李 嘉，劉曉燕，彭慧云,陳耀武

(1.南華大學(xué)附屬長沙市中心醫(yī)院 兒科，湖南 長沙410000；2.郴州市第一人民醫(yī)院 手足顯微外科)

硬骨素(SOST)是一種主要由骨細(xì)胞分泌的蛋白質(zhì)，其主要功能是抑制成骨細(xì)胞礦化，進(jìn)而抑制骨形成[1]。維生素D缺乏性佝僂病患兒早期便會出現(xiàn)骨礦化不足。本研究擬通過分析患維生素D缺乏性佝僂病的嬰幼兒血清SOST的水平變化，探討SOST在佝僂病診斷中的意義。

1 資料與方法

1.1 對象

選取2016年1月至2018年1月來長沙市中心醫(yī)院兒科就診的符合維生素D缺乏性佝僂病診斷標(biāo)準(zhǔn)[2]的61例嬰幼兒，列入佝僂病組，其中男性30例，女性31例；0-1歲齡患兒19例，1-2歲齡患兒20例，2-3歲齡患兒22例。選取來本院體檢的健康嬰幼兒51例，其中男性24例，女性27例；0-1歲齡嬰兒16例，1-2歲齡幼兒18例，2-3歲齡幼兒17例。排除有骨折史、近期有大量維生素D或激素類藥物應(yīng)用史、肝腎等重要器官功能障礙、先天性疾病的嬰幼兒。

1.2 方法

晨起空腹采集靜脈血5 ml，靜置于4℃冰箱中12 h，待血清析出后，3 000 rpm離心10 min，吸取適量的血清凍于-80℃冰箱中保存待測。標(biāo)本檢測前提前30 min復(fù)溫。采用羅氏P800全自動生化分析儀檢測血清中的鈣、磷水平；采用英國IDS公司的ELISA試劑盒檢測血清中25-(OH)D的水平；采用美國R&D公司的ELISA試劑盒檢測血清中SOST的水平。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 兩組血清SOST、25-(OH)D、鈣、磷水平比較

佝僂病組患兒的血清SOST、25-(OH)D水平分別為1.44±0.52 ng/mL、45.2±9.43 nmol/mL，顯著低于對照組健康嬰幼兒的2.53±1.23 ng/mL、92.5±22.3 nmol/mL，其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；兩組之間血清鈣、磷水平差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見表1。

表1 兩組血清SOST、25-(OH)D、鈣、磷水平比較

2.2 年齡和性別對兩組血清SOST、25-(OH)D、鈣、磷水平的影響

兩組中0-1歲齡嬰兒血清25-(OH)D水平顯著低于1-2歲齡幼兒，其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；1-2歲齡幼兒血清25-(OH)D水平顯著低于2-3歲齡幼兒，其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；兩組中0-1歲齡嬰兒血清SOST水平顯著低于1-2歲齡幼兒，其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；1-2歲齡幼兒血清SOST水平顯著低于2-3歲齡幼兒，其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；兩組中0-3歲嬰幼兒血清鈣、磷水平均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)；兩組血清SOST、25-(OH)D、鈣、磷水平男女之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見表2。

2.3 治療前后血清SOST、25-(OH)D、鈣、磷水平比較

治療后佝僂病組血清SOST、25-(OH)D水平顯著高于治療前，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；鈣、磷水平差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見表3。

表2 兩組中不同年齡、不同性別的血清SOST、25-(OH)D、鈣、磷水平

表3 佝僂病患兒治療前后血清SOST、25-(OH)D、鈣、磷水平比較

2.4 兩組中血清SOST與25-(OH)D水平之間的相關(guān)性

佝僂病組中血清SOST與25-(OH)D水平之間呈正相關(guān)關(guān)系(r=0.62,P<0.05)；對照組中血清SOST與25-(OH)D水平之間呈正相關(guān)關(guān)系(r=0.57,P<0.05)。

3 討論

維生素缺乏性佝僂病作為一種慢性營養(yǎng)缺乏性疾病，在我國有著較高的發(fā)病率，是我國重點(diǎn)防治的兒科四大疾病之一。佝僂病傳統(tǒng)的診斷手段包括檢測血清中鈣、磷、25-(OH)D的含量；手腕部X射線檢測等。但這些血清指標(biāo)缺乏特異性和敏感性；X射線檢測雖然可以反映患兒骨組織的改變，但它無法檢測疾病早期的變化，一般在佝僂病后期才會表現(xiàn)出異常，即骨組織礦物含量降至30%-40%以下[3-5]。因此，找到一種高特異性的診斷血清指標(biāo)就顯得十分必要。

SOST是一種骨細(xì)胞特異性分泌蛋白，對骨形成起負(fù)性調(diào)節(jié)作用。Balemans W等[6]在研究骨硬化癥(sclerosteosis)時(shí)發(fā)現(xiàn)硬骨素缺失后，患者骨量顯著增加。Van Bezooijen等[7]發(fā)現(xiàn)SOST通過與LRP5/6結(jié)合，抑制Wnt/β-catenin信號通路的傳導(dǎo)，進(jìn)而抑制骨形成。Li等[8]發(fā)現(xiàn)SOST敲除后的大鼠骨量顯著增加。應(yīng)用SOST單克隆抗體干預(yù)后的骨質(zhì)疏松小鼠骨量顯著增加[9]。目前，SOST單克隆抗體Evenity已獲美國食品藥品管理局(FDA)批準(zhǔn)上市，用于治療絕經(jīng)后女性伴高骨折風(fēng)險(xiǎn)的骨質(zhì)疏松癥。本研究發(fā)現(xiàn)佝僂病組患兒血清SOST水平為1.44±0.52 ng/mL顯著低于對照組健康嬰幼兒的2.53±1.23 ng/mL。認(rèn)為這主要是由于維生素D缺乏后，成骨細(xì)胞礦化不足，骨細(xì)胞形成減少，進(jìn)而導(dǎo)致SOST分泌減少。同時(shí)，還發(fā)現(xiàn)無論是佝僂病患兒還是健康嬰幼兒，他/她們的血清SOST水平都隨著年齡的增加顯著上升。這可能是由于兒童時(shí)期骨組織處于高代謝水平[10]，骨形成不斷增加，進(jìn)而導(dǎo)致了骨細(xì)胞分泌的SOST也不斷增加。

25-(OH)D是維生素D的代謝產(chǎn)物，在機(jī)體內(nèi)具有穩(wěn)定、半衰期長、水平高等特點(diǎn)，能較好的反映體內(nèi)維生素D的含量，可作為早期發(fā)現(xiàn)佝僂病的一項(xiàng)診斷指標(biāo)[11-12]。本實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示佝僂病組患兒血清25-(OH)D平均水平為45.2 nmol/L顯著小于對照組健康嬰幼兒的92.5 nmol/L。近期發(fā)布的關(guān)于維生素D缺乏的評估、治療及預(yù)防方面的臨床實(shí)踐指南推薦：當(dāng)血清25-(OH)D水平<50 nmol/L時(shí)，可診斷為維生素D缺乏[13]。本結(jié)果符合當(dāng)前對維生素D缺乏的定義。血清鈣、磷作為傳統(tǒng)的診斷維生素D缺乏性佝僂病的生化指標(biāo)，在本研究中并未見明顯的改變，這可能和體內(nèi)的降鈣素和甲狀腺素的鈣磷調(diào)節(jié)作用有關(guān)[14]。同時(shí)，還發(fā)現(xiàn)佝僂病組和對照組的血清SOST和25-(OH)D水平均無性別差異，且后兩者的水平呈顯著正相關(guān)，進(jìn)一步明確了SOST在輔助診斷佝僂病中的重要意義。

隨著國民健康意識的提高，目前國內(nèi)的重度佝僂病患兒已相對少見。但由于臨床癥狀不明顯、檢測手段不特異等原因，佝僂病的早期診斷還存在著許多的困難。SOST作為骨細(xì)胞特異性分泌的蛋白，其在骨形成障礙的維生素D缺乏性佝僂病患兒血清中的變化情況至今尚未見報(bào)道。本研究通過檢測正常嬰幼兒和維生素D缺乏性佝僂病患兒血清中的SOST、25-(OH)D、鈣、磷含量，明確了SOST在正常及疾病狀態(tài)下的變化情況，為維生素D缺乏性佝僂病的篩查提供了有力的依據(jù)。