崔新剛 王穎瑩

1.洛陽市婦幼保健院，河南 洛陽 471000；2.洛陽市食品藥品檢驗(yàn)所，河南 洛陽 471000

維C銀翹片為《中國藥典》2015年版收載的中西藥復(fù)方制劑，由金銀花、連翹、牛蒡子、蘆根、桔梗及維生素C、對乙酰氨基酚、馬來酸氯苯那敏和薄荷素油制成，具有疏風(fēng)解表，清熱解毒之功效[1]。用于外感風(fēng)熱所致的流行性感冒，癥見發(fā)熱，頭痛，咳嗽，口干，咽喉疼痛。研究表明不同廠家維C銀翹片存在較大的質(zhì)量差異[2]。目前，維C銀翹片質(zhì)量評價(jià)方法多采用藥典收錄的HPLC法，方法較為繁瑣，本研究同時(shí)測定維生素C、對乙酰氨基酚和馬來酸氯苯那敏含量，方法簡單、快速。藥典法測定維C銀翹片中綠原酸和牛蒡苷含量，結(jié)合聚類分析和主成分分析，探討不同廠家維C銀翹片質(zhì)量差異，旨在為其質(zhì)量控制提供依據(jù)。

1 材料

1.1 儀器 Agilent1200型高效液相色譜儀，包括G1315B型二極管陣列檢測器、自動(dòng)進(jìn)樣器(美國安捷倫科技有限公司)；KQ-100ES超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；賽多利斯BSA8201電子天平(賽多利斯科學(xué)儀器(北京)有限公司)；易普易達(dá)Smart-S2型超純水機(jī)(南京易普易達(dá)科技發(fā)展有限公司)。

1.2 藥品與試劑 綠原酸對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號：110753-201713)；牛蒡苷對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號：110819-201807)；對乙酰氨基酚對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號：批號:100018-201508)；馬來酸氯苯那敏對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號：100047-201606)；維生素C對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號：100425-201804)。10批樣品分別為貴州的A廠(批號：190906；191001)、廣東的B廠(批號：190904；190702)、廣西的C廠(批號：181202；190904)、云南的D廠(批號：180605；180801)、江蘇的E廠(批號：20190106；20181103)；乙腈為色譜純(天津天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司)；磷酸為分析純(國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)。

2 方法與結(jié)果

2.1 綠原酸的含量測定

2.1.1 色譜條件 參考《中國藥典》及相關(guān)文獻(xiàn)[3]，通過多次實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，最終確定色譜條件為，色譜柱：Sysmetry C18 色譜柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；柱溫：25 ℃；流速：1.0 mL·min-1；流動(dòng)相：乙腈-0.4%磷酸(13∶87)；進(jìn)樣量：10 μL；檢測波長：327 nm。

2.1.2 對照品制備 精密稱取綠原酸對照品適量，置于棕色量瓶中，加甲醇制成每1 mL含對照品 30 μg 的溶液，即得對照品溶液。

2.1.3 供試品制備 取本品10片，糖衣片需先除去糖衣，精密稱定，研細(xì)粉，取約1 g細(xì)粉，置于具塞棕色瓶中，精密加入甲醇100 mL，密塞，稱定重量。將所制得供試品溶液進(jìn)行超聲處理(功率250 W，頻率50 kHz)30 min，放冷，再次稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，置棕色瓶中，即得供試品溶液。

2.1.4 樣品測定 按2.1.3制備樣品溶液，精密吸取樣品溶液和對照品溶液各10 μL，按2.1.1色譜條件，分別測定10個(gè)樣品中的綠原酸，以外標(biāo)法計(jì)算含量。色譜圖如圖1所示，測定結(jié)果見表1。

表1 不同廠家指標(biāo)成分含量測定結(jié)果(mg/片)

2.2 牛蒡苷的含量測定

2.2.1 色譜條件 色譜柱：Sysmetry C18 色譜柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；柱溫：25 ℃；流速：1.0 mL·min-1；流動(dòng)相：乙腈-5 mL/L冰醋酸溶液(18∶82)；進(jìn)樣量：10 μL；檢測波長：280 nm。

2.2.2 對照品制備 精密稱取牛蒡苷對照品適量，置于棕色量瓶中，加甲醇制成每1 mL含對照品 50 μg 的溶液，即得對照品溶液。

2.2.3 供試品制備 取本品10片，糖衣片需先除去糖衣，精密稱定，研細(xì)粉，取0.5 g細(xì)粉，置于50 mL棕色量瓶中，加甲醇約45 mL，將所制得供試品溶液進(jìn)行超聲處理(功率300 W，頻率50 kHz)30 min，放冷，加甲醇至刻度，搖勻，離心機(jī)離心，取上清液，即得供試品溶液。

2.2.4 樣品測定 按2.1.4樣品測定方法。色譜圖如圖2所示，測定結(jié)果見表1。

2.3 維生素C、對乙酰氨基酚、馬來酸氯苯那敏的含量測定

2.3.1 色譜條件 色譜柱：Sysmetry C18 色譜柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；柱溫：25 ℃；流速：1.0 mL·min-1；流動(dòng)相：0.05 mol/L KH2PO4(pH 3.0，含1%三乙胺)-乙腈(75∶25)；進(jìn)樣量：10 μL；檢測波長：260 nm。

2.3.2 對照品制備 分別準(zhǔn)確稱取維生素C、對乙酰氨基酚和馬來酸氯苯那敏對照品適量，以流動(dòng)相溶解，置于同一50 mL容量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，制得含維生素C 103 μg/mL，對乙酰氨基酚102 μg/mL，馬來酸氯苯那敏218 μg/mL的混合對照品溶液。

2.3.3 供試品制備 取本品10片，除去包衣，精密稱定，研細(xì)粉，稱取適量(約相當(dāng)于1片藥物的質(zhì)量)，置于100 mL容量瓶中，加流動(dòng)相適量，將所制得供試品溶液進(jìn)行超聲處理(功率300 W，頻率50 kHz)30 min，放冷，用流動(dòng)相補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。

2.3.4 樣品測定 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20 μL，注入液相色譜儀，測定。色譜圖如圖3所示，測定結(jié)果見表1。

2.4 主成分分析 主成分分析是利用降維的思想，在損失最少信息的前提下把多個(gè)指標(biāo)轉(zhuǎn)化為幾個(gè)綜合指標(biāo)的多元統(tǒng)計(jì)方法[4]。從不同廠家維C銀翹片中有效成分含量主成分分析結(jié)果可得，前2個(gè)主成分分析的累積方差貢獻(xiàn)率分別達(dá)到65.608%、90.593%，表明前2個(gè)主成分可以解釋分類信息的90.593%，能夠反映不同廠家維C銀翹片的質(zhì)量，結(jié)果見表2和圖4。由圖4可知不同生產(chǎn)廠家的維C銀翹片分為3類，編號3、4、7和8為一類，編號1、2、9和10為一類，5和6為一類。

2.5 聚類分析 聚類分析是用距離來測定樣品之間的相似程度，為相似樣品歸類的最常用方法，常用于中藥質(zhì)量評價(jià)[5-6]。本研究以維C銀翹片中的有效成分的含量結(jié)果為變量，運(yùn)用SPSS 18.0 統(tǒng)計(jì)軟件，以平均Euclidean距離為度量標(biāo)準(zhǔn)，采用組間聯(lián)接的方法對10批樣品進(jìn)行系統(tǒng)聚類分析，結(jié)果見圖5。在組間距為25時(shí)，將10個(gè)批次樣品分為3類，編號3、4、7和8為一類，編號1、2、9和10為一類，5和6為一類。該結(jié)果與主成分分析結(jié)果一致。

表2 主成分特征值和貢獻(xiàn)率

4 討論

4.1 不同廠家維C銀翹片中西藥成分分析 藥典規(guī)定維C銀翹片每片含維生素C 49.5 mg、對乙酰氨基酚105 mg、馬來酸氯苯那敏1.05 mg。每片含維生素C應(yīng)為標(biāo)示量的90.0%～110.0%，即44.55～54.45 mg，每片含對乙酰氨基酚應(yīng)為標(biāo)示量的90.0%～110.0%，即94～115.5 mg，每片含馬來酸氯苯那敏應(yīng)為標(biāo)示量的85.0%～115.0%，即0.8925～1.2075 mg。經(jīng)檢測發(fā)現(xiàn)5個(gè)廠家藥品中3種成分含量均符合規(guī)定，但結(jié)果均在規(guī)定范圍的下限，分析原因可能是生產(chǎn)廠家在符合藥典規(guī)定的前提下采用接近下限投藥量來生產(chǎn)藥品從而減少生產(chǎn)成本。

4.2 不同廠家維C銀翹片中中藥成分分析 藥典規(guī)定每片含綠原酸不得少于1.5 mg，含牛蒡苷不得少于2.5 mg，大部分廠家的檢測結(jié)果均符合規(guī)定，但個(gè)別廠家的檢測結(jié)果中綠原酸的含量卻低于規(guī)定量。本研究認(rèn)為該種藥物需增加金銀花藥材成分的含量測定，從而更有效地控制該種藥品的生產(chǎn)工藝，保證藥物療效。

4.3 檢測波長的確定 對維生素C、對乙酰氨基酚和馬來酸氯苯那敏進(jìn)行紫外掃描，在200～400 nm范圍內(nèi)掃描，維生素C、對乙酰氨基酚和馬來酸氯苯那敏的最大吸收波長分別為245、249和260 nm。馬來酸氯苯那敏在該制劑處方中所占含量較少，因此選擇260 nm作為三種成分的共同檢測波長，在此檢測波長下，維生素C和對乙酰氨基酚也具有較大吸收，檢測靈敏度足以達(dá)到分析要求[7]。

5 結(jié)論

研究結(jié)果表明不同企業(yè)生產(chǎn)維C銀翹片質(zhì)量有差異，主要因?yàn)樯a(chǎn)工藝和生產(chǎn)原料的不同，為確保藥品的臨床療效和安全，不同廠家應(yīng)嚴(yán)格把關(guān)原料的質(zhì)量和穩(wěn)定、規(guī)范的生產(chǎn)工藝。本研究所建立的HPLC法測定維C銀翹片指標(biāo)成分含量，方法簡單、快速，通過主成分分析和聚類分析評價(jià)不同生產(chǎn)企業(yè)樣品質(zhì)量，為維C銀翹片的質(zhì)量評價(jià)提供了客觀數(shù)據(jù)和參考方法。