)照組灌胃相同劑量的墨汁。在給予墨汁25 min后各組小鼠通過(guò)頸椎脫臼法處死，解剖打開(kāi)小鼠腹腔剪取從幽門(mén)至回盲部位的腸管，不加牽引平鋪呈直線(xiàn)狀態(tài)下測(cè)量“小腸總長(zhǎng)度”，從幽門(mén)至墨汁前沿為“墨汁推進(jìn)長(zhǎng)度”，根據(jù)下式計(jì)算墨汁推進(jìn)率：

1.4.4 小鼠排便實(shí)驗(yàn)

同1.3.3 小鼠小腸推進(jìn)實(shí)驗(yàn)中方法灌胃與造模。各組小鼠在灌胃墨汁后，單籠飼養(yǎng)并且正常飲食飲水，觀(guān)察并記錄每只小鼠首次排出黑便的時(shí)間以及每組小鼠6 h 內(nèi)的排出黑便的粒數(shù)及其質(zhì)量并測(cè)定糞便含水量。

1.5 數(shù)據(jù)處理

數(shù)據(jù)以±sD 表示，應(yīng)用SPSS 21.0 軟件進(jìn)行差異顯著性分析，p＜0.05 或p＜0.01 為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，Origin 9.0 軟件作圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 單因素實(shí)驗(yàn)

2.1.1 不同氯化鈣（CaCl2）添加量對(duì)茶樹(shù)菇發(fā)酵刺梨果渣DF 得率的影響

圖1 CaCl2添加量對(duì)茶樹(shù)菇發(fā)酵刺梨果渣DF 得率的影響Fig.1 Effect of CaCl2 addition on DF yield of Roxburgh rose pomace fermented by Agrocybe aegerita

由圖1 可知，隨著氯化鈣添加量的不斷增加，膳食纖維得率呈先增加后減少的趨勢(shì)，在添加量為1%處達(dá)到最大值。鈣元素是食用菌生長(zhǎng)不可缺少的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，且菌絲體自身無(wú)法合成需從外界培養(yǎng)基中攝取[26]，作為細(xì)胞調(diào)節(jié)滲透壓的主要元素，決定著微生物能否正常的成長(zhǎng)。隨著氯化鈣添加量的增加，菌絲體生長(zhǎng)趨勢(shì)良好，膳食纖維得率不斷增加，但當(dāng)氯化鈣添加量達(dá)到1%時(shí)，膳食纖維得率開(kāi)始逐漸降低，過(guò)高的鈣離子濃度會(huì)影響到菌體的正常生長(zhǎng)和代謝，故采用茶樹(shù)菇發(fā)酵刺梨果渣氯化鈣最佳添加量為1%。

2.1.2 不同氯化鉀（KCl）添加量對(duì)茶樹(shù)菇發(fā)酵刺梨果渣DF 的影響

鉀元素在真菌生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中起到調(diào)節(jié)代謝、維持離子穩(wěn)態(tài)、調(diào)節(jié)滲透壓等作用[27,28]。由圖2 可知，當(dāng)氯化鉀添加量小于0.60%時(shí)，菌絲的生長(zhǎng)活性逐漸提高；而在氯化鉀添加量大于0.60%時(shí)，膳食纖維得率隨著氯化鉀添加量的增加而降低，推測(cè)其原因可能是培養(yǎng)基中鉀離子濃度過(guò)量導(dǎo)致菌絲細(xì)胞內(nèi)外滲透壓和酸堿平衡失調(diào)，繼而抑制菌絲生長(zhǎng)代謝。故采用茶樹(shù)菇發(fā)酵刺梨果渣氯化鉀最佳添加量為0.60%。

圖2 KCl 添加量對(duì)茶樹(shù)菇發(fā)酵刺梨果渣DF 得率的影響Fig.2 Effect of KCl addition on DF yield of Roxburgh rose pomace fermented by Agrocybe aegerita

2.1.3 不同糖添加量對(duì)茶樹(shù)菇發(fā)酵刺梨果渣DF 的影響

碳源主要是提供菌種生長(zhǎng)所需要的能量，也是發(fā)酵和代謝的含碳化合物的主要來(lái)源[29]由圖3 可知，膳食纖維得率在糖添加量為4%時(shí)均達(dá)到最高值；當(dāng)糖添加量在2%～4%范圍內(nèi)，由于培養(yǎng)基中碳源的增加，有利于菌種的生長(zhǎng)發(fā)育，膳食纖維得率得以提高；而繼續(xù)增大糖添加量，導(dǎo)致培養(yǎng)基碳氮比失調(diào)，菌絲體生長(zhǎng)減緩，且發(fā)酵成本上升[30]，故膳食纖維得率逐漸降低。因此采用茶樹(shù)菇發(fā)酵刺梨果渣糖最佳添加量為4%。

圖3 糖添加量對(duì)茶樹(shù)菇發(fā)酵刺梨果渣DF 的影響Fig.3 Effect of sugar content on DF of Roxburgh rose pomace fermented by Agrocybe aegerita

2.1.4 不同液料比對(duì)茶樹(shù)菇發(fā)酵刺梨果渣DF得率的影響

水作為發(fā)酵培養(yǎng)基的必備物質(zhì)對(duì)培養(yǎng)的優(yōu)劣起著決定性作用[31]，合適的液料比能夠保持一個(gè)相對(duì)適宜的發(fā)酵環(huán)境。由圖4 可知，刺梨果渣膳食纖維得率隨液料比（mL/g）的增加而變大，在7:1 時(shí)達(dá)到最大值，此后得率呈下降趨勢(shì)。當(dāng)液料比小于7:1（mL/g）時(shí)，細(xì)胞內(nèi)外形成的濃度差較小使膳食纖維溶出不夠完全，得率較低；當(dāng)液料比（mL/g）為7:1 時(shí)，膳食纖維得率達(dá)到最高值；當(dāng)液料比繼續(xù)增加，可能由于果渣顆粒吸水膨脹致使透氣性下降，且浸提液體積過(guò)大，也不利于后期的濃縮分離，增大實(shí)驗(yàn)成本。因此，采用茶樹(shù)菇發(fā)酵刺梨果渣最佳液料比為7:1（mL/g）。

圖4 液料比對(duì)茶樹(shù)菇發(fā)酵刺梨果渣DF 得率的影響Fig.4 Effect of liquid to material ratio on DF yield of Roxburgh rose pomace fermented by Agrocybe aegerita

2.2 Box-Behnken 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)及響應(yīng)面分析結(jié)果

2.2.1 茶樹(shù)菇發(fā)酵刺梨果渣的Box-Behnken 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)及響應(yīng)面分析結(jié)果

不同因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響見(jiàn)表3，由表3 可知，回歸模型極顯著（p＜0.0001），其相關(guān)系數(shù)系數(shù)R2=0.9419，說(shuō)明模型真實(shí)、擬合程度好，能解釋響應(yīng)值94.19%的變化。失擬項(xiàng)不顯著（p=0.1912＞0.05），說(shuō)明實(shí)驗(yàn)誤差較小，可以認(rèn)為該模型對(duì)茶樹(shù)菇發(fā)酵刺梨果渣提取其中SDF 實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行準(zhǔn)確可靠的預(yù)測(cè)。模型中B、C、D、AB、AD、CD、A2、B2、C2、D2都達(dá)到了顯著水平，說(shuō)明各個(gè)因素對(duì)響應(yīng)值的影響不是簡(jiǎn)單的線(xiàn)性關(guān)系。運(yùn)用Design-Expert 8.06 軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)所得響應(yīng)值進(jìn)行多元回歸擬合分析，建立二次回歸模型為：

Y2（茶樹(shù)菇發(fā)酵SDF 得率）=+5.78A+0.14B+0.12C+0.075D+0.14AB+0.015AC-0.13AD-0.063BC+0.045BD+0.13CD-0.39A2-0.40B2-0.30C2-0.19D2

表3 Box-Behnken 實(shí)驗(yàn)方案與結(jié)果Table 3 Box-Behnken experimental design and results

表4 響應(yīng)面分析實(shí)驗(yàn)方差分析結(jié)果Table 4 Box-Behnken experimental design and results for response surface analysis

注：*差異顯著，p＜0.05；**差異極顯著，p＜0.01。

圖5 各因素交互作用對(duì)茶樹(shù)菇發(fā)酵刺梨果渣SDF 得率影響的響應(yīng)面圖Fig.5 Response surface diagram of influence of interaction of various factors on SDF yield of Roxburgh rose pomace by Agrocybe aegerita

表5 受試物對(duì)小鼠體重的影響Table 5 Effect of test sample on body weight of mice

表6 受試物對(duì)小鼠小腸推進(jìn)率的影響Table 6 Effect of test sample on intestinal propulsion rate of mice

表7 受試物對(duì)小鼠小腸糞便實(shí)驗(yàn)的影響Table 7 Effect of test sample on small intestine fecal experiment in mice

2.2.2 茶樹(shù)菇發(fā)酵刺梨果渣響應(yīng)面結(jié)果分析

根據(jù)回歸方程作出三維空間響應(yīng)面和對(duì)應(yīng)的等高線(xiàn)（圖5），可直觀(guān)反映出各因素間交互作用的強(qiáng)度及其對(duì)響應(yīng)值的影響程度。由圖5 可知，氯化鈣（A）與氯化鉀（B）間的響應(yīng)面曲線(xiàn)較陡，等高線(xiàn)偏離圓形。當(dāng)糖添加量和液料比兩因素條件固定時(shí)，SDF 得率隨著鈣和氯化鉀添加量的增大而逐步增高，在中心點(diǎn)時(shí)達(dá)到最大值，而氯化鈣和氯化鉀添加量過(guò)大時(shí)，培養(yǎng)基質(zhì)中可能因碳氮比失調(diào)，菌絲細(xì)胞內(nèi)外滲透壓失去平衡而致使其生長(zhǎng)緩慢甚至停止生長(zhǎng)，從而SDF得率下降。同理依次分析可得，各因素對(duì)茶樹(shù)菇發(fā)酵刺梨果渣SDF 得率的影響高低順序是：氯化鉀添加量（B）＞糖添加量（C）＞液料比（D）＞氯化鈣添加量（A）。

2.2.3 最佳提取條件優(yōu)化與驗(yàn)證

通過(guò)響應(yīng)面分析優(yōu)化得到茶樹(shù)菇發(fā)酵刺梨果渣SDF 的最優(yōu)提取條件為：氯化鉀添加量0.60%、氯化鈣添加量1.03%，糖添加量4.25%、液料比7.15:1，在此條件下得到SDF 提取率的理論值為5.82%。考慮到實(shí)驗(yàn)的可行性，對(duì)實(shí)際情況稍做調(diào)整，即氯化鉀添加量0.60%、氯化鈣添加量1%，糖添加量4%、液料比7.0:1。在此條件下進(jìn)行3 次驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，得到SDF 提取率為5.77%，較原果渣中SDF 提高了68.78%左右（原果渣SDF 得率為1.83%）；發(fā)酵后IDF 得率也有所增加，從40.73%增至44.58%，結(jié)果與理論值接近，說(shuō)明響應(yīng)面法優(yōu)化模型能較好地預(yù)測(cè)SDF 的提取率，其工藝條件較可靠。

2.3 小鼠潤(rùn)腸通便實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析

2.3.1 茶樹(shù)菇發(fā)酵刺梨果渣SDF 對(duì)小鼠體重的影響

各組小鼠實(shí)驗(yàn)期間體重變化如表5 所示，可得實(shí)驗(yàn)前后各組小鼠體重之間均無(wú)顯著性差異（p＞0.05）。在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中各組小鼠活動(dòng)靈活，飲食正常，無(wú)腹瀉等不良反應(yīng)，且體質(zhì)量呈逐漸上升趨勢(shì)，說(shuō)明經(jīng)茶樹(shù)菇發(fā)酵所得刺梨果渣SDF 在實(shí)驗(yàn)所選劑量下對(duì)小鼠體質(zhì)量無(wú)影響。

2.3.2 茶樹(shù)菇發(fā)酵刺梨果渣SDF 對(duì)小鼠小腸推進(jìn)率的影響

如表6 所示，模型對(duì)照組墨汁推進(jìn)率為43.94%，與空白對(duì)照組相比顯著降低（p＜ 0.01），表明小鼠便秘模型建立成功；而陽(yáng)性對(duì)照組與SDF 低、中、高劑量組與模型組相比，墨汁推進(jìn)率均有所提高，分別提高了44.54%、10.22%、35.16%、55.49%，其中陽(yáng)性對(duì)照組、中、高劑量組與模型對(duì)照組相比差異極顯著（p＜0.01），低劑量組對(duì)比墨汁推進(jìn)率雖然有所增加但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明當(dāng)刺梨果渣SDF 攝入量達(dá)到0.50 g/kg及以上劑量時(shí)可明顯縮短糞便在小鼠小腸內(nèi)的停留時(shí)間，具有促進(jìn)小鼠小腸蠕動(dòng)的作用。

2.3.3 茶樹(shù)菇發(fā)酵刺梨果渣膳食纖維對(duì)小鼠小腸運(yùn)動(dòng)的影響

灌胃墨汁后，以首粒黑便排出時(shí)間和6 h 內(nèi)排黑便粒數(shù)及其重量為指標(biāo)，考察茶樹(shù)菇發(fā)酵刺梨果渣SDF 對(duì)小鼠排便實(shí)驗(yàn)的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果由表7 所示，模型對(duì)照組與空白對(duì)照組相比，排出首粒黑便時(shí)間、6 h 內(nèi)排便重量及粒數(shù)存在顯著性差異（p＜0.01），說(shuō)明小鼠便秘模型建立成功。陽(yáng)性組、刺梨果渣SDF 低、中、高劑量組與模型對(duì)照組相比較都能縮短首粒黑便的排出時(shí)間，分別縮短了47.92 min、13.36 min、28.47 min、42.9 min，其中陽(yáng)性組與中、高劑量組與模型組相比差異極顯著（p＜0.01），結(jié)果具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。各受試物組與模型對(duì)照組相比，6 h 內(nèi)的排便粒數(shù)及重量都有所增加，而陽(yáng)性組與中、高劑量組與模型組間具有極顯著差異（p＜0.01），低劑量組差異不顯著。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明刺梨果渣SDF 具有促進(jìn)小鼠排便的作用，其中高劑量組作用最為顯著。

3 結(jié)論

3.1 本實(shí)驗(yàn)采用單因素實(shí)驗(yàn)和響應(yīng)面分析法優(yōu)化SDF 得率，結(jié)合實(shí)際分析得到茶樹(shù)菇發(fā)酵刺梨果渣提取SDF 最佳工藝條件為：氯化鈣添加量1%、氯化鉀添加量0.60%、糖添加量4%、液料比7:1。在此條件下，茶樹(shù)菇發(fā)酵SDF 得率為5.86%，較原果渣中SDF提高了68.78%左右（原果渣SDF 得率為1.83%）；發(fā)酵后IDF 得率也有所增加，從40.73%增至44.58%，與預(yù)測(cè)值基本一致，說(shuō)明響應(yīng)面法用于優(yōu)化茶樹(shù)菇發(fā)酵提取刺梨渣SDF 具有較好的準(zhǔn)確性和有效性。丁小娟[32]等選用混合菌種（嗜酸乳桿菌、戊糖乳桿菌、生香酵母）發(fā)酵刺梨果渣，SDF 得率較原果渣提高76.53%，周笑犁[33]等采用保加利亞乳酸桿菌與嗜熱鏈球菌作為發(fā)酵劑制備刺梨果渣中SDF，其得率較比原果渣提高了70.85%。這說(shuō)明選用食用菌茶樹(shù)菇發(fā)酵可明顯提高可溶性膳食纖維的得率，發(fā)酵法制備刺梨果渣SDF，可利用茶樹(shù)菇菌種生長(zhǎng)繁殖過(guò)程中一系列生物化學(xué)反應(yīng)把刺梨果渣中不溶性高分子物質(zhì)分解成可溶性低分子化合物，通過(guò)菌體的自溶作用產(chǎn)生新的營(yíng)養(yǎng)成分和生物活性物質(zhì)，可提高產(chǎn)品的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和保健功能。

3.2 通過(guò)小鼠小腸運(yùn)動(dòng)實(shí)驗(yàn)與排便實(shí)驗(yàn)可得出，灌胃復(fù)方地芬諾酯可以成功構(gòu)建小鼠便秘模型，與模型對(duì)照組比較，SDF 中（ig.0.50 g/kg·bw）、高劑量組（ig.1 g/kg·bw）能夠顯著小鼠墨汁推進(jìn)率顯著增高（p＜0.01），首粒黑便時(shí)間顯著縮短（p＜0.01），排黑便數(shù)量及重量顯著增加（p＜0.01），其中高劑量組效果最佳，經(jīng)發(fā)酵工藝優(yōu)化后的刺梨果渣SDF 具有良好的潤(rùn)腸通便功效。余拓[22]等研究了香蕉可溶性膳食纖維對(duì)小鼠的潤(rùn)腸通便功效，當(dāng)SDF 劑量為1 g/kg·bw時(shí)即可產(chǎn)生促進(jìn)小鼠腸蠕動(dòng)的效果，何為濤[34]等實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)低聚果糖劑量為0.50 g/mL 時(shí)能夠明顯促進(jìn)小鼠小腸運(yùn)動(dòng)。孟雪梅[35]等通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明了復(fù)合苦蕎粉中的可溶性膳食纖維是發(fā)揮潤(rùn)腸作用的關(guān)鍵成分。3.3 綜上所述，采用食用菌茶樹(shù)菇發(fā)酵刺梨果渣，可溶性膳食纖維得率顯著提高，所得產(chǎn)品具有可食用性，提取條件溫和、易于操作，污染小，可實(shí)現(xiàn)大批量提取膳食纖維，且節(jié)約成本，這為后續(xù)高品質(zhì)膳食纖維相關(guān)功能型產(chǎn)品的開(kāi)發(fā)研究提供理論依據(jù)。