齊小芬 白 賓 薛會(huì)朝 王 瑜 王國英 秦 雙

乳腺癌患者的基礎(chǔ)發(fā)病率較高，其遠(yuǎn)期多器官功能衰竭或者臨床預(yù)后惡化風(fēng)險(xiǎn)的比例持續(xù)維持在較高的水平[1]。乳腺癌患者容易早期發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，而淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的發(fā)生能夠顯著影響患者治療方案的選擇和臨床預(yù)后水平。不同的病理性因素均能夠促進(jìn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的發(fā)生，分子生物學(xué)水平的改變，能夠在促進(jìn)癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移和淋巴結(jié)浸潤過程中發(fā)揮重要的作用[2]。組織蛋白酶D(Cath-D)的表達(dá)能夠通過促進(jìn)癌細(xì)胞間質(zhì)成分的分解，為癌細(xì)胞侵襲淋巴結(jié)提供基礎(chǔ)[3]；表皮生長因子受體2(epidermalgrowthfactorreceptor，c-erbB-2)的上升，能夠通過誘導(dǎo)其他生長因子家族成員的激活，最終提高腫瘤細(xì)胞的生長和復(fù)制風(fēng)險(xiǎn)[4]。為了揭示Cath-D、c-erbB-2的表達(dá)與乳腺癌的關(guān)系，從而為臨床上乳腺癌患者的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移高危評(píng)估提供參考，本次研究探討了Cath-D、c-erbB-2的表達(dá)及其與乳腺癌患者體內(nèi)腫瘤標(biāo)志物和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系，報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選取2017年2月至2018年2月在我院接受手術(shù)治療的乳腺癌患者為研究對象。納入標(biāo)準(zhǔn)：①成年者；②經(jīng)術(shù)中病理檢查確診為乳腺癌者；③無其他原發(fā)腫瘤者。排除標(biāo)準(zhǔn)：①不愿參與本項(xiàng)研究者；②合并嚴(yán)重基礎(chǔ)疾病者。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)共納入乳腺癌患者100例，年齡30～56歲，平均(45.83±8.05)歲。乳腺纖維腺瘤納入標(biāo)準(zhǔn)：年齡≥18周歲，經(jīng)術(shù)中病理確診為乳腺纖維腺瘤者，共納入100例，年齡28～52歲，平均(45.72±10.13)歲。2組的資料分布無明顯差別，具有可比性。

1.2 檢測方法

石蠟切片采用二甲苯進(jìn)行脫臘至水，5%的雙氧水常溫在孵育10 min，采用磷酸鹽緩沖液孵育5 min，蒸餾水沖洗3次，每次5 min，5%的山羊血清抗體封閉10 min，不沖洗，滴加一抗(購自abcum公司，濃度：1∶500)，4 ℃冰箱孵育過夜，蒸餾水沖洗3次，每次5 min，滴加生物素標(biāo)記好的二抗(購自北京康泰生物，濃度：1∶1000)，37 ℃孵育30 min，蒸餾水沖洗3次，每次5 min，滴加第二代辣根酶標(biāo)記的工作液體，37 ℃孵育10 min，蒸餾水沖洗3次，每次5 min，顯色之后采用酒精脫水、二甲苯透明、樹膠封片，鏡下觀察。采集入院后靜脈血，離心后收集上清液，采用免疫發(fā)光法檢測CEA、CA15-3、CA125水平，檢測儀器為美國Bio-Bad全自動(dòng)酶標(biāo)儀，配套試劑盒購自羅氏檢測公司。

1.3 評(píng)價(jià)指標(biāo)

觀察乳腺癌(有、無淋巴轉(zhuǎn)移組)、乳腺纖維腺瘤患者組織切片Cath-D、c-erbB-2陽性表達(dá)情況，比較乳腺癌(有、無淋巴轉(zhuǎn)移組)、乳腺纖維腺瘤患者血清腫瘤標(biāo)志物水平的差異，分析淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳腺癌患者Cath-D、c-erbB-2陽性表達(dá)與腫瘤標(biāo)志物水平的相關(guān)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 11.5軟件分析。采用卡方檢驗(yàn)、t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 乳腺癌組和纖維腺瘤組患者組織切片Cath-D、c-erbB-2陽性表達(dá)的比較

乳腺癌組患者的組織切片Cath-D、c-erbB-2陽性表達(dá)率均高于乳腺纖維腺瘤組(χ2值=51.796、70.090，P<0.001)，見表1。

表1 乳腺癌組和纖維腺瘤組患者組織切片Cath-D、c-erbB-2陽性表達(dá)的比較(例，%)

2.2 有、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移乳腺癌患者組織切片Cath-D、c-erbB-2陽性表達(dá)的比較

有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳腺癌患者組織切片Cath-D、c-erbB-2陽性表達(dá)率高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(P<0.05)。見表2。

表2 有、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移乳腺癌患者組織切片Cath-D、c-erbB-2陽性表達(dá)的比較(例，%)

2.3 乳腺癌組和纖維腺瘤組患者血清腫瘤標(biāo)志物水平的比較

乳腺癌組患者血清CEA、CA15-3、CA125水平均高于乳腺纖維腺瘤組(P<0.001)。見表3。

2.4 有、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移乳腺癌患者血清腫瘤標(biāo)志物水平的比較

有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組患者血清CEA、CA15-3、CA125水平高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(t=16.681、27.880、23.216，P<0.001)。見表4。

表3 乳腺癌組和纖維腺瘤組患者血清腫瘤標(biāo)志物水平的比較

表4 有、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移乳腺癌患者血清腫瘤標(biāo)志物水平的比較

2.5 淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳腺癌患者Cath-D、c-erbB-2陽性表達(dá)與腫瘤標(biāo)志物的相關(guān)性

有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳腺癌患者Cath-D、c-erbB-2陽性表達(dá)率與血清CEA、CA15-3、CA125水平呈正相關(guān)。見表5。

表5 乳腺癌患者Cath-D、c-erbB-2與腫瘤標(biāo)志物的相關(guān)性

3 討論

在具有BRCA基因突變的患者中，乳腺癌的發(fā)病率可顯著的上升[5]?，F(xiàn)階段臨床上通過手術(shù)及放化療措施綜合性治療乳腺癌，但治療后的患者病情進(jìn)展風(fēng)險(xiǎn)仍然較高。長期的臨床隨訪研究認(rèn)為，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的發(fā)生是影響乳腺癌治療預(yù)后的重要因素[6]，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移能夠?qū)е氯橄侔┗颊哌h(yuǎn)期復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)的上升，縮短乳腺癌患者的生存時(shí)間[7]。一項(xiàng)囊括了172例樣本量的乳腺癌患者病情隨訪觀察分析可見，發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳腺癌可占到所有病例的35%以上，特別是在中晚期患者中，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn)更高[8]。而本次研究對于乳腺癌患者體內(nèi)Cath-D、c-erbB-2的表達(dá)與患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移關(guān)系的研究，能夠揭示乳腺癌的臨床病理特征的進(jìn)展機(jī)制，從而為改善患者的生存預(yù)后提供參考。

Cath-D是組織蛋白酶家族成員，主要表達(dá)于平滑肌上皮組織和脂肪組織成分中。Cath-D結(jié)構(gòu)上包含了多個(gè)可水解的蛋白酶區(qū)域，能夠通過對于組織蛋白的水解作用，提高癌細(xì)胞的侵襲能力[9-10]；c-erbB-2是表皮生長因子家族成員，能夠提高癌細(xì)胞的增殖速度，促進(jìn)癌細(xì)胞DNA的持續(xù)性擴(kuò)增。越來越多的研究還認(rèn)為，c-erbB-2的表達(dá)能夠提高癌細(xì)胞的變形能力，提高淋巴結(jié)前哨轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn)[11]。

在本次研究中可以發(fā)現(xiàn)，Cath-D、c-erbB-2蛋白在乳腺癌患者中的表達(dá)濃度明顯的上升，提示了Cath-D、c-erbB-2可能參與了乳腺癌的發(fā)生發(fā)展過程，這主要考慮與Cath-D的表達(dá)上升，能夠影響到上皮細(xì)胞間質(zhì)轉(zhuǎn)換的風(fēng)險(xiǎn)，促進(jìn)了腫瘤細(xì)胞的浸潤，而c-erbB-2的表達(dá)上升能夠影響癌細(xì)胞的增殖特性，進(jìn)而促進(jìn)癌細(xì)胞的持續(xù)性擴(kuò)增過程。黃少江等[12]研究者也發(fā)現(xiàn)了c-erbB-2蛋白在乳腺癌患者中的異常表達(dá)情況，其發(fā)現(xiàn)在乳腺癌臨床分期進(jìn)展較為迅速的患者中，c-erbB-2蛋白的表達(dá)陽性率可明顯上升。在探討Cath-D、c-erbB-2的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移關(guān)系的過程中發(fā)現(xiàn)，在發(fā)生了淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者中，Cath-D、c-erbB-2的表達(dá)陽性率明顯的上升，高于未發(fā)生轉(zhuǎn)移的乳腺組織，差異較為明顯，提示Cath-D、c-erbB-2的表達(dá)能夠顯著促進(jìn)淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移。分析其原理，考慮與Cath-D、c-erbB-2的下列作用機(jī)制有關(guān)[13-15]：①Cath-D的表達(dá)上升能夠提高腫瘤細(xì)胞偽足形成的風(fēng)險(xiǎn)，促進(jìn)了腫瘤細(xì)胞的浸潤和粘附；②c-erbB-2的表達(dá)上升能夠促進(jìn)癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄和增殖活性的增強(qiáng)，維持癌細(xì)胞在淋巴結(jié)組織區(qū)域的生長能力。CEA、CA15-3、CA125是非特異性的腫瘤標(biāo)志物，在乳腺癌患者中，相關(guān)腫瘤標(biāo)志物的表達(dá)濃度明顯的上升，特別是在合并有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者中，CEA、CA15-3、CA125的表達(dá)濃度可進(jìn)一步的上升，這主要由于CEA、CA15-3、CA125能夠提高癌細(xì)胞粘附淋巴結(jié)內(nèi)皮組織的能力。最后相關(guān)關(guān)系分析可見，Cath-D、c-erbB-2陽性表達(dá)率與血清CEA、CA15-3、CA125水平正相關(guān)，進(jìn)一步提示了Cath-D、c-erbB-2的表達(dá)與乳腺癌患者的病情關(guān)系。

本次研究的創(chuàng)新性在于探討了Cath-D、c-erbB-2的表達(dá)與乳腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系。綜上所述，乳腺癌患者病理組織中Cath-D、c-erbB-2陽性表達(dá)率較高，且與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和腫瘤標(biāo)志物水平相關(guān)。