高秀娟 張雅麗 莊新榮 張桂香

承德醫(yī)學院附屬醫(yī)院(067000)

子宮內膜異位癥發(fā)病率為10%～20%[1]，相關性卵巢癌(EAOC)[2]是子宮內膜異位癥較常見的惡性病變，早期發(fā)現(xiàn)子宮內膜異位惡化，對降低病死率、提升疾病診斷效率并提早干預具有重要意義[3]。AT豐富結合域1A基因(ARID1A)[4]是染色質重塑復合物SWI/WNF家族的重要一員，可以通過改變染色質的結構來調控靶基因的表達，在多種腫瘤中表達降低。調查顯示[5]，10%的子宮內膜異位癥患者存在ARID1A突變。磷脂酰肌醇-3-激酶催化亞單位α基因(PIK3CA基因)[6]是較常見的腫瘤基因，廣泛參與腫瘤細胞的凋亡、細胞周期等。本研究通過分析ARID1A、PIK3CA表達與子宮內膜異位癥相關卵巢癌的關系及危險因素，為臨床診斷提供科學依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

以本院2016年1月—2020年5月收治的85例子宮內膜異位癥患者作為研究對象，另選非子宮內膜異位癥相關性卵巢癌患者80例作為對照。入選標準：①符合卵巢癌診斷標準[7]，即內異癥和癌組織在同一病變中；病灶部位腫瘤來自于異位內膜組織，排除其他惡性腫瘤轉移；存在類似子宮內膜周圍腺體上皮組織特征；鏡檢發(fā)現(xiàn)存在向惡性過渡的組織學證據(jù)；②本院手術治療，術后病理由本院確診為卵巢透明細胞癌或卵巢子宮內膜樣腺癌；③臨床資料完整，簽署知情同意書。排除標準：①病理證實為其他部位惡性腫瘤轉移；②術前接受放療、化療或免疫治療；③臨床病例資料不全；④存在嚴重心、肝等器質性病變及嚴重心腦血管疾病、傳染性疾病。本研究經倫理委員會通過。

1.2 檢測方法

所有研究對象入組后取外周靜脈血，抗凝取血漿，通過QIAAMP DNA Blood Mini Kit純化血漿DNA，-20℃保存待測。根據(jù)Genebank發(fā)布的人ARID1A、PIK3CA基因序列采用Primer 5.0軟件分別對相關位點設計引物。ARID1A上游引物設定為5'-TACATCTGGCTACTGGGTGTCGTATC-3'，下游引物設定為：5'-TCGCAGGGTCCGAGGTATTC-3'，PIK3CA基因上游引物采用正向5’-ATACCGCTCGAGCCTCCTGCATCCTTTCTT-3’下游采用反向5’-ATACCGCTCGAGCCTGTGTGCCTTTTTCCTTCC-3’進行擴增。PCR反應體系為25 μl，其中含10xbuffer 2.5μl、dNTPS 1μl、Taq DNA聚合酶0.4 μl、DNA模板1μl、引物1μl、ddH20補足。擴増方法：95℃條件下預變性5min，94℃變性30s，50～60℃退火30s，72℃延伸10min，一共35個循環(huán)。以U6作為內參基因，使用2-△△CT計算相對表達量。檢測試劑由上海吉馬制藥技術有限公司生產。

1.3 觀察指標

比較3組ARID1A、PIK3CA表達，采用ROC曲線分析ARID1A、PIK3CA水平對子宮內膜異位癥相關卵巢癌的診斷效率；比較EAOC組與OEM組年齡、初潮年齡、絕經狀態(tài)、孕次、產次、臨床表現(xiàn)(腹部不適、陰道出血、盆腔疼痛)、卵泡刺激素差異，分析子宮內膜異位癥相關卵巢癌發(fā)病危險因素。

1.4 統(tǒng)計學方法

2 結果

2.1 一般資料比較

85例子宮內膜異位癥患者中，子宮內膜異位癥相關性卵巢癌(EAOC組)45例，年齡(35.7±7.4)歲，體質指數(shù)(BMI)(24.0±1.4)kg/m2；卵巢-子宮內膜異位癥(OEM組)40例，年齡(35.9±7.4)歲，BMI(23.9±1.4)kg/m2。根據(jù)美國生殖協(xié)會標準，EAOC組Ⅰ-Ⅱ期22例、Ⅲ-Ⅳ期23例，OEM組Ⅰ-Ⅱ期19例、Ⅲ-Ⅳ期21例。對照80例(non-EAOC組)，年齡(35.7±7.4)歲，BMI(2.1±1.9)kg/m2；Ⅰ-Ⅱ期41例，Ⅲ-Ⅳ期39例；漿液性腫瘤44例，粘液性腫瘤36例。3組患者年齡、BMI無差異(F=13.654，P<0.05)。

2.2 各組ARID1A、PIK3CA表達水平比較

通過兩兩比較，ARID1A、PIK3CA表達水平從高到低依次為EAOC組、non-EAOC組、OEM組(P<0.05)(表1)。

表1 各組ARID1A、PIK3CA相對表達量比較

2.3 ARID1A、PIK3CA對子宮內膜異位癥相關卵巢癌的診斷效能

診斷效能分析，ARID1A聯(lián)合PIK3CA診斷子宮內膜異位癥相關卵巢癌靈敏度高于單獨檢測。通過ROC曲線分析，ARID1A、PIK3CA診斷臨界值分別為44.56及40.06(表2)。

表2 各指標診斷子宮內膜異位癥相關卵巢癌效能分析

2.4 子宮內膜異位癥相關卵巢癌發(fā)病單因素分析

EAOC組年齡、絕經率、卵泡刺激素、腹部不適、陰道出血、盆腔疼痛等發(fā)生率高于OEM組，初潮年齡小于OEM組(均P<0.05)。見表3。

表3 兩組患者一般臨床資料比較

2.5 子宮內膜異位癥相關卵巢癌發(fā)病多因素分析

多因素分析，患者年齡大、絕經、FSH高、盆腔疼痛、腹部不適、陰道出血及初潮年齡小均為子宮內膜異位癥相關卵巢癌發(fā)病的獨立危險因素(表4)。

表4 子宮內膜異位癥相關卵巢癌發(fā)病多因素分析

3 討論

多項研究已經證實，子宮內膜異位癥與卵巢癌的發(fā)病密切相關[8-9]。異位于卵巢的子宮內膜表現(xiàn)一種惡性腫瘤標志的單克隆細胞增殖方式，同時在異位增生病變的多年刺激下，子宮內膜異位癥相關卵巢癌發(fā)病風險顯著升高。目前研究發(fā)現(xiàn)EAOC的發(fā)生涉及多個因素，包括基因突變、激素、氧化應激和炎癥免疫等多個方面，但具體發(fā)病機制仍不清楚[10]。關注EMs導致EAOC的分子機制，盡早從EMs患者中發(fā)現(xiàn)惡變傾向，可為EAOC的預防和早期診斷提供新依據(jù)。

本研究ARID1A、PIK3CA表達水平，從高到低依次為EAOC組、non-EAOC組以及OEM組。有研究[11]認為，10%的子宮內膜異位癥患者存在ARID1A突變，且在EAOC中突變率>30%，但在高級別漿液性卵巢癌和黏液性癌中卻沒有發(fā)現(xiàn)ARID1A基因突變。ARID1A基因在機體正常細胞的DNA轉錄、復制以及修復甲基化過程中發(fā)揮重要作用，該基因的突變在一定程度上會造成腫瘤細胞增生，進而引發(fā)疾病惡化。解剖學研究中[12]，在局部病灶部位的腫瘤、過渡帶以及與之相連的典型子宮內膜異位癥病灶部位，均會發(fā)現(xiàn)ARID1A基因的顯著性突變，而在病灶部位遠端ARID1A基因突變不明顯。殷子然等[13]通過對卵巢子宮內膜癌細胞分析，ARID1A基因突變情況顯著，與本研究相互印證。PIK3CA基因的改變已在多種腫瘤組織的疾病進展中得到驗證，其可通過PI3K/AKT信號轉導通路的有效調節(jié)，進而發(fā)揮腫瘤細胞的增殖、凋亡、細胞活動以及黏附作用[14]；同時，PIK3CA水平還與細胞的支架結構以及細胞間物質運輸密切聯(lián)系。韋枝紅等[15]分析認為，PIK3CA水平對子宮內膜異位癥相關卵巢癌發(fā)病有顯著促進性作用。

本文對子宮內膜異位癥相關卵巢癌的發(fā)病行多因素分析，患者年齡大、絕經、FSH水平高、盆腔疼痛、腹部不適、陰道出血以及初潮年齡小均為造成患者子宮內膜異位癥相關卵巢癌發(fā)病的獨立危險因素。分析認為，隨著患者年齡增大，子宮內膜萎縮程度升高，局部免疫能力下降，對腫瘤細胞的自我清除能力顯著下降。而初潮年齡較小在一定程度上會加劇子宮內膜的炎性反應以及氧化應激反應，進一步促進局部病灶部位的惡變。而作為卵巢子宮內膜異位癥的疾病發(fā)作，其較高的雌激素水平是最重要發(fā)病原因，一定程度反映了患者的子宮內膜負荷。在疾病進展過程中，局部子宮內膜碎片隨著血液循環(huán)進入輸卵管，進而造成患者的臨床癥狀，進一步加劇惡變風險。

本研究ROC曲線分析，子宮內膜異位癥相關卵巢癌的ARID1A、PIK3CA診斷臨界值分別為44.56及40.06，可為臨床預測子宮內膜惡變提供一定參考。

綜上所述，子宮內膜異位癥相關卵巢癌患者ARID1A、PIK3CA表達水平升高；在對患者診療中，針對年齡較大、絕經、FSH水平較高、盆腔疼痛、腹部不適、陰道出血以及初潮年齡較小的患者，應予以關注并盡早干預，提升疾病的早期確診率。