胡有寧 李 倩 李兆波

(1 西安文理學院生物與環(huán)境工程學院，陜西省西安市 710065，電子郵箱：huyouning@163.com； 2 陜西中醫(yī)藥大學醫(yī)學科研實驗中心，咸陽市 712046)

【提要】 青藤堿是從傳統(tǒng)中藥青風藤中提取的一種活性物質(zhì)。近年來，青藤堿在肝臟疾病治療方面受到廣泛關注。本文通過查閱國內(nèi)外最新相關研究報告，對青藤堿在肝損傷及肝移植術(shù)后中的肝保護、促進肝再生、減緩肝纖維化和抗肝癌方面的功效進行綜述，旨在為進一步研究青藤堿治療肝病提供參考，也為青藤堿的新藥開發(fā)與臨床應用提供理論依據(jù)。

作為人體最主要的代謝器官，肝臟容易受到各種因素侵擾而出現(xiàn)損傷。肝損傷誘發(fā)的炎癥反應是導致肝硬化甚至肝癌的直接病因[1-2]。全球每年約有200萬人死于肝硬化和肝癌，占全球死亡人數(shù)的3.5%，由此可見，肝臟疾病已對全球公共衛(wèi)生構(gòu)成巨大威脅[3]。近年來，有研究人員發(fā)現(xiàn)一些植物的活性成分具有很好的肝臟保護作用[4-7]。 青藤堿是從防己科植物青藤和毛青藤的干燥根莖中提取的一種生物堿，屬于異喹啉類生物堿，分子式為C19H23NO4，分子量為329.39，其結(jié)構(gòu)與嗎啡類似，藥用形式以鹽酸鹽居多[8-9]。國內(nèi)外現(xiàn)有的研究結(jié)果證實青藤堿具有廣泛的生物學效應，如具有調(diào)節(jié)機體免疫應答、抗病毒、保肝、降血壓、消腫、利尿、抗心律失常、抗藥物依賴、抗血管新生、治療顱腦損傷及類風濕性關節(jié)炎、鎮(zhèn)咳鎮(zhèn)靜、戒毒和抗腫瘤等功效[5，8-10]。本文對青藤堿在肝臟疾病治療中作用的研究進展進行綜述。

1 通過抗氧化應激和炎癥反應發(fā)揮肝保護作用

肝臟是人體最主要的代謝器官，在有毒有害物質(zhì)侵犯及代謝過程中易發(fā)生氧化應激反應，隨后啟動細胞膜脂質(zhì)過氧化，肝細胞的結(jié)構(gòu)和功能受到破壞，導致細胞損傷和死亡，嚴重者會引發(fā)肝硬化甚至肝癌[2，11]。大量研究表明青藤堿可通過多種途徑發(fā)揮保護肝臟的作用[11-12]。(1)抗氧化應激：劉剛等[13]發(fā)現(xiàn)，青藤堿作為一種天然的抗氧化劑，可有效清除細胞代謝過程中產(chǎn)生的過量超氧陰離子自由基和羥自由基，從而可抑制大鼠肝勻漿自氧化及維生素C-Fe2+系統(tǒng)誘導的脂質(zhì)過氧化，對肝細胞線粒體有保護作用。王效蕊等[11]采用過氧化氫損傷人肝細胞系HLO2細胞建立氧化應激細胞模型，并給予不同濃度青藤堿進行干預，結(jié)果提示青藤堿能夠顯著提高受損肝細胞活力，抑制細胞凋亡，并具有劑量依賴效應。(2)抑制炎癥相關信號通路和炎癥因子：吳剛等[14]采用膽總管結(jié)扎法建立Wistar大鼠梗阻性黃疸模型，發(fā)現(xiàn)高劑量(80 mg/kg)、低劑量(40 mg/kg)的青藤堿均可減輕梗阻性黃疸大鼠的肝組織病變，并可降低其血清中總膽紅素、直接膽紅素、AST、ALT水平，具有顯著的保肝護肝作用；同時，青藤堿還可下調(diào)梗阻性黃疸大鼠肝臟組織轉(zhuǎn)化生長因子β1(transforming growth factor β1，TGF-β1)的表達，說明青藤堿可能是通過抑制TGF-β1的表達來發(fā)揮保肝作用。Chen等[12]也認為青藤堿對肝臟的保護作用是多靶點的，青藤堿不僅可以減輕急性肝損傷模型小鼠肝臟微環(huán)境的氧化應激反應，還可以通過TGF-β/Smad信號通路調(diào)節(jié)肝臟免疫反應以達到保肝護肝的效果。除此之外，張家薇等[15]使用阿奇霉素誘導大鼠急性肝損傷后給予青藤堿治療，發(fā)現(xiàn)青藤堿可明顯改善急性肝損傷大鼠肝臟組織病變，認為其通過抑制p38 信號通路活化，進而抑制促炎因子過度產(chǎn)生、降低肝細胞凋亡率，從而發(fā)揮保護肝臟細胞的作用。朱昱豪等[16]用刀豆蛋白A建立大鼠急性免疫性肝損傷模型，觀察青藤堿的治療作用及其機制，結(jié)果顯示青藤堿通過抑制細胞因子白細胞介素(interleukin,IL)-2的產(chǎn)生、促進細胞因子IL-10的產(chǎn)生以及保護細胞膜等多種途徑減輕肝損傷發(fā)揮肝保護的作用。

2 減緩肝纖維化的作用

肝纖維化是多種慢性肝臟疾病發(fā)展為肝硬化及肝癌的必經(jīng)病理過程，其本質(zhì)為肝臟持續(xù)受損導致肝實質(zhì)細胞變性、壞死，肝臟微環(huán)境發(fā)生改變，引起肝星狀細胞過度活化，從而表達α-平滑肌肌動蛋白，合成Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型膠原蛋白和層粘連蛋白；與此同時，基質(zhì)金屬蛋白酶/基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制劑的平衡失調(diào)，導致細胞外基質(zhì)分泌增加、降解減少而出現(xiàn)大量沉積，最終導致肝纖維化[1-2]。

研究表明，肝纖維化可以發(fā)生逆轉(zhuǎn)，但肝纖維化往往癥狀隱匿，隨著肝纖維化程度的逐漸加重會引起肝臟結(jié)構(gòu)改變、功能喪失并最終導致肝硬化，進一步發(fā)展可引起肝癌；病情一旦發(fā)展到肝硬化、肝癌階段，治療困難，預后更差[17]。阻止或減緩肝纖維化的發(fā)生，是治愈大多數(shù)慢性肝病患者的核心要素。解建中[18]使用不同濃度的青藤堿溶液處理人肝星狀細胞系LX-2細胞，結(jié)果表明青藤堿可抑制肝星狀細胞的增殖并誘導其凋亡；其還應用四氯化碳誘導雄性C57BL/6小鼠建立肝纖維化模型，并給予青藤堿干預，發(fā)現(xiàn)給予青藤堿灌胃治療可下調(diào)肝纖維化小鼠肝組織中TGF-β的表達、降低膠原生成、減少肝星狀細胞活化并誘導其凋亡。這表明青藤堿可減緩小鼠肝組織纖維化進程，但具體作用機制仍需進一步闡明。

3 抗腫瘤作用

肝癌是一種臨床上十分常見的惡性腫瘤，2020年全球患病率位居第6，死亡率位居第3位[19]，而中國是肝癌新增病例最多的國家[3]。諸多研究表明，青藤堿能通過調(diào)控多種信號通路、影響腫瘤微環(huán)境從而抑制腫瘤細胞的增殖、促進細胞凋亡，對肝癌、肺癌、胃癌、乳腺癌、宮頸癌和前列腺癌等多種腫瘤細胞增殖均具有顯著的抑制作用；同時其可抑制腫瘤的侵襲及轉(zhuǎn)移，并可降低腫瘤細胞的耐藥性等[9，20-21]。

青藤堿可通過多種途徑抑制肝癌細胞增殖：(1)青藤堿可以促進肝癌腫瘤細胞系HepG2細胞中Apo2.7的表達、誘導線粒體內(nèi)凋亡因子釋放，下調(diào)抑凋亡基因B細胞淋巴瘤-2基因的表達，上調(diào)促凋亡基因Fas的表達，從而引發(fā)人肝癌細胞的凋亡[22]。(2)0.125～2.5 mmol/L 的青藤堿可以抑制HepG2細胞內(nèi)基質(zhì)金屬蛋白酶9、CD44的表達，從而抑制肝癌細胞體外增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移[23]。(3)鹽酸青藤堿可顯著抑制HepG2細胞中血管內(nèi)皮生長因子及環(huán)氧化酶2的表達，其與抗轉(zhuǎn)鐵蛋白受體單克隆抗體聯(lián)合使用能產(chǎn)生正協(xié)同效應，從而提升藥物的抗腫瘤效應[26]。還有學者發(fā)現(xiàn)，青藤堿可抑制IL-1β、腫瘤壞死因子α及CCAAT/增強子結(jié)合蛋白 β的表達，推測青藤堿可能通過抑制Ras信號通路傳導從而抑制下游靶分子(環(huán)氧化酶2)的表達，進而調(diào)控炎癥因子的表達，使腫瘤細胞所處的組織微環(huán)境發(fā)生改變，誘導肝癌細胞凋亡[27]。(4)青藤堿能夠誘導多種肝癌細胞系(Hep3B、SMMC-7721、MHCC97H、MHCC97L、HHCC、BEL-7402系細胞)的細胞周期阻滯于G1期，并上調(diào)細胞中p21表達水平、激活半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(cysteinyl aspartate specific proteinase，Caspase)細胞凋亡途徑，最終達到抑制腫瘤細胞增殖的作用[26]。而其他學者對HepG2、Huh7細胞進行實驗也獲得相似的結(jié)果[27-28]。(5)青藤堿還可上調(diào)肝癌細胞SMMC-7721內(nèi)死亡受體DR4、DR5的表達從而抑制肝癌細胞增殖并促使其凋亡[29]。(6)王高峰等[30]認為青藤堿不僅可以調(diào)控Caspase-3、Caspase-9、內(nèi)凹陷蛋白1和SOX2的表達進而抑制肝癌細胞的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移，而且青藤堿還是一種高效的逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑，可以抑制或阻斷肝癌細胞內(nèi)DNA的復制，以達到抑制腫瘤細胞生長的目的。

4 肝移植術(shù)后的保護作用

肝病一旦發(fā)展到肝硬化、肝癌階段，治療十分困難，目前臨床上最為有效的治療措施就是進行肝移植[3]。肝移植過程中最常見的問題之一就是肝臟缺血再灌注引發(fā)組織損傷，約10%的移植器官因此發(fā)生功能衰竭。而減輕缺血再灌注損傷有助于促進肝移植患者術(shù)后的恢復。林峰等[31]采用Kamada法建立大鼠原位肝移植模型，并給予青藤堿干預，發(fā)現(xiàn)青藤堿能夠抑制肝細胞凋亡，減輕肝細胞和肝竇內(nèi)皮細胞損傷，降低血清ALT水平，顯著提高肝移植大鼠1周存活率，具有修復肝移植缺血再灌注損傷的效果。

其次，肝臟移植后CD4+T淋巴細胞被進一步激活，其亞群Th1、Th17細胞大量增殖，激發(fā)免疫效應細胞產(chǎn)生大量IL(IL-2、IL-17等)，啟動、加劇移植器官的免疫應答，造成移植器官損傷[32]，此時若使用藥物控制過度的免疫應答，阻斷抗原遞呈，減少IL的表達，可有效減緩急性排斥反應[33]。越來越多的研究表明，合理應用青藤堿可明顯減輕肝移植器官排斥反應，有效延長移植動物生存時間[31，34]。蔡振剛等[35]使用“二袖套”法建立大鼠原位肝移植模型，分別選用環(huán)孢素A、青藤堿和兩者聯(lián)合進行干預，觀察其對肝移植術(shù)后排斥反應的干預效果，結(jié)果顯示環(huán)孢素A雖然具備較好的免疫抑制作用，但它會過度抑制IL-2的表達，進而降低肝臟內(nèi)淋巴細胞的凋亡率，此外，肝臟內(nèi)環(huán)境缺乏IL-2會影響調(diào)節(jié)性T細胞的產(chǎn)生和功能狀態(tài)；而聯(lián)合用藥后，青藤堿不但可以減少環(huán)孢素A的使用劑量，還可以促進肝內(nèi)淋巴細胞凋亡，維持促炎、抑炎因子的動態(tài)平衡，減輕肝臟損傷。鄧衛(wèi)平等[32]建立大鼠巨細胞病毒性肝炎模型后進行肝臟移植，使用青藤堿緩釋膠囊灌胃干預，結(jié)果表明青藤堿可抑制CD4+T淋巴細胞分化成Th1、Th17細胞，抑制肝組織中TGF-β1、腫瘤壞死因子α、IL-2和IL-17的表達，能有效抑制巨細胞病毒性肝炎大鼠肝移植術(shù)后急性排斥反應。王欣玲等[36]建立大鼠肝細胞癌模型，觀察青藤堿對肝細胞癌大鼠肝移植術(shù)后免疫應答的影響，發(fā)現(xiàn)青藤堿可以顯著降低肝細胞癌大鼠肝臟組織中IL-2、IL-6 、腫瘤壞死因子α、TGF-β1和趨化因子-10的水平、降低肝細胞癌大鼠靜脈血中Treg和CD4+T細胞的百分率，說明青藤堿可抑制肝細胞癌大鼠肝移植術(shù)后細胞免疫，而這有利于減輕肝移植術(shù)后的肝損傷。

5 促進肝再生

肝臟作為人體內(nèi)重要的消化器官，具有很強的再生能力。但肝再生過程復雜，易受到多種因素的影響，確切的機制有待進一步闡明。近年來，中醫(yī)藥調(diào)控肝再生能力治療急慢性肝病的作用和機制正成為新的研究熱點。王品[37]通過左肝葉切除術(shù)建立大鼠肝損傷模型，并給予靜脈注射青藤堿治療，結(jié)果顯示青藤堿無明顯的腎毒性，且可以提高肝損傷大鼠的肝再生指數(shù)，降低血清ALT、AST水平和肝組織中TGF-β1的表達水平，提示青藤堿具有促進肝再生的作用，而這主要通過抑制肝組織中的TGF-β1表達來實現(xiàn)。

6 小結(jié)與展望

青藤堿在肝病治療中的作用機制研究目前已成為熱點，綜合現(xiàn)有的研究結(jié)果，青藤堿對肝損傷的保護、對肝移植術(shù)后保護和抗肝癌方面研究報告較多，而對于促進肝再生、減緩肝纖維化的研究還比較薄弱。目前，雖然已經(jīng)在多方面開展了青藤堿治療肝病的研究，揭示了青藤堿保護肝臟和抗肝癌的部分機制，但大部分研究仍然停留在體外試驗和動物實驗；此外，青藤堿對腫瘤細胞的抑制作用與作用時間、濃度有著密切關系，但大部分實驗只分析干預后數(shù)小時或數(shù)天內(nèi)的結(jié)果，缺乏長期的定性與定量研究，這也在很大程度上限制了青藤堿的使用范圍。因此，應進一步深入研究青藤堿治療肝臟疾病的分子生物學機制，全面評估藥用效果與臨床應用價值。

青風藤種類繁多，現(xiàn)已將其提取物制成多種制劑，如鹽酸青藤堿注射劑、毛青藤堿片、正清風痛寧膠囊等[38]，均具有廣闊的應用與推廣前景。然而目前對青藤堿藥用效果的評價并不一致。部分研究表明青藤堿生物半衰期短，在體內(nèi)代謝較快，用藥劑量大，毒副作用較大，容易引起過敏性休克、皮疹、白細胞減少及胃腸道反應等毒副作用[31，39-40]。但也有學者發(fā)現(xiàn)青風藤毒性低，不良反應小[41]，在促進肝再生的過程中沒有明顯腎毒性[37]；葉木榮等[42]還發(fā)現(xiàn)，采用青藤堿以較高劑量、較長時間對大鼠進行腹腔注射，青藤堿在大鼠肝臟的分布濃度最高，且有短暫的蓄積性，但對肝功能影響不大；此外，蔡振剛等[35]發(fā)現(xiàn)青藤堿和其他藥物配合使用還可減緩其他藥物對腎臟等器官的損傷。在研究青藤堿藥用機制與臨床應用時，要將其毒副作用研究作為重點之一，以積極推動我國中醫(yī)藥在國際上的競爭力，全面開發(fā)利用我國的青藤資源。