胡新年，歐陽(yáng)慧，劉冬霞，許偉華，羅偉平，龍 輝，黃美瓊

清遠(yuǎn)市婦幼保健院優(yōu)生與遺傳實(shí)驗(yàn)診斷中心，廣東清遠(yuǎn) 511500

珠蛋白生成障礙性貧血(簡(jiǎn)稱地貧)是一種珠蛋白基因突變引起機(jī)體內(nèi)的珠蛋白鏈的合成不足或缺失而導(dǎo)致的一種慢性溶血性貧血[1]。目前實(shí)驗(yàn)室主要檢測(cè)地貧為α地貧和β地貧，α地貧一般分為靜止型、標(biāo)準(zhǔn)型、中間型和重型4種類型，β地貧主要分為輕型、中間型和重型3種類型[2]。重型α地貧患兒地貧患兒由于染色體上4個(gè)α-基因缺失，體內(nèi)合成的γ鏈沒有與α鏈結(jié)合形成γ四聚體，一般在妊娠后期會(huì)造成嬰兒宮內(nèi)死亡流產(chǎn)或者出生后幾小時(shí)內(nèi)死亡，同時(shí)也會(huì)增加孕婦患癲癇、妊娠高血壓綜合征、產(chǎn)后出血等并發(fā)癥的風(fēng)險(xiǎn)[3-4]。重型β地貧患兒一般在出生6個(gè)月以后才表現(xiàn)出貧血的臨床癥狀，需要依賴輸血來進(jìn)行治療，一般存活至10歲[5-8]。已有研究證明清遠(yuǎn)地區(qū)地貧基因的攜帶率約為20.9%，屬于地貧高發(fā)地帶，因此，在清遠(yuǎn)地區(qū)開展地貧產(chǎn)前診斷具有重要意義[9-10]。本文對(duì)本院開展的284例地貧基因產(chǎn)前診斷結(jié)果進(jìn)行回顧性分析。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2016年1月至2019年10月來清遠(yuǎn)市婦幼保健院咨詢并進(jìn)行地貧基因產(chǎn)前診斷的孕婦284例作為研究對(duì)象，孕婦孕周為16～24周，每位抽取約20 mL羊水分裝為3管進(jìn)行檢測(cè)，本研究符合本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，并獲得該倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，受檢者均簽署知情同意書。

1.2方法

1.2.1基因提取 本實(shí)驗(yàn)室采用北京天根生物科技有限公司生產(chǎn)的羊水提取試劑盒提取基因，每次實(shí)驗(yàn)為雙人平行實(shí)驗(yàn)，每次試驗(yàn)前均用分光光度計(jì)對(duì)每次提取的DNA濃度和純度進(jìn)行檢測(cè)，以保證實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性。

1.2.2基因檢測(cè) 缺失型α地貧的產(chǎn)前診斷采用跨越斷裂點(diǎn)PCR技術(shù)，非缺失型α地貧和β地貧的產(chǎn)前診斷采用反向斑點(diǎn)雜交技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)，所有的地貧基因檢測(cè)試劑盒均來自于深圳亞能生物科技有限公司，檢測(cè)的α-缺失型為--(SEA)/αα，-α(3.7)/αα，-α(4.2)/αα，α非缺失型常見的包括αCSα/αα，αQSα/αα，αWSα/αα。β地貧檢測(cè)17種分別為-28、-29、-30、-32、CD14-15、CD17、CD26(βE)、CD27-28、CD31、 CD41-42、CD43、CD71-72、IVS-Ⅰ-1、IVS-Ⅰ-5、IVS-Ⅱ-654、CAP+1、initiation condon。每次實(shí)驗(yàn)均有陽(yáng)性、陰性和空白對(duì)照，對(duì)于罕見的或者超出檢測(cè)范圍的送至廣東省婦幼保健院檢測(cè)。

1.3隨訪 產(chǎn)前基因診斷完成6～8 個(gè)月后，實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)的284例樣本均由產(chǎn)前診斷科醫(yī)生進(jìn)行隨訪，對(duì)于重型地貧患兒的后續(xù)處理均有追蹤，對(duì)于非重型的患兒均有新生兒血紅蛋白電泳篩查和回訪，對(duì)于有地貧基因檢測(cè)的新生兒則進(jìn)行基因統(tǒng)計(jì)，已驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)診斷的準(zhǔn)確性。

2 結(jié) 果

2.1284例地貧基因產(chǎn)前診斷結(jié)果分析 在檢測(cè)的284例樣本中，父母為同型α地貧共215例，其中檢出重型α地貧36例，中間型α地貧11例，輕型α地貧111例，正?；蛐挺力?αα 57例。父母為同型β地貧共52例，其中檢出中重型β地貧17例，輕型β地貧20例，正?；蛐挺力?αα 15例。父母一方為一種地貧基因攜帶者另一方為α復(fù)合β地貧基因或者雙方均為α復(fù)合β地貧基因的樣本17例，其中檢出重型α地貧1例，中重型β地貧1例，中間型α地貧復(fù)合輕型β地貧1例，輕型α地貧復(fù)合輕型β地貧14例。

2.2215例α地貧基因檢測(cè)結(jié)果分析 在215例羊水檢測(cè)中檢出重型α地貧36例，占16.74%，中間型α地貧11例，占5.12%，其中基因型--(SEA)/-α(3.7) 8例，--(SEA)/α(WS)α、--(SEA)/α(QS)α和--(SEA)/α(CS)α各有1例，輕型α地貧111例，占51.63%，基因型--(SEA)/αα 97例，α(WS)α/αα 3例，-α(4.2)/αα 2例，-α(3.7)/αα 8例，正常基因型aa/aa 57例，占26.51%。

2.352例β地貧基因檢測(cè)產(chǎn)前診斷結(jié)果分析 52例β地貧基因檢測(cè)中檢出中重型β地貧17例，基因型分別為 βCD41-42/βCD17 2例、βCD41-42/βCD41-42 4例、βCD41-42/β IVS-II-654 5例、β-28/βCD17 1例、β-28/β IVS-II-654 2例、β IVS-II-654/βCD17 1例、β IVS-II-654/βCD26 1例、β IVS-II-654/β-29 1例，總占比32.08%。輕型β地貧20例，基因型分別為βCD17/βN 2例、β-28/βN 1例、β-29/βN 1例、β IVS-II-654/βN 1例、βCD26/βN 2例、β IVS-I-1位點(diǎn)突變1例、βCD41-42/βN 10例，總占比35.90%。正?；蛐挺翹/βN 15例，占28.30%。

2.417例復(fù)合型地貧基因檢測(cè)結(jié)果分析 17例復(fù)合型地貧中，檢出重型α地貧[--(SEA)/--(SEA),βCD41-42/βN ]1例，占6.67%，重型β地貧[βCD41-42/β-28,-α(3.7)/αα]1例，占6.67%，中間型α地貧復(fù)合輕型β地貧[--(SEA)/α(3.7),βCD41-42/βN]1例，占6.67%，輕型α地貧復(fù)合輕型β地貧14例，基因型分別為βCD41-42//βN,--(SEA)/αα 4例、--(SEA)/αα,βIVS-II-654/βN 1例、--(SEA)/αα,βCD43/βN 2例、--(SEA)/αα,βCD71-72/βN 1例、α(WS)α/αα,β IVS-II-654/βN 1例、-α(3.7)/αα,βCD41-42/βN 1例、-α(3.7)/αα,βCD17/βN 1例、-α(3.7)/αα,β-28/βN 1例、-α(4.2)/αα,βCD41-42/βN 1例、-α(4.2)/αα,β IVS-II-654/βN 1例，總占比82.35%。

2.5隨訪結(jié)果 產(chǎn)前基因診斷完成6～8個(gè)月后，電話隨訪共67例嚴(yán)重類型地貧患兒(37例巴氏水腫胎、11例中間型α地貧、1例中間型α地貧復(fù)合輕型β地貧和18例嚴(yán)重類型β地貧患兒)和3例輕型α地貧伴18三體綜合征胎兒，其中37例巴氏水腫胎、9例中間型α地貧和18例嚴(yán)重類型β地貧患兒和3例輕型α地貧伴18三體綜合征胎兒均在知情同意和自愿選擇的原則下接受了終止妊娠的處理，有2例中間型α地貧和1例中間型α地貧復(fù)合輕型β地貧的孕婦未進(jìn)行終止妊娠，140例其他基因型的地貧患兒出生后均進(jìn)行新生兒血紅蛋白電泳篩查和地貧基因檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果與產(chǎn)前診斷結(jié)果完全吻合，有5個(gè)患兒失訪，無(wú)人接聽電話。

3 討 論

地貧是一種遺傳性的溶血性貧血，在中國(guó)南方地區(qū)廣泛分布[11-12]。清遠(yuǎn)位于粵北地區(qū)，地域跨度廣，本地居民多，地貧基因攜帶率高，因此清遠(yuǎn)地區(qū)地貧防控具有重要意義。

清遠(yuǎn)地區(qū)α地貧攜帶率高，其中又以東南亞缺失型[基因型為--(SEA)/αα]居多，東南亞缺失型表示患者缺失兩條α蛋白基因鏈，當(dāng)兩個(gè)同為東南亞缺失型基因攜帶者結(jié)合有25%的概率生育重型α地貧患兒，本研究檢測(cè)到36例重型α地貧患兒，經(jīng)調(diào)查所有孕婦均終止妊娠。當(dāng)父母一方為東南亞缺失型和另一方靜止型基因攜帶者時(shí)，25%的概率生育中間型α地貧患兒，本研究共檢測(cè)到11例中間型α地貧，患者的表型存在個(gè)體差異性，本實(shí)驗(yàn)室在地貧基因檢測(cè)中多次檢測(cè)到成年的中間型α地貧患者，因此中間型α地貧患兒的去留取決于父母的要求。

β地貧是由于β珠蛋白鏈突變引起的，與α地貧基因分型不同，β地貧基因突變按照嚴(yán)重程度可以分為β+和β0兩種，當(dāng)基因型為β+/β+時(shí)，為中間型β地貧，基因型為β+/β0時(shí)，則根據(jù)個(gè)人表型可以表現(xiàn)出不同表型，可能為中間型β地貧或者重型β地貧患兒，基因型為β0/β0時(shí)，則為重型β地貧患兒，因此產(chǎn)前診斷科醫(yī)生和實(shí)驗(yàn)人員在分析β地貧基因診斷結(jié)果時(shí)需要特別謹(jǐn)慎。父母雙方均為β地貧基因攜帶者時(shí)，有25%的概率生育中重型β地貧患兒，本研究中52例β地貧基因檢測(cè)中檢出中重型β地貧17例，占32.08%。

α地貧復(fù)合β地貧的患者，臨床癥狀較單種輕，主要原因是為復(fù)合型地貧患者，其α和β-珠蛋白基因在體內(nèi)同時(shí)存在缺陷，從而導(dǎo)致α珠蛋白鏈和β珠蛋白鏈合成同時(shí)減少，致使α鏈與β鏈的相對(duì)不平衡減輕[13-14]。本研究中檢測(cè)到17例復(fù)合型地貧基因，其中2例為重型地貧。

地貧目前沒有較好的治療方法，只能進(jìn)行預(yù)防。當(dāng)父母雙方均為同型地貧基因攜帶者時(shí)，可以通過產(chǎn)前咨詢和診斷，預(yù)防重型地貧患兒的出生。清遠(yuǎn)地區(qū)地貧基因攜帶率高，地域廣闊，因此需要加大地貧的預(yù)防宣傳，提高民眾對(duì)該病的知曉率，對(duì)指導(dǎo)優(yōu)生優(yōu)育具有重要意義。