張 力 包和婧? 鄧天偉 張 寒 李 剛

(1.重慶大學附屬三峽醫(yī)院(三峽中心醫(yī)院)腫瘤分院腫瘤消化科,重慶 404000;2.重慶大學附屬三峽醫(yī)院(三峽中心醫(yī)院)消化內(nèi)科,重慶 404000)

胃癌是胃腸道惡性腫瘤中最常見的惡性腫瘤之一,是全球死亡率最高的癌癥之一[1-2]。胃癌早期不易診斷,且復發(fā)率和侵襲率高,造成胃癌發(fā)病率與病死率極高[3-4]。隨著臨床診斷與治療的發(fā)展,胃癌的發(fā)病率和死亡率已穩(wěn)步降低,但患者的總生存率仍低于29%[5-6]。因此,探究胃癌的發(fā)病機制對降低患者死亡率,提高生存率具有非常重要的指導意義。環(huán)狀RNA(circRNA)是新近發(fā)現(xiàn)的內(nèi)源性非編碼RNA,其長度為數(shù)百甚至數(shù)千個堿基,具有共價封閉的結構[7-8]。大量研究表明,circRNA可調(diào)控多種癌癥有關的生物學過程,包括細胞增殖、侵襲和轉移等過程[9-11]。circRNA 在哺乳動物體內(nèi)廣泛存在,含量穩(wěn)定,是目前腫瘤學等領域研究的熱點之一[12],但hsa_circ_0005692作為circRNA成員之一,目前研究極少。經(jīng)過查閱文獻,我們僅發(fā)現(xiàn)一篇文獻報道此circRNA。陳鑫等[13]認為hsa_circ_0005692 在胃癌組織和細胞中表達下調(diào),且能抑制胃癌細胞增殖、遷移和侵襲。但hsa_circ_0005692 在胃癌發(fā)生中的調(diào)控關系,下游的調(diào)控網(wǎng)絡等目前尚無研究報道。我們通過生信網(wǎng)站查詢發(fā)現(xiàn)hsa_circ_0005692 和miR-625-5p 之間存在結合位點。miR-625-5p 在結直腸癌、胃癌、膠質(zhì)細胞癌等惡性腫瘤的發(fā)生均具有調(diào)控作用,但miR-625-5p 在不同癌癥中具有相反的表達趨勢[14-16]。miR-625-5p 在胃癌中的表達調(diào)控機制目前尚無定論。此外,我們通過starbase 網(wǎng)站篩選miR-625-5p 的下游靶基因發(fā)現(xiàn),miR-625-5p 和CXXC4 之間存在結合位點。且目前暫無研究報道m(xù)iR-625-5p 和CXXC4 是否具有靶向調(diào)控關系。有研究報道CXXC4 可促進卵巢癌細胞化療敏感性[17]。且有研究報道CXXC4 可能作為新的胃癌抑制因子,可通過誘導胃癌細胞凋亡,抑制胃癌發(fā)展[18]。

在本研究中,我們通過培養(yǎng)胃癌細胞,并進行相應處理,旨在探究hsa_circ_000569 在胃癌中的調(diào)控關系。

1 材料和方法

1.1 實驗細胞

人胃癌細胞系SNU-1、BGC-803、NCI-N87、HS-746T 和胃黏膜上皮細胞GES-1(購于上海中喬新舟生物科技有限公司),在37℃,5% CO2條件下培養(yǎng)進行后續(xù)實驗。

1.2 主要試劑

10%胎牛血清(批號:10100139C,美國Gibco 公司);鏈霉素(100 mg/mL)和青霉素(100 U/mL)的RPMI-1640 細胞培養(yǎng)液(批號:A1049101,美國Gibco 公司);Lipofectamine 2000(批號:11668-019,美國Invitrogen 公司);質(zhì)粒(上海吉瑪生物公司)。

1.3 實驗方法

1.3.1 雙熒光素酶實驗

生物學預測網(wǎng)站進行miR-625-5p 的結合位點分析,驗證是miR-625-5p 可結合hsa_circ_0005692和CXXC4,人工合成hsa_circ_000569 和CXXC4 3'UTR 基因片段構建到pMIR-reporter 中,在hsa_circ_000569 和CXXC4 野生型上設計種子序列的互補序列突變位點,構建到pMIR-reporter 報告質(zhì)粒中。將測序正確的熒光素酶報告質(zhì)粒WT、MUT 分別與miR-625-5p 共轉染至SNU-1 細胞(上海北諾生物科技有限公司) 中。轉染48 h 后,使用Dual-Luciferase Reporter Assay System (型 號:promegaE1910,美國Promega 公司)檢測熒光素酶活性。

1.3.2 MTT 實驗

各組SNU-1 細胞轉染培養(yǎng)48 h 后,收集各組細胞進行細胞計數(shù):以每孔5×103個細胞接種于96孔板中,培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。24 h、48 h、72 h 時每孔加20 μL 5 mg/mL MTT 溶液,繼續(xù)37℃孵育2 h 后終止培養(yǎng);吸棄孔內(nèi)培養(yǎng)上清液,每孔加150 μL DMSO;在酶聯(lián)免疫檢測儀570 nm 處讀取各孔吸光度值(optical density,OD)值。

1.3.3 Transwell 實驗檢測細胞遷移和侵襲能力

細胞轉染48 h 后用無血清的RPMI-1640 培養(yǎng)基重懸。遷移:取100 μL 細胞密度為3×105/mL 的細胞懸液加入24 孔transwell 小室的上室。侵襲:上室預先加入50 μL 基質(zhì)膠,室溫下風干4 h,取100 μL 細胞密度為3×105/mL 的細胞懸液加入24 孔transwell 小室的上室。24 孔transwell 下室每孔添加500 μL 含10% FBS 的RPMI-1640 培養(yǎng)基,放置于37℃、5% CO2培養(yǎng)箱24 h 后,用PBS 洗兩遍,甲醇處理10 min,結晶紫處理10 min。取下小室纖維膜,封片,每組細胞取6 個隨機視野在顯微鏡下拍照并計數(shù)。

1.3.4 流式細胞術檢測細胞凋亡率

Annexin V-FITC/PI 雙標染色檢測細胞凋亡,將處理好的細胞置于37℃、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48 h,收集細胞,PBS 溶液洗滌2 次后離心將細胞重懸于200 μL 結合緩沖液中,加入10 μL Annexin VFITC(批號:ab14085,英國Abcam 公司)和5 μL PI輕輕混勻,避光室溫反應15 min,加入300 μL 結合緩沖液,用流式細胞儀以激發(fā)波長488 nm 檢測細胞凋亡情況。實驗重復3 次。

1.3.5 RIP 實驗

采用RIP 試劑盒(型號:MAGNARIP02,美國millipore 公司)檢測hsa_circ_0005692 與AGO2 蛋白結合情況。收集胃癌細胞后裂解,細胞提取液與抗體孵育進行共沉淀,取50 μL 磁珠清洗后重懸于100 μL RIP Wash Buffer 中加入5 μg 抗體AGO2(批號:ab32381,1 ∶50,英國Abcam 公司),IgG(1 ∶100,批號:ab109489,英國Abcam 公司)孵育。磁珠-抗體復合物經(jīng)清洗后與重懸于900 μL RIP Wash Buffer,加入100 μL 細胞提取液4℃孵育過夜。樣品經(jīng)蛋白酶K 消化后提取RNA,qRT-PCR 檢測hsa_circ_0005692 表達水平。

1.3.6 RNA pull-down

轉染W(wǎng)T 生物素化的和MUT 生物素化的miR-625-5p 的胃癌細胞48 h 后,細胞裂解液(批號:ab95401,英國Abcam 公司)裂解,將裂解物與預涂了RNase-free 和酵母tRNA 的M-280 鏈霉親和素磁珠(批號:112-06D,美國Invitrogen 公司)4℃,孵育3 h,然后用冷裂解液洗滌兩次,用低鹽緩沖液和高鹽緩沖液分別洗3 次和1 次,結合的RNA 通過TRIzol 純化,qRT-PCR 檢測hsa_circ_0005692 表達水平。

1.3.7 Western blot 檢測

收集細胞,RIPA 裂解液(批號:AR0105-30,武漢博士徳公司)進行裂解,然后用BCA 蛋白定量試劑盒(70-PQ0012,MultiSciences,中國杭州)進行蛋白濃度的測定。蛋白溶于2×SDS 上用10% SDSPAGE 分離,轉移至PVDF 膜,5%脫脂奶粉室溫封閉1 h,PBS 沖洗2 min,將PVDF 膜與稀釋的一抗CXXC4(1 ∶1000,批號:ab105400,英國abcam 公司),N-cadherin(1 ∶1000,批號:ab76057,英國abcam公司),MMP9(1 ∶1000,批號:ab38898,英國abcam公司),GAPDH(1 ∶2000,批號:ab 9485,英國abcam公司)4℃過夜,TBST 洗滌3 次每次5 min,1 ∶100 稀釋的 HRP 標記二抗羊抗鼠 IgG 抗體(批號ab 205719;1 ∶2000;英國Abcam 公司)孵育1 h。取ECL 熒光檢測試劑盒(批號:BB -3501,英國Ameshame 公司)中等量的A 液和B 液,暗室中混勻,將其滴加膜上,放入凝膠成像儀中曝光成像。用Bio-Rad 圖象分析系統(tǒng)(型號:Gel Doc XR+,美國BIO-RAD 公司)照相,GAPDH 作為內(nèi)參,用Quantity One v4.6.2 軟件分析。

1.3.8 qRT-PCR 檢測

使用TRIzol 試劑盒(批號:15596026,美國Invitrogen 公司)提取總RNA,按照PrimeScript RT reagent Kit(批號:RR047 A,日本TaKaRa 公司)說明書將總的RNA 反轉錄成cDNA,對合成的cDNA 用Fast SYBR Green PCR 試劑盒(批號:BL705A,Biosharp 公司)與ABI PRISM 7300 RT-PCR 系統(tǒng)(型號:ABI7300,美國ABI 公司)進行qRT-PCR 檢測,每個孔均設置3 個重復。本實驗中用U6 作為miR-625-5p的內(nèi)參,GAPDH作為其他基因的內(nèi)參,采用相對定量法(2-△△CT法)計算hsa_circ_0005692、miR-625-5p和CXXC4 的相對轉錄水平:△△Ct=△Ct實驗組-△Ct對照組,△Ct=Ct(目的基因)-Ct(內(nèi)參),目的基因的相對轉錄水平=2-△△Ct。每次實驗重復3 次。引物設計如表1 所示。

1.4 統(tǒng)計學方法

采用SPSS 21.0 版本(IBM 公司,USA)用于統(tǒng)計分析。計量數(shù)據(jù)采用平均數(shù)±標準誤差(ˉx±sˉx)表示,兩組間比較采用非配對t檢驗。多組間數(shù)據(jù)比較采用One-way ANOVA,Tukey’s 進行事后檢驗。以P<0.05 表示差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 胃癌細胞中hsa_circ_0005692 和CXXC4 呈低表達,而miR-625-5p 呈高表達

qRT-PCR 檢測人胃癌細胞系BGC-803、SNU-1、NCI-N87、HS-746T 和胃黏膜上皮細胞GES-1 中hsa_circ_0005692、miR-625-5p和CXXC4 mRNA 表達,Western blot 檢測CXXC4 蛋白表達,結果顯示(圖1):與胃黏膜上皮細胞GES-1 相比,人胃癌細胞系BGC-803、SNU-1、NCI-N87、HS-746T 中hsa_circ_0005692、CXXC4 mRNA 和蛋白表達均降低,而miR-625-5p的表達均增加(P<0.05),其中SNU-1中hsa_circ_0005692 表達最低,選為后續(xù)細胞學實驗驗證的細胞。

2.2 hsa_circ_0005692 吸附miR-625-5p 調(diào)控CXXC4

https://circinteractome.nia.nih.gov/index.html和http://starbase.sysu.edu.cn/index.php 分別預測hsa_circ_0005692 和miR-625-5p 及miR-625-5p和CXXC4 的結合位點(圖2A、2B),雙熒光素酶報告如圖2C、2D 顯示:與NC mimic 組比較,miR-625-5p mimic 組中hsa_circ_0005692 野生型和CXXC4野生型與miR-625-5p 特異結合區(qū)域的熒光素酶活性均受到抑制(P<0.05),而hsa_circ_0005692 突變型和CXXC4 突變型的熒光素酶活性無明顯的變化(P>0.05),說明miR-625-5p 可分別與hsa_circ_0005692 和CXXC4 結合。RNA-pull down 實驗如圖2E 所示,相比于MUT-miR-625-5p 和Bio-NC 組,WT-miR-625-5p 結合的hsa_circ_0005692 表達量明顯增加(P<0.05),表明miR-625-5p 可直接結合hsa_circ_0005692。RNA 免疫共沉淀(RIP)實驗結果顯示(圖2F):在SNU-1 細胞內(nèi),抗AGO2 的抗體可將hsa_circ_0005692 沉淀下來,表明hsa_circ_0005692 可與AGO2 形成復合物,從而競爭性結合miR-625-5p。上述結果表明,在胃癌中hsa_circ_0005692 可能通過吸附miR-625-5p 從而調(diào)控CXXC4 基因的表達。

2.3 過表達hsa_circ_0005692 或沉默miR-625-5p 抑制胃癌細胞增殖

在胃癌細胞SNU-1 中,對hsa_circ_0005692 進行過表達或者對miR-625-5p 進行沉默處理,或在過表達hsa_circ_0005692 的細胞中上過表達miR-625-5p 或者沉默CXXC4 基因,從而來研究hsa_circ_0005692 可能通過吸附miR-625-5p 調(diào)控CXXC4對胃癌細胞生物學活性的影響。MTT 檢測各組細胞增殖情況,結果表明(圖3):與pcDNA-NC 組相比,在48 h 和72 h 時pcDNA-hsa_circ_0005692 組胃癌細胞SNU-1 的增殖能力下降(P<0.05);與NC inhibitor 相比,在48 h 和72 h 時miR-625-5p inhibitor 組胃癌細胞SNU-1 的增殖能力顯著受到抑制(均P<0.05);與pcDNA-hsa_circ_0005692 組相比,在48 h 和72 h 時pcDNA-hsa_circ_0005692 +miR-625-5p mimic 組和pcDNA-hsa_circ_0005692 +si-CXXC4 組胃癌細胞SNU-1 增殖能力顯著增加(均P<0.05)。以上結果表明過表達hsa_circ_0005692 或沉默miR-625-5p 抑制胃癌細胞增殖,而miR-625-5p 的過表達或CXXC4 的沉默可逆轉hsa_circ_0005692 過表達對胃癌細胞增殖的抑制作用。

2.4 過表達hsa_circ_0005692 或沉默miR-625-5p 抑制胃癌細胞遷移侵襲能力

Transwell 實驗檢測各組細胞遷移和侵襲能力,結果表明(圖4):與pcDNA-NC 組相比,pcDNA-hsa_circ_0005692 組胃癌細胞SNU-1 的遷移和侵襲數(shù)目下降(P<0.05);與NC inhibitor 相比,miR-625-5p inhibitor 組胃癌細胞SNU-1 的遷移和侵襲數(shù)目減少(P<0.05);與pcDNA-hsa_circ_0005692 組相比,pcDNA-hsa_circ_0005692+miR-625-5p mimic組和pcDNA-hsa_circ_0005692+si-CXXC4 組胃癌細胞SNU-1 的遷移和侵襲數(shù)目明顯增加(P<0.05)。以上結果表明過表達hsa_circ_0005692 或沉默miR-625-5p 抑制胃癌細胞遷移和侵襲能力,而miR-625-5p 的過表達或CXXC4 的沉默可逆轉hsa_circ_0005692 過表達對胃癌細胞遷移和侵襲的抑制作用。

表1 引物序列Table 1 Primer sequence

2.5 過表達hsa_circ_0005692 或沉默miR-625-5p 促進胃癌凋亡

流式細胞術實驗檢測各組細胞凋亡情況,結果表明(圖5):與pcDNA-NC 組相比,pcDNA-hsa_circ_0005692 組胃癌細胞SNU-1 的凋亡率增加(均P<0.05);與NC inhibitor 相比,miR-625-5p inhibitor組胃癌細胞SNU-1 的凋亡率增加(均P<0.05);與pcDNA-hsa_circ_0005692 組相比,pcDNA-hsa_circ_0005692+miR-625-5p mimic 組和pcDNA-hsa_circ_0005692+si-CXXC4 組胃癌細胞SNU-1 的凋亡率顯著降低(均P<0.05)。以上結果表明過表達hsa_circ_0005692 或沉默miR-625-5p 促進胃癌細胞凋亡,而miR-625-5p 的過表達或CXXC4 的沉默可逆轉hsa_circ_0005692 過表達對胃癌細胞凋亡的促進作用。

2.6 hsa_circ_0005692 吸附miR-625-5p 調(diào)節(jié)CXXC4 的表達而抑制胃癌的轉移

圖1 hsa_circ_0005692、CXXC4 和miR-625-5p 在胃癌細胞中表達Note.A,hsa_circ_0005692 and miR-625-5p expression as well as the mRNA expression of CXXC4 in SNU-1,BGC-803,NCI-N87,HS-746T and GES-1 cells determined by qRT-PCR.B/C,Western blot detected the expression of CXXC4 protein in human gastric cancer cell lines SNU-1,BGC-803,NCI-N87,HS-746T and gastric mucosal epithelial cell GES-1.Compared with the GES-1 group,?P <0.05.Figure 1 Expression of hsa_circ_0005692,CXXC4 and miR-625-5p in gastric cancer cells

圖2 hsa_circ_0005692 吸附miR-625-5p 調(diào)控CXXC4 Note.A,Binding sites between hsa_circ_0005692 and miR-625-5p.B,Binding sites between CXXC4 and miR-625-5p.C,Binding relationship between hsa_circ_0005692 and miR-625-5p verified by dual-luciferase assays.D,Binding relationship between CXXC4 and miR-625-5p verified by dual-luciferase assays.Compared with NC mimic group,?P<0.05.E,Binding relationship between hsa_circ_0005692 and miR-625-5p validated by RNA pull-down.Compared with Bio-NC group,?P <0.05.F,hsa_circ_0005692 binding to AGO2 protein verified by RIP assays.Figure 2 hsa_circ_0005692 adsorbed miR-625-5p to regulate CXXC4

圖3 MTT 檢測細胞增殖情況Note.Compared with pcDNA-NC group,?P<0.05.Compared with NC inhibitor group,#P <0.05.Compared with pcDNA-hsa_circ_0005692 group,&P<0.05.Figure 3 Cell proliferation was detected by MTT

qRT-PCR 檢測hsa_circ_0005692、miR-625-5p和CXXC4 mRNA 的表達,Western blot 檢測CXXC4和遷移侵襲相關因子N-cadherin 和MMP9 蛋白表達,結果顯示(圖6A、6B):與pcDNA-NC 組相比,pcDNA-hsa_circ_0005692 組胃癌細胞中hsa_circ_0005692、CXXC4 mRNA 和蛋白表達顯著增加,miR-625-5p 表達及遷移侵襲相關因子N-cadherin 和MMP9 蛋白表達量均明顯降低(均P<0.05);與NC inhibitor 相比,miR-625-5p inhibitor 組胃癌細胞中hsa_circ_0005692 表達無顯著變化(P>0.05),miR-625-5p 表達顯著減少,CXXC4 mRNA 和蛋白表達顯著增加,N-cadherin 和MMP9 蛋白表達量均明顯降低(均P<0.05);與pcDNA-hsa_circ_0005692 組相比,pcDNA-hsa_circ_0005692+miR-625-5p mimic 組胃癌細胞中hsa_circ_0005692 表達無顯著變化(P>0.05),miR-625-5p 表達顯著增加,CXXC4 mRNA 和蛋白表達顯著減少,N-cadherin和MMP9 蛋白表達量均明顯增加(均P<0.05);與pcDNA-linc 00261 組相比,pcDNA-hsa_circ_0005692+si-CXXC4 組胃癌細胞hsa_circ_0005692 和miR-625-5p 變化無顯著差異(均P>0.05),CXXC4 mRNA 和蛋白表達顯著減少,N-cadherin 和MMP9蛋白表達量均明顯增加(P<0.05)。

以上結果表明hsa_circ_0005692 通過吸附miR-625-5p,從而負調(diào)控CXXC4 基因,進而抑制胃癌細胞的遷移和侵襲。

圖4 Transwell 實驗檢測細胞遷移和侵襲能力Note.A/B,Representative images and statistical analysis of SNU-1 cell migration.C/D,Representative images and statistical analysis of SNU-1 cell invasion.Compared with pcDNA-NC group,?P <0.05.Compared with NC inhibitor group,#P <0.05.Compared with pcDNA-hsa_circ_0005692 group,&P<0.05.Figure 4 The ability of migration and invasion detected by Transwell

圖5 流式細胞術檢測細胞凋亡率Note.Compared with pcDNA-NC group,?P <0.05.Compared with NC inhibitor group,#P <0.05.Compared with pcDNA-hsa_circ_0005692 group,&P<0.05.Figure 5 The apoptosis rate was detected by flow cytometry

3 討論

胃癌是常見的惡性腫瘤,具有致死率高、復發(fā)率高和遠處轉移率高等特點[19]。闡明胃癌的發(fā)病機制對治療胃癌具有非常關鍵的作用。越來越多的研究表明,哺乳動物中豐富的circRNA 與神經(jīng)系統(tǒng)疾病、心血管疾病、骨科疾病和各種癌癥關系密切[20-21]。和線性RNA 不同的是,circRNA 形成了一個不含5’-3’極性或聚腺苷酸末端的閉環(huán)連續(xù)環(huán)結構。circRNA 在人體細胞中存在廣泛表達,對基因轉錄后水平表達的調(diào)控具有重要作用[22-24]。僅有一篇文獻表示hsa_circ_0005692 可促進胃癌增殖、遷移和侵襲[13]。而目前尚無研究報道hsa_circ_0005692 在胃癌中的調(diào)控機制。在本研究中,我們首先通過培養(yǎng)胃黏膜上皮細胞GES-1 和人胃癌細胞系BGC-803、SNU-1、NCI-N87、HS-746T,檢測hsa_circ_0005692 在正常胃黏膜上皮細胞和胃癌細胞系中的表達情況,結果顯示hsa_circ_0005692 在胃癌細胞中表達下調(diào)。且hsa_circ_0005692 可抑制胃癌細胞增殖、遷移和侵襲,并促進細胞凋亡。這與陳鑫等[13]研究結果一致。

circRNA 在癌癥中發(fā)揮關鍵的調(diào)控作用,大多數(shù)研究表明circRNA 具有組織和發(fā)育階段的特異性表達,且充當microRNA 的sponge RNA 來隔離microRNA,從而影響影響靶mRNA 的穩(wěn)定性并動態(tài)調(diào)節(jié)mRNA 的翻譯[25-26]。為此,我們通過Circular RNA Interactome 篩選發(fā)現(xiàn)hsa_circ_0005692 與miR-625-5p 之間存在結合位點。miR-625-5p 在癌癥中的調(diào)控作用并無明確定論,有研究表明,miR-625-5p 在腫瘤中發(fā)揮抑癌作用,抑制癌癥增殖、遷移和侵襲。但另外也有研究表明miR-625-5p 發(fā)揮促癌作用[27-28]。在本研究中,我們發(fā)現(xiàn)hsa_circ_0005692可作為sponge RNA,競爭性結合miR-625-5p。而miR-625-5p 沉默后會抑制胃癌細胞增殖、遷移和侵襲能力,并促進細胞凋亡。且我們研究證實miR-625-5p 過表達可阻斷hsa_circ_0005692 對胃癌細胞增殖、遷移和侵襲的抑制作用。這表明miR-625-5p 有可能作為促癌因子,在胃癌中發(fā)揮促癌作用。

為進一步探究miR-625-5p 在胃癌中的調(diào)控機制,我們通過生信網(wǎng)站篩選miR-625-5p 下游的可能靶基因。我們發(fā)現(xiàn)CXXC4 和miR-625-5p 之間存在結合位點,雙熒光素酶報告實驗也證實miR-625-5p 和CXXC4 之間具有靶向調(diào)控關系。CXXC4是CXXC 指蛋白,研究表明CXXC4 可能是一個新的胃癌抑制因子[29]。CXXC4 在上皮性卵巢癌、口腔鱗狀細胞癌等多種惡性腫瘤中均表達下調(diào)[30-31]。我們研究也表明CXXC4 沉默后會阻斷hsa_circ_0005692 對胃癌細胞增殖、遷移和侵襲的抑制作用。

綜上所述,我們發(fā)現(xiàn)hsa_circ_0005692 在胃癌細胞中表達下調(diào),并且可通過吸附miR-625-5p,從而上調(diào)miR-625-5p 靶基因CXXC4 的表達,進而抑制胃癌細胞增殖、遷移和侵襲,并促進其凋亡。本研究我們探究hsa_circ_000569 在胃癌中的調(diào)控機制,進一步完善胃癌的發(fā)病機制,為探究胃癌中的發(fā)病機制提供了新的研究方向,為臨床治療提供了新的理論指導。但我們目前暫未進行動物實驗,無法進一步證實hsa_circ_0005692 在體內(nèi)的調(diào)控機制。且是否適用于臨床治療,仍需更多實驗探究。

圖6 hsa_circ_0005692 吸附miR-625-5p 調(diào)節(jié)CXXC4 的表達而抑制胃癌的轉移Note.A,hsa_circ_0005692 and miR-625-5p expression as well as the mRNA expression of CXXC4 in cells after transfection determined by qRTPCR.B,The protein expression of CXXC4 in cells after transfection determined by Western blot.Compared with pcDNA-NC group,?P <0.05.Compared with NC inhibitor group,#P <0.05.Compared with pcDNA-hsa_circ_0005692 group,&P<0.05.Figure 6 hsa_circ_0005692 adsorbed miR-625-5p to regulate the expression of CXXC4 and inhibit the metastasis of gastric cancer