鞏慧榮，冀 祥，盧小寧，胡琦杭，邵俊紅，白俊艷*，王 亮，趙鄭歌，王興科，簡晨晨

（1.河南科技大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，河南 洛陽 471023；2.河南省汝州市動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所，河南 汝州 467500）

催乳素受體（prolactinreceptor,PRLR）主要參與調(diào)控乳蛋白基因的表達(dá)，是一類重要的參與乳蛋白合成的基因[1]。國內(nèi)外研究顯示，PRLR基因的遺傳變異對(duì)泌乳量、乳脂率及乳蛋白率具有顯著影響,PRLR基因是家畜乳用性狀的重要候選基因,是影響母畜繁殖性能的主效基因之一。PRLR基因在哺乳動(dòng)物的乳腺、黃體、卵巢、睪丸、前列腺及肝臟等組織中表達(dá)，但是不同的動(dòng)物表達(dá)的主要組織器官并不一樣。催乳素(PRL)的生理作用是通過位于靶細(xì)胞膜上的催乳素受體 (PRLR)介導(dǎo)，從而對(duì)禽類就巢的研究轉(zhuǎn)向了對(duì)PRLR表達(dá)調(diào)控的研究，PRLR基因從此被認(rèn)為是與禽類繁殖相關(guān)的候選基因，禽類就巢的基因研究也就主要集中在PRLR受體基因上[2]。另有研究表明，PRLR基因可作為一個(gè)與畜禽繁殖和泌乳有關(guān)的重要候選基因，其基因變異對(duì)動(dòng)物產(chǎn)仔(蛋)數(shù)、初情期年齡、排卵數(shù)、生殖器官大小、卵巢重、子宮性狀和胚盤效率等性狀都會(huì)產(chǎn)生影響。本研究通過對(duì)PRLR基因的SNP突變位點(diǎn)檢測，研究PRLR基因在2個(gè)肉用鵪鶉群體中的多態(tài)性，為開發(fā)肉用鵪鶉分子遺傳標(biāo)記及推進(jìn)肉用鵪鶉高產(chǎn)新品系的培育提供基礎(chǔ)。

1 材料方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

實(shí)驗(yàn)用的鵪鶉包括法國巨型肉用鵪鶉和莎維麥脫肉用鵪鶉各50只。采用翅靜脈采血0.4～1 mL，裝于肝素鈉抗凝管中，充分混勻后置于-20℃冰箱中保存。采用家禽全血DNA試劑盒提取肉用鵪鶉血液樣品DNA，用0.5%瓊脂糖凝膠電泳檢測，置于-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 數(shù)據(jù)分析

利用PCR-RFLP技術(shù)和測序技術(shù)檢測PRLR基因在法國巨型肉用鵪鶉和莎維麥脫肉用鵪鶉群體中的多態(tài)性，統(tǒng)計(jì)不同鵪鶉群體PRLR基因的基因型頻率和基因頻率。

2 結(jié)果與分析

2.1 鵪鶉PRLR基因的PCR-RELP分析

從圖1可以看出，PRLR基因的PCR產(chǎn)物經(jīng)限制性內(nèi)切酶 Hpyl88I酶切后可產(chǎn)生 CC(294bp)、TT(191bp/103bp)和CT(294bp/191bp/103bp)3種基因型。

圖1 PRLR基因的酶切產(chǎn)物電泳檢測

2.2 鵪鶉PRLR基因的測序結(jié)果

通過對(duì)肉用鵪鶉的CT基因型個(gè)體PCR產(chǎn)物進(jìn)行直接測序，找到了限制性內(nèi)切酶Hpy188I的酶切位點(diǎn)，如圖2中的CT突變位點(diǎn)。

圖2 鵪鶉的PRLR基因測序結(jié)果

2.3 鵪鶉PRLR基因的基因型頻率和基因頻率

PRLR基因在肉用鵪鶉中的基因型頻率和等位基因頻率指標(biāo)如表1所示。從表1可以看出，在Hpy188I的酶切位點(diǎn)，法國巨型肉用鵪鶉CC基因型頻率最高為0.165，莎維麥脫肉用鵪鶉TT基因型頻率最高為0.742。在等位基因頻率中，法國巨型肉用鵪鶉C基因頻率為0.181，T基因頻率為0.819；莎維麥脫肉用鵪鶉C基因頻率為0.238，T基因頻率為0.762。

表1 PRLR基因的基因型頻率和基因頻率

3 討論

PRLR基因主要存在于哺乳動(dòng)物的組織和生殖器官中。目前，在動(dòng)物的腦、子宮、乳腺上皮組織、胚盤和卵巢等組織中已檢測到了催乳素受體。不同組織上的 PRLR與PRL（催乳素）共同作用發(fā)揮著不同功能。研究發(fā)現(xiàn)，PRLR基因?qū)?dòng)物的生長發(fā)育和繁殖有著較大影響。于茜[3]等研究發(fā)現(xiàn)，在馬PRLR 基因側(cè)翼區(qū)存在與泌乳量相關(guān)的2個(gè)SNPs，均存在3種基因型，即AA、AB和BB；Vincent等[4]對(duì)5個(gè)品系豬的PRLR 研究發(fā)現(xiàn)，其中3個(gè)品系的豬總產(chǎn)仔數(shù)和產(chǎn)活仔數(shù)與PRLR 基因顯著相關(guān)(P＜0.05)；VanRens等[5]研究發(fā)現(xiàn)，PRLR基因與豬的發(fā)情周期、排卵率和胚胎數(shù)具有一定的相關(guān)性；張陳華等[6]研究表明，PRLR基因的多態(tài)性對(duì)圩豬和定遠(yuǎn)豬的產(chǎn)仔數(shù)有一定影響；劉遠(yuǎn)等[7]研究表明，PRLR基因的優(yōu)勢基因型個(gè)體能夠顯著提高大白豬的窩產(chǎn)仔數(shù)；Tomas等[8]發(fā)現(xiàn)，PRLR基因外顯子突變能夠顯著影響豬的排卵率和仔豬存活率；Chu等[9]研究表明，PRLR 基因與羊的產(chǎn)羔數(shù)相關(guān)；Zhang等[10]在雞 PRLR基因上發(fā)現(xiàn) 6處SNPs；孫偉[11]在湖羊中研究出PRLR基因外顯子10部分序列存在多態(tài)性，而且其與湖羊母性行為部分性狀間存在一定的關(guān)聯(lián)性。大量研究表明，PRLR基因可作為一個(gè)與畜禽生長發(fā)育、繁殖及泌乳有關(guān)的重要候選基因，對(duì)動(dòng)物的生長發(fā)育和繁殖有一定影響。PRLR基因能否用于肉用鵪鶉生長發(fā)育和繁殖的分子標(biāo)記進(jìn)行分子輔助選擇還需要進(jìn)一步研究。