范 妮 張海波 王康揚(yáng) 符 雄

1.海南省文昌市人民醫(yī)院(571300)；2.海南醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院

因男方因素致女方不孕中免疫性不孕占10%～20%[1]。由抗精子抗體(AsAb)導(dǎo)致的生殖障礙最常見。AsAb陽(yáng)性已被確認(rèn)為免疫性不育的診斷指標(biāo)之一。研究指出[2]，AsAb在正常生育能力的男女血清中無(wú)法檢測(cè)到，但在感染、手術(shù)以及外傷等情況下，精子可能觸發(fā)自身免疫而產(chǎn)生AsAb。目前臨床關(guān)于AsAb陽(yáng)性對(duì)男性精子的影響說(shuō)法不一。國(guó)外有研究發(fā)現(xiàn)[3]，AsAb陽(yáng)性不育者精子形態(tài)、活力與AsAb陰性不育者并無(wú)明顯差異；但國(guó)內(nèi)報(bào)道指出[4]，AsAb陽(yáng)性不育者精子活率、活力等均明顯低于AsAb陰性不育者。故本研究通過(guò)觀察男性不育患者不同AsAb情況下精子密度、精子活率、精子形態(tài)等，分析其相關(guān)性及人工授精助孕結(jié)局，為臨床診療提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2017年10月—2020年7月本院接診的男性不育患者152例，診斷參照《男性不育診療指南》[5]。納入標(biāo)準(zhǔn)：①確診男性不育；②年齡22～38歲；③患者配偶正常排卵、無(wú)輸卵管、內(nèi)分泌等影響生育疾病。排除標(biāo)準(zhǔn)：①既往存在睪丸外傷、活檢或手術(shù)史；② 輸精管阻塞；③生殖道感染；④輸精管吻合手術(shù)史；⑤合并嚴(yán)重肝腎功能異常、免疫系統(tǒng)、血液系統(tǒng)疾病或惡性腫瘤?；颊呔炇鹬橥鈺?。本研究經(jīng)本院倫理委員會(huì)審批。

1.2 精液AsAb檢測(cè)

所有患者禁欲2～7 d后手淫法收集精液，采用混合抗球蛋白凝集法檢測(cè)AsAb；常規(guī)處理后采用奧林巴斯CX23光學(xué)顯微鏡(40×10)下鏡檢，計(jì)數(shù)100個(gè)活動(dòng)精子，計(jì)數(shù)附著綿羊紅細(xì)胞的精子數(shù)目(%)，精子數(shù)目≤10%為陰性，10%～50%為弱陽(yáng)性，≥50%陽(yáng)性。本研究以弱陽(yáng)性及陽(yáng)性均判定為陽(yáng)性。試劑盒購(gòu)買于安徽安科生物科技有限公司。

1.3 評(píng)價(jià)指標(biāo)

①抗體結(jié)合部位分類：對(duì)AsAb陽(yáng)性標(biāo)本按抗體結(jié)合部位如精子頭、體、尾等分類并記錄，陽(yáng)性黏附率=陽(yáng)性黏附例數(shù)/總例數(shù)×100%。②精液常規(guī)參數(shù)：由同一名檢驗(yàn)技術(shù)人員按照《人類精液檢查與處理實(shí)驗(yàn)室手冊(cè)》檢測(cè)精子密度、精子總活率、前向活動(dòng)率、正常形態(tài)率等參數(shù)，檢驗(yàn)結(jié)果參照WHO第5版分析標(biāo)準(zhǔn)，正常參考范圍：精子密度≥15×106/ml，總活率≥40%，前向活動(dòng)率≥32%，正常形態(tài)率≥4%。比較兩組精子密度、精子總活率、前向活動(dòng)率、正常形態(tài)率等參數(shù)。隨訪人工受精助孕結(jié)局。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 分組及一般情況

根據(jù)AsAb檢測(cè)結(jié)果分為陽(yáng)性組57例、陰性組95例。陽(yáng)性組年齡(30.3±4.2)歲(25～36歲)，不育癥(6.1±2.8)年(1～10年)；陰性組年齡(30.4±4.1)歲(24～37歲)，不育癥(6.3±2.9)年(1～11年)。兩組年齡、不育癥年限無(wú)差異(P>0.05)。

2.2 抗體結(jié)合部位分類

AsAb陽(yáng)性組中，陽(yáng)性粘附8例，黏附率14.0%。其中尾部黏附運(yùn)動(dòng)精子5例，黏附率8.8%；頭部黏附運(yùn)動(dòng)精子2例，黏附率為3.5%；頸部黏附運(yùn)動(dòng)精子1例，黏附率為2.0%。

2.3 精液常規(guī)參數(shù)比較

AsAb陽(yáng)性組精子密度、精子總活率、前向活動(dòng)率、正常形態(tài)率均低于AsAb陰性組(P<0.05)。見表1。

表1 兩組精液常規(guī)參數(shù)比較

2.4 人工授精助孕結(jié)局

AsAb陰性組人工授精助孕妊娠率(15例，15.8%)與陽(yáng)性組(6例，10.5%)，流產(chǎn)率(2例，2.1%)與陽(yáng)性組(2例，3.5%)未見差異(χ2=0.823、0.593，P=0.364、0.441)。

2.5 AsAb與精液常規(guī)參數(shù)的相關(guān)性

AsAb與精子密度、精子總活率、前向活動(dòng)率、正常形態(tài)率均呈負(fù)相關(guān)(r=-0.520、-0.396、-0.702、-0.411，均P<0.001)。

3 討論

精子是一種男性機(jī)體隱匿性抗原，正常男性機(jī)體不會(huì)產(chǎn)生AsAb[6]。精液常規(guī)參數(shù)檢查是評(píng)估男性生育能力的重要方法，也是診斷男性不育的主要實(shí)驗(yàn)室參考指標(biāo)[7]。AsAb是免疫性不育的病因之一已被臨床認(rèn)可，但其與精液常規(guī)參數(shù)的關(guān)系尚存在爭(zhēng)議。

受精形成受精卵過(guò)程中只有活動(dòng)能力強(qiáng)的精子才可穿透宮頸到達(dá)子宮[8]。精子前向活動(dòng)率是評(píng)價(jià)男性生育能力的重要指標(biāo)之一。相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道[9]，AsAb會(huì)阻礙精子穿過(guò)宮頸粘液，干擾精子獲能，導(dǎo)致精子發(fā)生制動(dòng)、凝集，并引起精液液化不良，總活率和前向活動(dòng)率均下降。本研究結(jié)果顯示，男性不育AsAb陽(yáng)性組精子總活率、前向活動(dòng)率均低于陰性組?？梢夾sAb影響了精子的活力和活動(dòng)率，進(jìn)而影響男性生育能力，且相關(guān)分析顯示AsAb與精子總活率及前向活動(dòng)率均呈負(fù)相關(guān)。據(jù)報(bào)道[10]，AsAb在睪丸的基底膜沉積會(huì)顯著影響生精微環(huán)境，導(dǎo)致精子數(shù)量降低，且更易出現(xiàn)形態(tài)異常的畸形精子。另外AsAb還可通過(guò)抑制頂體酶水平進(jìn)而降低頂體酶活性，影響精子受精功能。本研究結(jié)果顯示，男性不育AsAb陽(yáng)性組精子密度及精子正常形態(tài)率均低于陰性組，相關(guān)性分析AsAb與精子密度、精子正常形態(tài)率均呈負(fù)相關(guān)。因此，AsAb抗體陽(yáng)性影響精子密度、總活率、前向活動(dòng)率并降低精子正常形態(tài)率，導(dǎo)致精子質(zhì)量低下，降低精子受精能力，進(jìn)而影響精子穿透各種屏障與卵子結(jié)合的能力，導(dǎo)致不孕[11]。

本研究分析比較兩組人工授精助孕結(jié)局顯示，AsAb陽(yáng)性組妊娠率與陰性組未見差異。有研究認(rèn)為[12]，AsAb具有細(xì)胞毒作用，可影響精卵融合，干擾受精卵發(fā)育，甚至還可影響胚胎發(fā)育。但兩組流產(chǎn)率比較無(wú)明顯差異。可能與本研究納入樣本量少有關(guān)，后續(xù)將增加樣本量進(jìn)一步研究。

研究指出[13]，AsAb和精子結(jié)合部位不同，則對(duì)精子產(chǎn)生的影響有所不同，對(duì)男性生育能力的影響也不一樣。精子頭部屬于精子最重要部分，由頂體、質(zhì)膜、核物質(zhì)以及核膜等構(gòu)成，其中結(jié)合卵子結(jié)合帶的精子膜受體以及頂體酶在精卵結(jié)合中有重要作用。與精子頭部結(jié)合的AsAb既能通過(guò)影響核DNA調(diào)控精子凋亡，也可影響頂體酶活性進(jìn)而干擾精子和卵子結(jié)合，阻礙胚胎發(fā)育。精子尾部屬于運(yùn)動(dòng)器官，AsAb結(jié)合后會(huì)降低精子穿透宮頸粘液的能力，進(jìn)而影響精子與卵子結(jié)合[14]。另外，若AsAb與精子頸中段結(jié)合，則可影響該段線粒體DNA，誘使精子凋亡。本研究顯示，AsAb陽(yáng)性組57例中，陽(yáng)性粘附率14.0%，其中以尾部黏附運(yùn)動(dòng)精子較多，其次為頭部粘附運(yùn)動(dòng)精子。

綜上所述，AsAb陽(yáng)性對(duì)精子密度、精子總活率、前向活動(dòng)率、精子形態(tài)以及人工受精助孕結(jié)局有明顯影響，是導(dǎo)致男性不育的重要因素之一。