張麗柯 汪建光 劉德純

胃癌是常見消化道惡性腫瘤，近年來隨著人們生活習(xí)慣及飲食習(xí)慣的改變，胃癌發(fā)病率逐漸升高[1]。胃癌的發(fā)病機(jī)制尚未完全清楚，多基因突變及多階段的演變參與了其進(jìn)展[2]。硫氧還蛋白-1(thioredoxin，Trx-1)是由108個氨基酸殘基組成的小分子蛋白，能清除單態(tài)氧自由基實(shí)現(xiàn)抗腫瘤凋亡，與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、化療耐藥等均相關(guān)[3]。纖維連接蛋白1(Fibronetin1，F(xiàn)N1)是1種細(xì)胞外非膠原糖蛋白，在細(xì)胞黏附、遷移中起著重要作用，并參與胚胎發(fā)生、宿主防御等過程，在癌癥進(jìn)展中也有潛在作用[4]。因而本文通過探究胃癌組織Trx-1、FN1表達(dá)及其與臨床病理特征和生存的關(guān)系，了解Trx-1、FN1與胃癌發(fā)生、發(fā)展的關(guān)系，報告如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料

收集2016年1月至2017年1月來我院接受胃癌根治術(shù)切除標(biāo)本105例，男性58例，女性47例，年齡為25～71歲，平均(46.53±9.68)歲。所有標(biāo)本均在腫瘤切除后30 min內(nèi)采集，并切取距離腫瘤邊緣5 cm以上的癌旁組織作為對照，所有組織均迅速凍存于液氮。納入標(biāo)準(zhǔn)：①所有患者術(shù)前未經(jīng)化療，術(shù)后經(jīng)病理學(xué)確診為胃癌；②患者病歷資料完整；③所以患者均知情并同意手術(shù)。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他惡性腫瘤患者；②圍手術(shù)期出現(xiàn)嚴(yán)重并發(fā)癥或術(shù)中死亡者；③不能進(jìn)行隨訪患者。本研究經(jīng)醫(yī)學(xué)倫理委員會同意。

1.2 檢測方法

應(yīng)用免疫組化法檢測胃癌組織及癌旁組織中Trx-1、FN1的表達(dá)情況。步驟：石蠟切片用常規(guī)二甲苯脫蠟后，用梯度酒精脫水處理，再用枸櫞酸鹽緩沖液進(jìn)行微波抗原組織修復(fù)15 min，PBS沖洗后，用3%H2O2孵育10 min，PBS沖洗2次后，加入正常山羊血清進(jìn)行封閉20 min，加入兔單抗Trx-1(或兔單抗FN1)，37 ℃下孵育1 h，TBST沖洗2次。加入鼠兔通用二抗，37 ℃下孵育1 h，PBS沖洗2次，再加入DAB顯色劑、蘇木精復(fù)染、梯度酒精脫水、二甲苯透明等，最后用中性樹膠封片，顯微鏡下觀察。以0～4分來判定陽性細(xì)胞的百分比(陽性細(xì)胞數(shù)/總細(xì)胞數(shù)×100)：陽性細(xì)胞百分比<5%(0分)；陽性細(xì)胞百分比為6%～25%(1分)；陽性細(xì)胞百分比為26%～50%(2分)；陽性細(xì)胞百分比為51%～75%(3分)；陽性細(xì)胞百分比>75%(4分)。染色強(qiáng)度按無染色，弱、中、強(qiáng)染色分別評為0，1，2，3分。以兩個指標(biāo)的乘積作為總評分：<4分為低表達(dá)，≥4分為高表達(dá)。

1.3 觀察指標(biāo)

所有胃癌患者術(shù)后隨訪3年，以電話及門診形式進(jìn)行，隨訪內(nèi)容包括：患者病情進(jìn)展、影像學(xué)檢查，記錄患者隨訪期內(nèi)生存情況，第1年每3個月隨訪1次，第2～3年，每6個月隨訪1次，隨訪截止時間2020年1月。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 Trx-1、FN1在胃癌組織及癌旁組織中的表達(dá)情況

胃癌組織中Trx-1、FN1均呈高水平表達(dá)(P<0.05)，癌旁組織中Trx-1、FN1呈低表達(dá)(P<0.05)，結(jié)果見表1。

表1 兩組臨床療效比較/例

2.2 Trx-1、FN1與胃癌臨床病理特征的關(guān)系

Trx-1表達(dá)與組織分化、浸潤深度有關(guān)(P<0.05)，與性別、年齡、腫瘤部位、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤大小無關(guān)(P>0.05)；FN1表達(dá)與組織分化、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05)，與性別、年齡、腫瘤部位、腫瘤大小無關(guān)(P>0.05)，結(jié)果見表2。

2.3 Trx-1、FN1表達(dá)與生存分析

隨訪105例中，3年總生存率為58.10%，存活61例。Trx-1高表達(dá)組存活27例，低表達(dá)組存活34例，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；FN1高表達(dá)組存活30例，低表達(dá)組存活31例，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，結(jié)果見表3，圖1。

3 討論

我國是胃癌高發(fā)國家，就診的不及時使胃癌病死率較高，嚴(yán)重影響我國居民生命健康，而對胃癌發(fā)病機(jī)制的探究一直是研究重點(diǎn)[5]。Trx-1位于細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核中，能調(diào)節(jié)NF-κB的活性，并抑制程序性細(xì)胞死亡，從而促進(jìn)腫瘤生長[6]。有研究表明Trx-1的高表達(dá)與胰腺癌、乳腺癌、肺癌、宮頸癌等疾病發(fā)生、發(fā)展均相關(guān)[7]。潘濤等[8]研究表明Trx-1的表達(dá)水平升高與胃癌術(shù)后無病生存時間縮短相關(guān)，有望成為預(yù)測腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的標(biāo)志物之一。本研究中，胃癌組織中Trx-1、FN1均呈高水平表達(dá)，癌旁組織中Trx-1呈低表達(dá)，結(jié)果與前人[9]研究一致。Trx-1表達(dá)與組織分化、浸潤深度有關(guān)，說明Trx-1與胃癌的發(fā)展及侵襲有關(guān)。而Trx-1高表達(dá)組3年生存率較低表達(dá)組的低，說明Trx-1高表達(dá)會降低胃癌患者生存時間。腫瘤生長、浸潤與血管生成密切相關(guān)，Trx-1的高表達(dá)能增加HIF-α表達(dá)，使血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)增加，促進(jìn)腫瘤血管生成，造成腫瘤侵襲[10]；胃癌細(xì)胞往往缺氧并發(fā)生氧化應(yīng)激反應(yīng)，而Trx-1能介導(dǎo)氧化還原的平衡，促進(jìn)胃癌細(xì)胞生長[11]。Trx-1能通過調(diào)節(jié)凋亡信號調(diào)節(jié)激酶(ASK-1)活性，從而參與抑制腫瘤細(xì)胞凋亡過程[12]。Trx-1還能抑制腫瘤細(xì)胞的自發(fā)凋亡及藥物誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡，降低腫瘤細(xì)胞對抗癌藥物的敏感性，不利于預(yù)后，因此Trx-1可能成為抗癌治療的藥物靶標(biāo)[13]。

表2 Trx-1、FN1與胃癌臨床病理特征的關(guān)系/例

表3 Trx-1、FN1表達(dá)與生存分析/%

圖1 Trx-1表達(dá)、FN1表達(dá)與生存分析

FN1是細(xì)胞外基質(zhì)蛋白分子，能介導(dǎo)細(xì)胞黏附過程，在細(xì)胞外基質(zhì)(EMC)形成和再上皮化中起著關(guān)鍵作用，是多種癌細(xì)胞形成和發(fā)育的重要調(diào)控因子，比如乳腺癌、卵巢癌、甲狀腺癌、鼻咽癌[14]。有研究[15]表明FN1能促進(jìn)鼻咽癌細(xì)胞增殖，下降FN1的表達(dá)能通過激活NF-κB通路，抑制MMP2及MMP9表達(dá)，從而抑制細(xì)胞凋亡。本研究中，胃癌組織中FN1均呈高水平表達(dá)，癌旁組織中FN1呈低表達(dá)，F(xiàn)N1表達(dá)與組織分化、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，說明FN1在胃癌組織中高表達(dá)，與胃癌的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)。FN1高表達(dá)組3年生存率低于低表達(dá)組，說明FN1高表達(dá)會影響患者生存情況。細(xì)胞外基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)與腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)，有研究[16]表明FN1的高表達(dá)能通過激活MMP2/MMP9(EMT通路)促進(jìn)胃癌細(xì)胞的增殖、遷徙及侵襲。也有研究[17]表明癌間質(zhì)的FN1對癌細(xì)胞有趨化作用，癌細(xì)胞能特異性黏附在癌間質(zhì)上，并生成和轉(zhuǎn)移，因而FN1的表達(dá)增高可能是胃癌浸潤轉(zhuǎn)移的機(jī)制之一。孫陽等[18]研究表明FN1的表達(dá)與KRAS、P53、TGF-β、ECM、細(xì)胞黏附和細(xì)胞骨架蛋白基因通路有關(guān)，F(xiàn)N1可作為腫瘤治療的潛在靶點(diǎn)。本研究還存在一定不足，如樣本量較少，隨訪時間較短，Trx-1、FN1與腫瘤的具體作用機(jī)制還未完全解釋清楚，因此還需進(jìn)行大規(guī)模及多中心研究，以提高研究的客觀性。

綜上，Trx-1、FN1在胃癌組織中均呈高表達(dá)，與胃癌的侵襲、發(fā)展相關(guān)，可能參與了腫瘤惡化的調(diào)控，并降低患者生存期。