侯鐵偉， 張 成， 單永琪

北部戰(zhàn)區(qū)總醫(yī)院 普外科，遼寧 沈陽 110016

胃癌是我國發(fā)病率、病死率均較高的惡性腫瘤[1-2]。胃癌術(shù)后腫瘤復(fù)發(fā)和進(jìn)展是患者的重要臨床終點(diǎn)[3-5]。目前，腫瘤術(shù)后病理分期等相關(guān)參數(shù)可以預(yù)測(cè)胃癌患者的生存預(yù)后情況，但復(fù)發(fā)和進(jìn)展患者仍較多。因此，尋找新的預(yù)后評(píng)估指標(biāo)和治療靶點(diǎn)尤為重要。雙特異性酪氨酸磷酸化調(diào)節(jié)激酶2[dual-specificity tyrosine(Y)-phosphorylation regulated kinase 2，DYRK2]是DYRK家族成員之一[6]。近年來，多項(xiàng)研究表明，DYRK2在多種腫瘤中表達(dá)明顯降低，導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生發(fā)展[7-13]。但是目前，少見DYRK2在胃癌預(yù)后中的作用相關(guān)研究報(bào)道。本研究旨在探討DYRK2在胃癌組織中的表達(dá)及臨床意義?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象 回顧性分析北部戰(zhàn)區(qū)總醫(yī)院普外科自2015年1月至2017年9月收治的100例胃癌手術(shù)患者的臨床資料。獲取患者的胃癌組織樣本(n=100)及癌旁組織樣本(n=30)。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)首次確診并行手術(shù)者；(2)術(shù)后病理證實(shí)為胃癌者；(3)具有完整的相關(guān)臨床資料者；(4)僅診斷為胃癌者；(5)卡氏評(píng)分≥70分者。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)術(shù)后病理切緣陽性者；(2)具有自身免疫性疾病及其他惡性腫瘤病史者；(3)術(shù)前已經(jīng)進(jìn)行過放化療等腫瘤治療措施者；(4)姑息性手術(shù)者。

1.2 研究方法

1.2.1 試劑與儀器 試劑：PBS緩沖液、0.01 mol/L檸檬酸鹽緩沖液、0.5 mol/L EDTA緩沖液、1 mol/L TBS緩沖液、酶消化液、3%甲醇-過氧化氫溶液、封裱劑。儀器：18 cm不銹鋼高壓鍋或電爐或醫(yī)用微波爐；水浴鍋。

1.2.2 免疫組化 對(duì)胃癌組織及癌旁組織進(jìn)行蘇木精-伊紅(HE)染色，在顯微鏡下選擇最典型的特征在固定點(diǎn)進(jìn)行標(biāo)記[14]。使用DYRK2兔多克隆抗體(1:200，美國Proteintech，美國)進(jìn)行免疫組化。采用雙盲的方法，由兩名經(jīng)驗(yàn)豐富的病理科醫(yī)師對(duì)組織切片進(jìn)行檢查。根據(jù)陽性染色細(xì)胞比例進(jìn)行評(píng)分：0分，陰性；1分，陽性染色細(xì)胞比例≤25%；2分，陽性染色細(xì)胞比例25%～50%；3分，陽性染色細(xì)胞比例51%～75%；4分，陽性染色細(xì)胞比例>75%。染色強(qiáng)度評(píng)分：0分，陰性或無染色；1分，弱陽性；2分，中陽型；3分，強(qiáng)陽性。最后染色強(qiáng)度與陽性細(xì)胞百分比積分相乘，獲得每個(gè)標(biāo)本對(duì)應(yīng)的最終分?jǐn)?shù)，計(jì)算均數(shù)，將最終得分<8分的標(biāo)本定義為DYRK2低表達(dá)。

1.3 觀察指標(biāo) 記錄患者的總生存期(overall survival，OS)和無進(jìn)展生存期(progression free survival，PFS)。PFS定義為首次確診并手術(shù)至術(shù)后首次進(jìn)展時(shí)間或患者死亡時(shí)間。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。計(jì)數(shù)資料以例(百分率)表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)。Kaplan-Meier法分析患者OS和PFS。Cox回歸模型分析影響胃癌患者預(yù)后的影響因素。采用R 3.1.2軟件繪制列線圖，構(gòu)建預(yù)測(cè)模型[15]。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 DYRK2在胃癌組織及癌旁組織中表達(dá)情況 DYRK2在胃癌組織中表達(dá)上調(diào)(圖1)。使用在線數(shù)據(jù)庫GEPIA驗(yàn)證結(jié)果顯示，胃癌組織DYRK2的mRNA表達(dá)水平顯著高于正常組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05；圖2)。

圖1 DYRK2在胃癌組織及癌旁組織中表達(dá)(a.癌組織；b.癌旁組織；HE×400) 圖2 GEPIA驗(yàn)證胃癌組織及正常組織DYRK2表達(dá)

2.2 DYRK2表達(dá)與臨床病理特征關(guān)系 DYRK2表達(dá)與腫瘤大小、腫瘤分化程度、臨床病理分期有相關(guān)性(P<0.05)，與性別、年齡、體質(zhì)量減輕、癌胚抗原、血清白蛋白、腫瘤部位、浸潤(rùn)深度、是否化療、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、神經(jīng)侵犯無相關(guān)性(P>0.05)。見表1。

表1 DYRK2表達(dá)與臨床病理特征關(guān)系/例(百分率/%)

2.2 生存分析結(jié)果 Kaplan-Meier分析結(jié)果顯示，DYRK2低表達(dá)患者中位OS與中位PFS分別為30個(gè)月、21個(gè)月，均高于DYRK2高表達(dá)患者的23個(gè)月、20個(gè)月，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見圖3。

圖3 DYRK2低表達(dá)患者與DYRK2高表達(dá)患者OS、PFS比較

2.3 胃癌患者預(yù)后影響因素 DYRK2低表達(dá)、腫瘤分化、是否化療是影響胃癌患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(P<0.05)。見表2。

表2 胃癌患者預(yù)后影響因素分析

2.4 列線圖構(gòu)建 在Cox回歸分析的基礎(chǔ)上構(gòu)建列線圖，進(jìn)行內(nèi)部驗(yàn)證，同時(shí)構(gòu)建預(yù)測(cè)模型，C-指數(shù)為0.886 8(95%可信區(qū)間0.838～0.936)。見圖4。

圖4 列線圖構(gòu)建預(yù)測(cè)模型

3 討論

DYRK2是DYRK的家族成員之一，該家族中的部分成員已經(jīng)被鑒定作為致癌基因參與腫瘤發(fā)生發(fā)展的多個(gè)過程，如DYRK1、DYRK1A、DYRK1B等[16-17]。但是，該家族也有部分成員的高表達(dá)與某些腫瘤的良好預(yù)后呈正相關(guān)，如DYRK2表達(dá)減少與肝癌的不良預(yù)后和奧沙利鉑耐藥有關(guān)[18]。Yamashita等[19]研究表明，DYRK2陽性表達(dá)組患者的5年無疾病存活率顯著高于DYRK2陰性組。

預(yù)測(cè)結(jié)果及發(fā)現(xiàn)導(dǎo)致不良結(jié)果的生物學(xué)機(jī)制是癌癥研究中的兩個(gè)重要部分[20]。DYRK2參與了多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展，如肝癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、大腸癌等。但是，關(guān)于DYRK2在胃癌預(yù)后中的作用少見報(bào)道。本研究結(jié)果顯示，DYRK2的mRNA表達(dá)在胃癌組織中上調(diào)；Cox多因素分析結(jié)果顯示，DYRK2低表達(dá)、腫瘤分化和是否化療均是影響胃癌的獨(dú)立預(yù)后因素；但是Kaplan-Meier生存分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與DYRK2低表達(dá)的患者相比，DYRK2高表達(dá)者OS和PFS更低，與相關(guān)研究報(bào)道[21]結(jié)果不一致。而另有研究表明，DYRK2作為腫瘤抑制因子，通過降解Snail調(diào)節(jié)癌癥的侵襲和轉(zhuǎn)移[7]，敲除DYRK2可以促進(jìn)上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化和體內(nèi)外癌癥侵襲[11]。本研究在COX回歸分析的基礎(chǔ)上，繪制了列線圖，進(jìn)行了內(nèi)部驗(yàn)證，對(duì)胃癌患者的3年存活率進(jìn)行預(yù)測(cè)，在內(nèi)部驗(yàn)證中，列線圖C-指數(shù)為0.886 8(95%可信區(qū)間0.838～0.936)，提示此預(yù)測(cè)模型具有較好的準(zhǔn)確性。

綜上所述，DYRK2在胃癌組織中顯著上調(diào)，可作為胃癌患者預(yù)后的獨(dú)立預(yù)測(cè)因素，有必要進(jìn)一步研究闡明其具體的分子機(jī)制。