魏笑蓮，錢智玲，陳巧巧，于洪巍

（1 浙江新和成股份有限公司，浙江 新昌 312500；2 浙江大學(xué)化學(xué)工程與生物工程學(xué)院生物工程研究所，浙江 杭州 310027）

遺傳改造技術(shù)在食物供給中正被日益廣泛地使用。遺傳改造技術(shù)在帶來便利和巨大利益的同時，也給人類社會帶來了種種風(fēng)險和挑戰(zhàn)。遺傳改造的生物可能會對人類和動物產(chǎn)生潛在的毒性、過敏性或其他有害影響，也可能產(chǎn)生“基因漂移”和“基因污染”現(xiàn)象，對生態(tài)環(huán)境造成影響［1］。因此，許多國家都建立了相應(yīng)的法律法規(guī)來監(jiān)管遺傳改造生物及其產(chǎn)品。不同國家歷史文化背景、技術(shù)水平和公眾對遺傳改造食品的認(rèn)知程度不同，對遺傳改造食品的監(jiān)管也存在著截然不同的做法。

本文主要討論對象為遺傳改造微生物（genetically modified microorganisms，GMMs）發(fā)酵生產(chǎn)的食品、飼料監(jiān)管要求。對于遺傳改造微生物發(fā)酵生產(chǎn)的食品、飼料產(chǎn)品，若最終產(chǎn)品中能檢測出來自于遺傳改造微生物的組分［通常指GMMs 及重組DNA（rDNA）］，則在歐盟、美國被歸屬為轉(zhuǎn)基因食品（genetically modified food，GMF），需要符合轉(zhuǎn)基因食品相關(guān)法律法規(guī)的監(jiān)管要求。本文首先介紹歐盟、美國和中國對轉(zhuǎn)基因食品的定義和監(jiān)管要求，再以監(jiān)管最為嚴(yán)格的歐盟為例，深入剖析遺傳改造微生物發(fā)酵生產(chǎn)的食品、飼料在歐盟的監(jiān)管、授權(quán)要求。

1 轉(zhuǎn)基因食品定義

不同國家對轉(zhuǎn)基因食品的理解和定義不同。

關(guān)于歐盟，根據(jù)歐盟第1829/2003 號關(guān)于轉(zhuǎn)基因食品和飼料的法規(guī)，包含轉(zhuǎn)基因生物、由轉(zhuǎn)基因生物構(gòu)成或由轉(zhuǎn)基因生物加工而成的食品和飼料稱為轉(zhuǎn)基因食品和飼料。值得注意的是，該法規(guī)指出由轉(zhuǎn)基因生物加工而成（food and feed produced ‘from’ a GMO）與由轉(zhuǎn)基因生物發(fā)酵生產(chǎn)（food and feed produced‘with’a GMO）的區(qū)別。認(rèn)定標(biāo)準(zhǔn)是食品或飼料中是否存在轉(zhuǎn)基因生物的組分（如轉(zhuǎn)基因微生物的菌體及rDNA）或加工而成的成分（如轉(zhuǎn)基因玉米加工而成的玉米制品）。例如，如果產(chǎn)品由轉(zhuǎn)基因微生物發(fā)酵生產(chǎn)，且產(chǎn)品中沒有檢測到轉(zhuǎn)基因微生物以及rDNA，則產(chǎn)品不符合歐盟關(guān)于轉(zhuǎn)基因食品和飼料的定義，不受歐盟1829/2003 號法規(guī)的監(jiān)管，也不需要滿足轉(zhuǎn)基因食品飼料相關(guān)的標(biāo)識要求。反之，若產(chǎn)品中檢測出了轉(zhuǎn)基因微生物及rDNA，則產(chǎn)品符合歐盟關(guān)于轉(zhuǎn)基因食品和飼料的定義，需要符合歐盟1829/2003 號法規(guī)的監(jiān)管要求。同時，該法規(guī)考慮到一些生產(chǎn)者并不使用轉(zhuǎn)基因食品和飼料，但由于在種子生產(chǎn)、栽培、收獲、運(yùn)輸或加工過程中的偶然或技術(shù)上不可避免地存在轉(zhuǎn)基因物質(zhì)，這種轉(zhuǎn)基因物質(zhì)可能在非轉(zhuǎn)基因的傳統(tǒng)食品和飼料中以微量存在。因此，該法規(guī)也規(guī)定如果是偶然或者技術(shù)上不可避免的原因，轉(zhuǎn)基因組分或加工而成的成分含量在單獨(dú)的食品成分或由單個成分構(gòu)成的食品中不超過0.9%的閾值，則不需要符合歐盟1829/2003號法規(guī)的監(jiān)管要求。

在美國，為了讓消費(fèi)者更容易接受轉(zhuǎn)基因食品，將轉(zhuǎn)基因食品稱作生物工程食品（bioengineered foods）。美國2018年12月20日宣布了《國家生物工程食品信息披露標(biāo)準(zhǔn)》（National Bioengineered Food Disclosure Standard）。該標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了生物工程食品的標(biāo)簽要求，并將生物工程食品定義為含有可檢測的遺傳改造物質(zhì)的食品，且這些遺傳改造物質(zhì)通過某些實(shí)驗(yàn)室技術(shù)進(jìn)行了修飾，不能通過常規(guī)育種得到或在自然界中發(fā)現(xiàn)。該標(biāo)準(zhǔn)要求，到2022年，食品制造商、進(jìn)口商和某些零售商必須要為生物工程食品或含有生物工程成分的食品貼上標(biāo)簽。值得注意的是，美國法規(guī)將膳食補(bǔ)充劑包括在該標(biāo)準(zhǔn)涵蓋的食品范圍。但是如果食品是經(jīng)過高度精制，并且不含可檢測的遺傳改造物質(zhì)，則不屬于生物工程食品。與歐盟類似，美國法規(guī)規(guī)定如果傳統(tǒng)非生物工程食品中，無意或技術(shù)上不可避免地混入了遺傳改造物質(zhì)，只要遺傳改造物質(zhì)的含量不超過5%，則可以豁免于該法規(guī)監(jiān)管，但5%的范圍相比歐盟的0.9%要寬泛許多。例如，如果食品制造商采購非生物工程玉米，而該非生物工程玉米的生物工程物質(zhì)的含量在5%內(nèi)，則為無意或技術(shù)上無法避免的，則無需披露。但是，如果食品制造商打算使用由生物工程食品（例如玉米）生產(chǎn)高度精制的成分，但該成分精制后仍可檢測到遺傳改造物質(zhì)，無論該成分的含量如何，仍需要披露該成分。

在中國，現(xiàn)行有效的法律法規(guī)并未明確定義轉(zhuǎn)基因食品及其范圍。我們僅能通過已經(jīng)被廢止的幾個規(guī)定找到一些線索。根據(jù)2002 年原衛(wèi)生部發(fā)布的《轉(zhuǎn)基因食品衛(wèi)生管理辦法》，“轉(zhuǎn)基因食品系指利用基因工程技術(shù)改變基因組構(gòu)成的動物、植物和微生物生產(chǎn)的食品和食品添加劑，包括轉(zhuǎn)基因動植物、微生物產(chǎn)品；轉(zhuǎn)基因動植物、微生物直接加工品；以轉(zhuǎn)基因動植物、微生物或者其直接加工品為原料生產(chǎn)的食品和食品添加劑。然而在《轉(zhuǎn)基因食品衛(wèi)生管理辦法》被廢止后，更新的法規(guī)均未對轉(zhuǎn)基因食品重新進(jìn)行定義。目前我國轉(zhuǎn)基因食品立法和制度化建設(shè)滯后于歐美等國家和地區(qū)，對轉(zhuǎn)基因食品的定義、管理缺乏明確的制度化規(guī)定。

綜上，我們可以概括地將轉(zhuǎn)基因食品理解為包含可檢測到遺傳改造物質(zhì)的食品。

2 各國家和地區(qū)對轉(zhuǎn)基因食品的監(jiān)管力度

因各國的歷史文化背景、技術(shù)水平和公眾對轉(zhuǎn)基因食品的認(rèn)知程度不同，各國采取的監(jiān)管模式也有所不同。主要分為歐盟的嚴(yán)格監(jiān)管模式和美國的寬松監(jiān)管模式，其他的國家基本介于兩者之間。

歐盟基于“謹(jǐn)慎預(yù)防原則”，采取嚴(yán)格的監(jiān)管模式。歐盟制定了一系列完善的法律法規(guī)和配套指南來對轉(zhuǎn)基因食品進(jìn)行嚴(yán)格監(jiān)管。只要涉及到轉(zhuǎn)基因，無論產(chǎn)品之前在其他國家是否被批準(zhǔn)上市，無論產(chǎn)品中是否能檢測到轉(zhuǎn)基因成分，在產(chǎn)品上市之前都需要經(jīng)過歐洲食品安全局的評估和審核。只有得到歐洲食品安全局和歐盟委員會的批準(zhǔn)后才允許上市。這種基于“謹(jǐn)慎預(yù)防原則”的管理模式，將轉(zhuǎn)基因食品可能帶來的危害降低，考慮到科學(xué)的局限性和不確定性，認(rèn)識到轉(zhuǎn)基因食品對于人類健康、生態(tài)環(huán)境的威脅，而受到不少學(xué)者的推崇［2-3］。

美國基于“實(shí)質(zhì)等同”原則，認(rèn)為傳統(tǒng)食品與轉(zhuǎn)基因食品不存在本質(zhì)區(qū)別，對轉(zhuǎn)基因食品采取寬松的監(jiān)管模式。美國食品藥物監(jiān)督管理局（FDA）、美國環(huán)境保護(hù)署（EPA）和美國農(nóng)業(yè)部（USDA）共同負(fù)責(zé)轉(zhuǎn)基因食品的監(jiān)管。美國食品藥物監(jiān)督管理局（FDA）監(jiān)管大多數(shù)人類和動物食品，包括轉(zhuǎn)基因食品，確保轉(zhuǎn)基因食品或含有轉(zhuǎn)基因成分的食品符合與所有其他食品相同的嚴(yán)格安全標(biāo)準(zhǔn)。也就說美國FDA 沒有制定專門的法規(guī)來監(jiān)管轉(zhuǎn)基因食品，而是將轉(zhuǎn)基因食品納入現(xiàn)有的法律框架，轉(zhuǎn)基因食品和普通食品一樣遵循相同的安全標(biāo)準(zhǔn)要求。隨著《國家生物工程食品信息披露標(biāo)準(zhǔn)》（National Bioengineered Food Disclosure Standard）的頒布，美國對轉(zhuǎn)基因食品的標(biāo)識監(jiān)管在逐步加強(qiáng)。然而FDA 目前的政策中仍然強(qiáng)調(diào)轉(zhuǎn)基因食品的加工方法并不是監(jiān)管重點(diǎn)，只要特性和化學(xué)組成與傳統(tǒng)食品一致，就不需要對轉(zhuǎn)基因食品進(jìn)行入市前的審查。

我國轉(zhuǎn)基因相關(guān)的法律法規(guī)所規(guī)范對象主要是農(nóng)業(yè)轉(zhuǎn)基因生物。根據(jù)《農(nóng)業(yè)轉(zhuǎn)基因生物安全管理?xiàng)l例》，農(nóng)業(yè)轉(zhuǎn)基因生物是指“利用基因工程技術(shù)改變基因組構(gòu)成，用于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)或者農(nóng)產(chǎn)品加工的動植物、微生物及其產(chǎn)品，主要包括：①轉(zhuǎn)基因動植物（含種子、種畜禽、水產(chǎn)苗種）和微生物；②轉(zhuǎn)基因動植物、微生物產(chǎn)品；③轉(zhuǎn)基因農(nóng)產(chǎn)品的直接加工品；④含有轉(zhuǎn)基因動植物、微生物或者其產(chǎn)品成分的種子、種畜禽、水產(chǎn)苗種、農(nóng)藥、獸藥、肥料和添加劑等產(chǎn)品?！睆纳鲜龆x可以看出，農(nóng)業(yè)轉(zhuǎn)基因生物實(shí)際上是一個非常寬泛的概念，所涵蓋的產(chǎn)品范圍較為寬泛，且似乎沒有將作為深加工產(chǎn)品“食品”大類（不含上述定義中明確列入的農(nóng)產(chǎn)品和直接加工品）明確納入農(nóng)業(yè)轉(zhuǎn)基因生物。從上述定義中，農(nóng)業(yè)轉(zhuǎn)基因生物，首先需要利用基因工程技術(shù)改變基因構(gòu)成，其目的是用于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)或者農(nóng)產(chǎn)品加工。而市場上銷售的預(yù)包裝食品等，以及《食品安全法》下的食品添加劑應(yīng)不包含在農(nóng)業(yè)轉(zhuǎn)基因生物的定義中。我國目前并未明確定義轉(zhuǎn)基因食品，沒有單獨(dú)的轉(zhuǎn)基因食品法。并且轉(zhuǎn)基因食品安全監(jiān)管存在立法內(nèi)容不全、立法層次較低、監(jiān)管制度缺陷等問題［4］。因此國內(nèi)諸多學(xué)者建議通過進(jìn)一步健全現(xiàn)有法律制度、加強(qiáng)立法的系統(tǒng)性［5］、增進(jìn)監(jiān)管制度的民主性［6］，來完善我國轉(zhuǎn)基因食品安全監(jiān)管。

綜上，歐盟對轉(zhuǎn)基因食品的監(jiān)管最為嚴(yán)格，鑒于歐盟市場的重要性，下文將從歐盟的食品安全風(fēng)險分析框架著手，概述歐盟遺傳改造微生物發(fā)酵食品及飼料產(chǎn)品的授權(quán)過程。

3 歐盟轉(zhuǎn)基因食品安全監(jiān)管主體

3.1 歐盟理事會

歐盟理事會（Council of European Union）由歐盟各成員國部長組成，因此又稱“部長理事會”（the Council of Ministers），是歐盟的重要決策機(jī)構(gòu)。歐盟理事會負(fù)責(zé)日常決策并擁有歐盟立法權(quán)。在轉(zhuǎn)基因食品監(jiān)管中，歐盟理事會承擔(dān)制定相關(guān)法規(guī)，總體規(guī)劃和協(xié)調(diào)的作用，如授權(quán)歐盟委員會執(zhí)行相關(guān)法律法規(guī)，邀請成員國充分參與轉(zhuǎn)基因食品的全程監(jiān)管等。

3.2 歐洲議會

歐洲議會（European Parliament）是歐盟三大機(jī)構(gòu)（歐盟理事會、歐盟委員會、歐洲議會）之一，為歐盟的參與立法、監(jiān)督、預(yù)算和咨詢機(jī)構(gòu)。歐洲議會共有20 個專門委員會，其中環(huán)境、公共衛(wèi)生和食品安全委員會、農(nóng)業(yè)委員會、內(nèi)部市場和消費(fèi)者保護(hù)委員會等與轉(zhuǎn)基因食品安全監(jiān)管相關(guān)。

3.3 歐盟委員會

歐盟委員會（European Commission），是歐盟的常設(shè)執(zhí)行機(jī)構(gòu)，也是歐盟唯一有權(quán)起草法令的機(jī)構(gòu)。歐盟委員會監(jiān)督各歐盟成員國對歐盟法律的履行，作為歐盟執(zhí)行機(jī)構(gòu)，其負(fù)責(zé)歐盟各項(xiàng)法律文件（指令、條例、決定）的具體貫徹執(zhí)行。在轉(zhuǎn)基因食品監(jiān)管中，歐盟委員會負(fù)責(zé)相關(guān)法律法規(guī)的起草及貫徹執(zhí)行。

3.4 歐洲食品安全局（European Food Safety Authority，EFSA）

EFSA 是歐洲食品安全系統(tǒng)的主要單位，EFSA 于2002 年成立，EFSA 成立的主要目的是提供獨(dú)立完整的科學(xué)意見，讓歐盟決策單位面對食物鏈直接與間接相關(guān)問題及潛在風(fēng)險能做出適當(dāng)?shù)臎Q定，以提供歐洲公民安全高品質(zhì)的食物。在轉(zhuǎn)基因食品監(jiān)管中，EFSA 評估轉(zhuǎn)基因生物對歐洲人類和動物健康以及環(huán)境的潛在風(fēng)險。EFSA 的作用是向歐洲風(fēng)險管理者（例如，歐盟委員會和歐盟成員國）就轉(zhuǎn)基因生物的安全性提供科學(xué)建議。EFSA 采用歐盟監(jiān)管框架中規(guī)定的嚴(yán)格標(biāo)準(zhǔn)評估轉(zhuǎn)基因生物的安全性，通過評估后才有可能授權(quán)將它們用作食品或飼料或在歐盟進(jìn)行種植。在風(fēng)險管理者做出市場授權(quán)決定之前，EFSA 會評估轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品的安全性。該評估包括對轉(zhuǎn)基因生物對人類健康，動物健康和環(huán)境的潛在影響的評估。EFSA 的評估基于申請人提交的科學(xué)檔案和任何其他相關(guān)科學(xué)信息。風(fēng)險管理者授權(quán)轉(zhuǎn)基因生物后，通常會獲得歐盟市場10 年的許可。10 年后，必須先由EFSA 重新評估，然后再做出任何重新授權(quán)決定。同時，為幫助申請者理解法規(guī)要求順利通過評估，EFSA 為轉(zhuǎn)基因生物及其衍生食品和飼料的風(fēng)險評估準(zhǔn)備了指導(dǎo)文件，這些文件詳細(xì)說明了如何編寫轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品申請卷宗以及卷宗中需要包括的科學(xué)數(shù)據(jù)。所有指導(dǎo)文件均可在EFSA 網(wǎng)站上公開獲得。值得注意的是，EFSA會經(jīng)常更新其指導(dǎo)文件，申請者在申請前務(wù)必確保使用最新版本。表1 列出了歐洲食品安全局關(guān)于轉(zhuǎn)基因食品授權(quán)的主要指導(dǎo)文件，截止到目前都是現(xiàn)行有效版本。本文側(cè)重于分析遺傳改造微生物發(fā)酵生產(chǎn)的食品和飼料歐盟授權(quán)要求，尤其是對遺傳改造微生物自身的要求，故而下文將重點(diǎn)分析EFSA 于2011 年6 月頒布的食品和飼料用遺傳改造微生物及其產(chǎn)品風(fēng)險評估指南以及2018 年2 月頒布的用作飼料添加劑或生產(chǎn)生物的微生物特性描述指南，以幫助申請者更好地理解EFSA 對發(fā)酵菌種的要求。

4 歐盟遺傳改造微生物發(fā)酵食品、飼料授權(quán)要求

4.1 食品和飼料用遺傳改造微生物及其產(chǎn)品風(fēng)險評估指南

GMMs參與多種食品和飼料的生產(chǎn)。這些產(chǎn)品在歐盟的上市批準(zhǔn)由不同的法律法規(guī)監(jiān)管，需要滿足不同的風(fēng)險評估要求。歐洲食品安全局2011年頒布食品和飼料用遺傳改造微生物及其產(chǎn)品風(fēng)險評估指南，指南根據(jù)產(chǎn)品的性質(zhì)和EFSA轉(zhuǎn)基因生物小組評估所需的科學(xué)信息水平，將產(chǎn)品分為4類（表2），每類產(chǎn)品需要提供不同的數(shù)據(jù)（表3）。

除了提供表3中要求的資料外，屬于第一類和第二類飼料添加劑的氨基酸和酶以及屬于第四類的微生物飼料添加劑根據(jù)歐盟委員會第429/2008號法規(guī)（關(guān)于歐盟第1831/2003 號的實(shí)施細(xì)則）進(jìn)行評估，該條例涉及飼料添加劑的評估和授權(quán)。屬于第三類的作為飼料用途的生物質(zhì)根據(jù)歐盟第1829/2003號法規(guī)評估。屬于第二類的食品用酶根據(jù)歐盟第1332/2008號法規(guī)和第1331/2008號法規(guī)評估。屬于第一類或第二類的食品添加劑應(yīng)符合歐盟第1333/2008號法規(guī)和第1331/2008號法規(guī)的要求。屬于第一類或第二類的食用香料應(yīng)符合歐盟第1334/2008號法規(guī)和第1331/2008號法規(guī)的要求。

4.2 食品和飼料用遺傳改造微生物發(fā)酵產(chǎn)品特性描述要求

如前所述，遺傳改造微生物發(fā)酵的產(chǎn)品所屬類別不同，授權(quán)需要符合的法規(guī)要求、需要提供的資料詳實(shí)程度也不同。如果產(chǎn)品中含有轉(zhuǎn)基因成分，則需要遵從歐盟第1829/2003 號法規(guī)要求；如果產(chǎn)品中不含有轉(zhuǎn)基因成分，則根據(jù)產(chǎn)品的類別遵從不同法律法規(guī)的要求。EFSA 于2018 年2 月頒布了用作飼料添加劑或用作生產(chǎn)生物的微生物特性描述指南，相比于EFSA 2011年頒布的食品和飼料用遺傳改造微生物及其產(chǎn)品風(fēng)險評估指南，2018年的指南結(jié)合最近的科學(xué)發(fā)展和評估經(jīng)驗(yàn)更加詳細(xì)地描述了用于飼料添加劑生產(chǎn)的微生物特征要求。雖然該指南的目的是幫助申請者準(zhǔn)備和提交飼料添加劑的授權(quán)申請，但考慮到食品添加劑等產(chǎn)品

也是由EFSA 監(jiān)管，我們在準(zhǔn)備食品類產(chǎn)品的批準(zhǔn)和授權(quán)時也可以參照該指南的要求進(jìn)行準(zhǔn)備。結(jié)合2011年的和2018年的指南，可以看出EFSA對于遺傳改造微生物的風(fēng)險評估過程是基于循序漸進(jìn)和基于個案原則進(jìn)行的，對于最終產(chǎn)品中不含轉(zhuǎn)基因成分的遺傳改造微生物發(fā)酵產(chǎn)品（第一類）的菌種特征描述要求可以簡要?dú)w納如下。

表1 歐洲食品安全局關(guān)于轉(zhuǎn)基因食品授權(quán)的主要指導(dǎo)文件Tab.1 Main guidance documents of European Food Safety Authority on authorization of genetically modified foods

表2 EFSA食品和飼料用遺傳改造微生物及其產(chǎn)品風(fēng)險評估指南中對產(chǎn)品的分類Tab.2 Classification of products in EFSA guidance on the risk assessment of genetically modified microorganisms and their products intended for food and feed use

表3 申請將轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品及其衍生食品和飼料產(chǎn)品投放歐盟市場所需的微生物信息Tab.3 Microbial information required for the placing on the market of GMMs and their derived food and feed products

4.2.1 受體或親本微生物的特征

對于第一類產(chǎn)品，受體或親本微生物的特征需要提供的資料包括親本微生物的學(xué)名、分類學(xué)和其他名稱、表型特征及親本菌株基因改造的歷史。需要提供以下分類信息：①屬；②種；③亞種（如適用）；④株；⑤保藏號；⑥通用名；⑦商品名。表型特征可包括形態(tài)、生長要求、生長速率、溫度及pH 范圍和最佳值、孢子形成能力、有氧和/或無氧代謝、抗性特性等。相關(guān)遺傳標(biāo)記指營養(yǎng)缺陷型突變和編碼抗性基因的特征等。在進(jìn)行親本微生物特征描述時可以參照2018 年的指南的相關(guān)規(guī)定包括如下。

（1）WGS（whole genome sequencing，全基因組測序）鑒定 WGS 法是評估微生物特性的首選方法，這對于細(xì)菌和酵母是強(qiáng)制性的，對于絲狀真菌也推薦使用WGS分析。WGS應(yīng)優(yōu)先用于鑒定微生物和記錄基因改造。WGS 可以提供菌株的詳細(xì)的分類學(xué)鑒定信息，還可以借助WGS 分析抗性基因和毒力/產(chǎn)毒性因子的相關(guān)基因。因此，它是了解遺傳改造微生物風(fēng)險評估的一個基本要素。

（2）QPS（qualified presumption of safety，合格安全假定）方法評估 QPS 的評估是基于廣泛的文獻(xiàn)搜索，以發(fā)現(xiàn)相關(guān)的人類、動物和環(huán)境的可能安全問題。符合QPS 方法的菌株被認(rèn)為對目標(biāo)物種、消費(fèi)者和環(huán)境是安全的，無需具體研究。如果受體菌株符合QPS 的條件，并且如果基因改造沒有問題，那么QPS狀態(tài)也適用于轉(zhuǎn)基因生物。

（3）抗生素敏感性 對于微生物抗性的風(fēng)險評估重點(diǎn)在于區(qū)分固有抗性和獲得性抗性。使用組合方法進(jìn)行表型測試，基于最低抑菌濃度MIC測定，與區(qū)分敏感菌株和抗性菌株的規(guī)定臨界值進(jìn)行比較，以及WGS分析。

（4）抗菌活性 添加劑不應(yīng)產(chǎn)生與人類和動物使用相關(guān)的抗菌劑。應(yīng)通過對照已知對一系列抗生素敏感的參考菌株測試培養(yǎng)上清液來證明不存在抗微生物活性。如果在一個或多個物種中有陽性結(jié)果，應(yīng)鑒定抑制物質(zhì)。

（5）菌種毒力和致病性分析 在指南中，對產(chǎn)毒性和致病性的評估基于3種不同的證據(jù)收集方法，這些方法應(yīng)在證據(jù)權(quán)重方法中使用。第一是基于文獻(xiàn)檢索菌株或其親緣相近的菌種的使用歷史。第二個是基于WGS 生物信息學(xué)分析已知毒力因子或有毒化合物的存在。第三是基于模型生物進(jìn)行微生物毒性測試。

4.2.2 插入序列（供體生物體）的特征

插入序列的來源和功能對于確定基因產(chǎn)物對人類、動物、植物健康和環(huán)境的潛在毒性、毒力或過敏性很重要。插入GMM 中的序列可以源自特定的生物體或設(shè)計(jì)序列。當(dāng)插入的DNA 是來自不同來源的序列的組合時，應(yīng)提供每個序列的相關(guān)信息。來自特定供體的DNA 序列的描述應(yīng)包括插入元素的核苷酸序列、結(jié)構(gòu)和功能、編碼蛋白的名稱等。設(shè)計(jì)序列是在自然界中未知的序列，例如密碼子優(yōu)化的基因。設(shè)計(jì)序列應(yīng)提供設(shè)計(jì)的原理和策略，序列和功能元件的物理圖譜，編碼蛋白的衍生氨基酸序列和功能，與數(shù)據(jù)庫中的序列相似性等。

4.2.3 遺傳改造的描述

遺傳改造應(yīng)詳細(xì)描述改造方案，當(dāng)使用質(zhì)粒作為載體時，對載體的特征、來源及風(fēng)險評估也應(yīng)詳細(xì)描述。遺傳修飾的過程描述，包括基因序列插入、刪除、替換或修飾的方法等。

4.2.4 遺傳改造微生物相關(guān)的信息

經(jīng)過改造的GMM 需存放在歐盟認(rèn)可的菌種保藏機(jī)構(gòu)，申請授權(quán)時需提供保藏編號。另外，還應(yīng)提供以下與GMM 相關(guān)的信息：①遺傳性狀或表型特征的描述，尤其是基因修飾所引起的可能被表達(dá)或不再被表達(dá)的性狀或特征；②GMM 中載體和/或供體DNA 的結(jié)構(gòu)和數(shù)量，當(dāng)載體或供體DNA 中存在抗性標(biāo)記時，這一點(diǎn)尤為重要；③識別和檢測插入序列和載體的技術(shù)。

4.2.5 與產(chǎn)品相關(guān)的信息

（1）與生產(chǎn)過程相關(guān)的信息 應(yīng)該詳細(xì)描述遺傳改造微生物生產(chǎn)過程相關(guān)的信息如發(fā)酵、培養(yǎng)的流程并推薦顯示關(guān)鍵階段的流程圖。

（2）與產(chǎn)品制備過程相關(guān)的信息 應(yīng)提供與產(chǎn)品制備相關(guān)的信息和用于去除GMM 細(xì)胞和重組基因的詳細(xì)技術(shù)信息。應(yīng)證明去除方法的可靠性和有效性，確保產(chǎn)品中不含轉(zhuǎn)基因生產(chǎn)菌株。此外應(yīng)提供產(chǎn)品中重組DNA 可能存在的信息。如果發(fā)現(xiàn)了與全長編碼序列相對應(yīng)的重組DNA，必須評估基因轉(zhuǎn)移的可能性。

4.3 遺傳改造微生物發(fā)酵食品、飼料授權(quán)流程

遺傳改造微生物發(fā)酵產(chǎn)品所屬類別不同，監(jiān)管法規(guī)不同，授權(quán)的過程也略有差異。但產(chǎn)品的授權(quán)都必須先通過EFSA 的安全性評估后才有可能合規(guī)在歐盟上市銷售。以飼料添加劑為例，歐盟法規(guī)EC 1831/2003 中描述了授權(quán)的申請程序。申請人必須：①向歐盟委員會提交申請；②直接向EFSA 提交技術(shù)檔案；③向歐盟參考實(shí)驗(yàn)室提交三份飼料添加劑參考樣品。歐盟委員會網(wǎng)站提供了飼料添加劑授權(quán)程序的概述。EFSA 進(jìn)行風(fēng)險評估，EFSA 在收到卷宗后6 個月內(nèi)出具意見，并會針對卷宗提出問題要求補(bǔ)充資料。而歐盟委員會在收到EFSA 觀點(diǎn)后的三個月起草法規(guī)文件，建議成員國批準(zhǔn)或拒絕該授權(quán)。對于任何類型的飼料添加劑申請，申請人應(yīng)參考關(guān)于動物營養(yǎng)添加劑的第1831/2003 號法規(guī)及第429/2008 號法規(guī)的實(shí)施細(xì)則，以及EFSA 的相關(guān)行政指導(dǎo)和技術(shù)指導(dǎo)文件來準(zhǔn)備和提交檔案。EFSA 關(guān)于飼料添加劑應(yīng)用的行政和技術(shù)指導(dǎo)文件定期更新，因此提醒申請人在申請時務(wù)必確保使用這些文件的最新版本。值得注意的是，飼料添加劑類的授權(quán)有效期為10年，最遲應(yīng)在授權(quán)到期日前一年向歐盟委員會提交更新申請。

5 歐盟遺傳改造微生物發(fā)酵產(chǎn)品授權(quán)和拒絕實(shí)例分析

遺傳改造微生物參與多種食品和飼料的生產(chǎn)。在食品和飼料工業(yè)中，遺傳改造微生物可用于生產(chǎn)酶制劑、氨基酸、有機(jī)酸、維生素等。大腸桿菌等原核表達(dá)系統(tǒng)具有遺傳背景研究清楚、操作簡單、生長繁殖快、成本低、產(chǎn)量高、表達(dá)產(chǎn)物純化過程簡單、產(chǎn)物穩(wěn)定性好、不易污染以及應(yīng)用范圍廣等優(yōu)點(diǎn)，是最早進(jìn)行研究的外源基因表達(dá)系統(tǒng)，也得到了非常廣泛的應(yīng)用，取得了巨大的科研價值和經(jīng)濟(jì)效益。其在生物、食品、工業(yè)以及醫(yī)學(xué)領(lǐng)域發(fā)揮著舉足輕重的作用［15］。然而許多大腸桿菌菌株是人類和其他動物的病原體，可導(dǎo)致泌尿和腸道疾病，也常是敗血癥和許多其他全身感染的原因。在歐盟，EFSA 決定將這一物種排除在未來的QPS評估之外［16］，安全性評估必須在菌株水平上進(jìn)行［17］。在2020 年EFSA 發(fā)布的最新QPS清單中，因?yàn)榉诸惖匚徊幻鞔_或具有潛在的有害特征，EFSA還將filamentous fungi、bacteriophages、Streptomycetes、Oomycetes、Enterococcus faecium等排除在QPS 評估之外［18］。然而這并不意味著大腸桿菌不允許用作生產(chǎn)菌株發(fā)酵生產(chǎn)食品和飼料產(chǎn)品，只要證明菌種的安全性，仍然有可能被歐盟授權(quán)。表4 匯總了2019—2020 年EFSA 收到的部分大腸桿菌發(fā)酵菌株申請情況，這些申請均在評估中，尚未獲得EFSA 認(rèn)可及歐盟委員會的正式授權(quán)和批準(zhǔn)。

此外，我們也查詢了2019—2020 年由歐盟委員會正式授權(quán)的由大腸桿菌生產(chǎn)的產(chǎn)品，部分結(jié)果匯總見表5。從匯總結(jié)果表中我們可以看出，所授權(quán)的大腸桿菌菌株都是基于大腸桿菌K-12 菌種改造的，大腸桿菌K-12 具有很好的特性，其安全性（非致病性）已被廣泛記錄，如果使用大腸桿菌K-12 作為親本菌株進(jìn)行改造，會相對容易通過EFSA 的評估。值得注意的是，遺傳改造的大腸桿菌CGMCC 11473 生產(chǎn)飼料添加劑L-蘇氨酸的授權(quán)實(shí)例。申請者在首次申請時，EFSA 表示申請者所提供的信息不足以描述遺傳改造的特征。在EFSA 推薦的10 種臨床相關(guān)抗菌藥物敏感性檢測中，申請者只檢測了其中的5 種，并且卡那霉素的最小抑菌濃度MIC 為256 mg/L，超過了臨界值。然而申請者沒有提供關(guān)于卡那霉素抗性的遺傳基礎(chǔ)信息，沒有在生產(chǎn)菌株的基因組中搜索賦予卡那霉素或其他抗性的基因。因此，生產(chǎn)菌株中存在抗性基因的可能性仍然存在。并且申請者沒有提供親本菌株、受體菌株和遺傳改造過程的信息。生產(chǎn)菌株的細(xì)胞及其重組DNA 在產(chǎn)品中的存在仍然存在不確定性。因此，EFSA 無法就由大腸桿菌CGMCC 11473 發(fā)酵生產(chǎn)的L-蘇氨酸產(chǎn)品對目標(biāo)物種、消費(fèi)者和環(huán)境安全性得出結(jié)論［19］。再次申請時，申請人補(bǔ)充提供了關(guān)于生產(chǎn)菌株的身份、遺傳修飾、抗生素敏感性以及最終產(chǎn)品中生產(chǎn)菌株的細(xì)胞和重組DNA 缺失的額外數(shù)據(jù)。EFSA 認(rèn)為受體生物大腸桿菌K-12 是安全的。遺傳修飾增加了L-蘇氨酸的生物合成能力。生產(chǎn)菌株中沒有保留編碼抗性的基因。受體菌株是安全的，遺傳改造不會引起問題。此外，在最終產(chǎn)品中沒有檢測到生產(chǎn)菌株的活細(xì)胞或DNA。根據(jù)這些新信息，EFSA 專家組得出結(jié)論，大腸桿菌CGMCC 11473 生產(chǎn)的L-蘇氨酸對所有動物物種、消費(fèi)者和環(huán)境都是安全的［20］。從這些案例中我們了解到，申請者必須確保提供的信息符合相關(guān)法規(guī)和指南的要求，切不可存在僥幸心理提供不完整的評估卷宗，以期通過EFSA 審核，這樣只會延長評估和授權(quán)的周期。另外，如果基因修飾過程沒有引入抗性基因，并且最終產(chǎn)品中沒有生產(chǎn)菌株的活細(xì)胞及其DNA，EFSA 評估通過的可能性也會大大提高。

表4 2019—2020年EFSA 收到的部分大腸桿菌發(fā)酵產(chǎn)品授權(quán)申請清單Tab.4 List of application for some products produced by fermentation of E.coli received by EFSA from 2019 to 2020

表5 2019—2020年歐盟委員會批準(zhǔn)的部分由大腸桿菌生產(chǎn)的產(chǎn)品清單Tab.5 List of authorizations by EU from 2019 to 2020 for some products produced by fermentation of E.coli

續(xù)表

6 結(jié)語與展望

合成生物學(xué)是發(fā)展最快、最有前途的新興技術(shù)之一。合成生物學(xué)的迅速發(fā)展帶來的各種轉(zhuǎn)基因食品及產(chǎn)品日益影響著我們的社會生活，在帶來巨大經(jīng)濟(jì)利益的同時，其中也潛藏著巨大的未知風(fēng)險，需要法律加以規(guī)制。歐美是轉(zhuǎn)基因技術(shù)發(fā)展最快也是技術(shù)水平最高的國家和地區(qū)，二者在轉(zhuǎn)基因技術(shù)領(lǐng)域取得了輝煌的成就，然而因?yàn)槎叩臍v史文化背景、技術(shù)水平和公眾對轉(zhuǎn)基因食品的認(rèn)知程度不同，對轉(zhuǎn)基因食品的監(jiān)管也存在著截然不同的做法。其中以歐盟對轉(zhuǎn)基因食品的監(jiān)管最為嚴(yán)苛。鑒于歐盟市場的重要性，我們必須深入理解歐盟對于轉(zhuǎn)基因食品的監(jiān)管要求。廣大科研工作者在設(shè)計(jì)遺傳改造微生物時也必須要考慮相關(guān)監(jiān)管法規(guī)的要求，從源頭上減少歐盟準(zhǔn)入成本、縮短周期。我國對轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品的界定仍然非常模糊，造成了“有技術(shù)、無市場”的尷尬局面，極大地限制了生物技術(shù)的應(yīng)用與發(fā)展。我國現(xiàn)有的法規(guī)政策，難以適應(yīng)轉(zhuǎn)基因技術(shù)的發(fā)展，立法與制度建設(shè)嚴(yán)重滯后于科技發(fā)展。根據(jù)市場“法無禁止即可為”，同時，根據(jù)政府“法無授權(quán)不可為”，提出以下3 點(diǎn)建議。①合理借鑒其他國家的監(jiān)管經(jīng)驗(yàn)，參照歐美特別是歐洲的做法盡快推進(jìn)相關(guān)法律法規(guī)出臺，明確各類產(chǎn)品的申報、審批要求，統(tǒng)一市場準(zhǔn)入標(biāo)準(zhǔn)，讓相關(guān)產(chǎn)品的準(zhǔn)入做到有法可依。②建議區(qū)分工業(yè)用遺傳改造微生物和農(nóng)業(yè)用遺傳改造微生物，對于工業(yè)用遺傳改造微生物的應(yīng)用管理，可學(xué)習(xí)借鑒歐盟對遺傳改造微生物制造食品、飼料的分類管理經(jīng)驗(yàn)，對遺傳改造微生物制造食品、飼料，按照終產(chǎn)品中是否檢測出轉(zhuǎn)基因組分等進(jìn)行分類，對不同類別的產(chǎn)品采取不同的準(zhǔn)入標(biāo)準(zhǔn)和措施；建議參照歐盟，建立我國的“QPS”清單，對于清單內(nèi)的微生物制造產(chǎn)品簡化評估內(nèi)容和審批手續(xù)。③建議出臺《中華人民共和國生物安全法》的配套準(zhǔn)入注冊指南，指導(dǎo)申請人完成準(zhǔn)入注冊。