趙 聰，岳治光，黃 斌，陳 倩，張素梅，菅復春，張龍現(xiàn)，王榮軍，寧長申

(1.河南農(nóng)業(yè)大學 牧醫(yī)工程學院，河南 鄭州 450002； 2.河南安進生物技術(shù)股份有限公司，河南 鄭州 410105)

硬蜱是一種僅次于蚊子的第二大傳染病媒介生物，經(jīng)硬蜱傳播的病原微生物涵蓋病毒、螺旋體、立克次氏體、細菌、原蟲等，因蜱傳病給畜牧業(yè)造成的損失數(shù)以億計[1-3]。硬蜱及其病原體對家畜的侵害嚴重影響家畜健康，制約我國畜牧業(yè)的可持續(xù)發(fā)展。因此，尋找高效可靠的硬蜱防治手段顯得愈發(fā)重要。目前，生產(chǎn)中常采用一些毒殺類藥物應(yīng)對蜱害，如伊維菌素、雙甲脒、氯菊酯等[4-6]，這類藥物雖然可以有效殺滅已經(jīng)寄生于動物體表的硬蜱，但無法避免硬蜱對家畜的叮咬，病原微生物依舊可以傳播，而在醫(yī)學或獸醫(yī)臨床中采用驅(qū)避劑可以很好地解決這一問題。

驅(qū)蚊酯(C11H21NO3)又稱伊默寧、IR3535，是從氨基酸β-丙氨酸衍生的合成分子，于20世紀70年代初次合成，被廣泛應(yīng)用于驅(qū)蚊，對硬蜱同樣具有良好的驅(qū)避效果[7-10]。由于驅(qū)避劑多是由揮發(fā)油構(gòu)成，而且一般通過體外給藥，所以使用后有效成分揮發(fā)較快，導致持效時間較短，達不到理想的驅(qū)避效果[11-12]。為此，通過在驅(qū)蚊酯中加入相應(yīng)的緩釋成分，研制不同的配方，以期篩選出一種驅(qū)蚊酯長效驅(qū)避劑。

1 材料和方法

1.1 試驗材料

1.1.1 儀器 HHS-4S數(shù)顯恒溫水浴鍋(上海宜昌儀器廠)、JEA302電子天平(上海蒲春計量儀器有限公司)、KQ-100B超聲波清洗機(上海合金超聲設(shè)備有限公司)、GC-2011氣相色譜儀(上海宜逸醇科學儀器有限公司)、AuW120D分析天平(日本SHIMADZU儀器有限公司)、ZSD-2自動水分滴定儀(上海市安亭電子儀器廠)。

1.1.2 試劑 驅(qū)蚊酯原料購自廣州花之王化工有限公司；驅(qū)蚊酯標準品(97.7%)購自世紀奧科生物技術(shù)有限公司；鄰苯二甲酸二甲酯(99.7%)購自美國CATO RESERCH CHEMICALS INC；無水乙醇、α-吡咯烷酮、聚乙二醇-400(PEG-400)、乳化劑OP-10、羧甲基纖維素鈉(CMC-Na)、聚乙烯吡咯烷酮(PVP-K30)、丙酮等試劑均為分析純。

1.2 試驗方法

1.2.1 配方設(shè)計 依據(jù)驅(qū)蚊酯的理化性質(zhì)，擬定了4個配方進行篩選，選用無水乙醇為溶劑、α-吡咯烷酮為穩(wěn)定劑，以麥芽糊精、聚乙烯吡咯烷酮、羧甲基纖維素鈉為緩釋成分，聚乙二醇-400為黏附劑，設(shè)計成4個含驅(qū)蚊酯20%的驅(qū)避劑的原藥配方(表1)，并用水定容至100 mL。

表1 驅(qū)蚊酯驅(qū)避劑原藥配方

1.2.2 配方的穩(wěn)定性試驗 將4個驅(qū)蚊酯含量為20%的配方樣品，每個分成3份，分別進行23 ℃室溫試驗、40 ℃高溫試驗、-10 ℃冷凍試驗，3 d后觀察各配方的色澤、澄清透明度、是否出現(xiàn)沉淀、分層等表觀性狀進行篩選。

1.2.3 驅(qū)蚊酯驅(qū)避劑中驅(qū)蚊酯含量測定 采用氣相色譜法測定樣品驅(qū)蚊酯含量，色譜柱：SE-54毛細管柱；進樣口溫度：230 ℃；檢測器溫度：250 ℃；柱室溫度：230 ℃；流量：2.4 mL/min；分流比：50∶1；載氣流量：300 mL/min;氫氣流量:20 mL/min；載氣：氮氣；進樣量：2 μL[13]。

1.2.3.1 標準曲線的繪制 稱取驅(qū)蚊酯標準品75 mg于50 mL容量瓶中，用丙酮定容制備成1.5 mg/mL的對照品儲備液；另稱取鄰苯二甲酸二甲酯(內(nèi)標物)50 mg，置于50 mL容量瓶中，丙酮定容，制得1 mg/mL的內(nèi)標溶液，4 ℃冰箱保存。分別移取對照品儲備液0.2、0.6、1、3、8 mL于10 mL容量瓶中，分別加入鄰苯二甲酸二甲酯內(nèi)標溶液1 mL,丙酮定容到10 mL，配制成驅(qū)蚊酯質(zhì)量濃度分別為30、90、150、450、1 200 μg/mL的對照品溶液。并在1.2.3中色譜條件下進樣測定，以對照品和內(nèi)標物的峰面積比(A/Ai)為縱坐標、質(zhì)量濃度比(C/Ci)為橫坐標繪制標準曲線。

1.2.3.2 精密度的測定 取驅(qū)蚊酯含量為20%的3個批次的供試品溶液，在1.2.3.1條件下分別進樣2 μL，分別于1、3、5 d測定驅(qū)蚊酯含量，每天測定5次，計算日內(nèi)和日間精密度。

1.2.3.3 回收率的測定 將3個批次的驅(qū)蚊酯驅(qū)避劑樣品稀釋為1.5 mg/mL驅(qū)蚊酯供試品溶液，吸取1 mL于10 mL容量瓶中，分別加入1、1.5 mL的對照品儲備液以及1 mL內(nèi)標物溶液，配制成理論質(zhì)量濃度分別為300、375 μg/mL的驅(qū)蚊酯溶液，最后丙酮定容至10 mL，進樣測定，根據(jù)線性方程計算回收率。

1.2.4 驅(qū)避劑中驅(qū)蚊酯含量測定 配制3個批次的20%驅(qū)蚊酯長效驅(qū)避劑樣品，分別測定其驅(qū)蚊酯的含量，記錄不同批次的含量。

2 結(jié)果與分析

2.1 驅(qū)避劑配方樣品穩(wěn)定性試驗結(jié)果

以不同成分按一定比例制備的4個驅(qū)蚊酯驅(qū)避劑在不同條件下的穩(wěn)定性試驗結(jié)果表明(表2) ，配方1在各個處理條件下均未出現(xiàn)沉淀、變色、分層，溶液澄清透明且在不同溫度條件下比較穩(wěn)定。而配方3、4在常溫處理條件下出現(xiàn)了沉淀分層現(xiàn)象，表明這2個配方穩(wěn)定性比較差，不符合要求；配方2制劑性狀比較黏稠，且在冷凍處理后性狀變?yōu)槟z狀，而非液體，穩(wěn)定性同樣不符合要求，予以剔除。保留配方1進行下一步的試驗。

表2 不同處理條件下不同配方驅(qū)蚊酯驅(qū)避劑穩(wěn)定性試驗結(jié)果

2.2 驅(qū)避劑中驅(qū)蚊酯含量測定

2.2.1 標準曲線 從圖1可以看出，驅(qū)蚊酯在30～1 200 μg/mL時呈良好的線性關(guān)系，驅(qū)蚊酯標準曲線的回歸方程為y=0.892 7x-0.168 9，R2=0.998 3。

2.2.2 精密度測定結(jié)果 配方1中3個批次的日內(nèi)精密度在0.21%～0.83%，平均日內(nèi)精密度0.59%，日間精密度在0.24%～0.86%，平均日間精密度為0.49%(表3)。

圖1 驅(qū)蚊酯標準曲線

表3 驅(qū)蚊酯驅(qū)避劑精密度測定結(jié)果

2.2.3 回收率測定結(jié)果 經(jīng)測定，配方1中3個批次的驅(qū)蚊酯驅(qū)避劑的加標回收率在94.7%～102.7%，平均回收率為97.4%(表4)。

表4 驅(qū)蚊酯驅(qū)避劑回收率測定結(jié)果

續(xù)表4 驅(qū)蚊酯驅(qū)避劑回收率測定結(jié)果

2.2.4 驅(qū)蚊酯含量測定結(jié)果 經(jīng)測定，3個批次制備的驅(qū)蚊酯長效驅(qū)避劑中，所有樣品的驅(qū)蚊酯含量均在標示量(20%)的98.1%～103.8%(表5)。

表5 不同批次驅(qū)蚊酯驅(qū)避劑樣品的驅(qū)蚊酯含量測定結(jié)果

3 結(jié)論與討論

目前應(yīng)用于驅(qū)避劑的緩釋技術(shù)主要包括高分子聚合物、微膠囊、脂質(zhì)體、水凝膠乳劑、緩釋乳膏等[14-15]。微膠囊具有良好的緩釋效果，但缺點是其制備工藝較復雜，成本高；水凝膠乳劑、緩釋乳膏受制于其劑型，在獸醫(yī)臨床難以大面積使用；高分子聚合物具有制備簡單、穩(wěn)定性好等優(yōu)點在驅(qū)避劑的應(yīng)用中愈加廣泛。史衛(wèi)國等[16]利用高分子聚合物將避蚊胺和氯菊酯制備成一種PD型驅(qū)避劑，其有效驅(qū)蚊時間長達8 h，明顯優(yōu)于市售驅(qū)避劑的1～4 h。任清明等[17]使用天然高分子材料殼聚糖與避蚊胺進行復配所制得的乳劑，其室內(nèi)保護時間可達8～10 h，明顯延長了其保護時間。萬曉璐等[18]分別采用PVPP-Ⅰ、PVPP-Ⅱ、PVPP-Ⅲ、PVP-Ⅰ、PVP-Ⅱ與避蚊胺進行配伍制備成5種長效驅(qū)避劑，在11 h后的保護率分別為82.43%、97.09%、100%、92.32%和100%，同時3種避蚊胺普通制劑和2種市售驅(qū)避劑在11 h后的保護率均不足55%，顯示出高分子聚合物良好的緩釋效果。

選用驅(qū)蚊酯為有效驅(qū)避成分，采用高分子聚合物PVP-K30作為驅(qū)蚊酯的緩釋成分，溶劑揮發(fā)后緩釋物質(zhì)交聯(lián)成網(wǎng)，進而減慢驅(qū)蚊酯的釋放[19]；加入α-吡咯烷酮可以一定程度上降低有效成分的水解和降解，使制劑配方更加穩(wěn)定[20]；選用PEG-400為增黏劑可以使藥液具有一定黏性，使得驅(qū)避劑使用時有效成分可以更好地附著在家畜被毛，進而發(fā)揮驅(qū)蜱作用，同時也避免了藥物與皮膚直接接觸因刺激作用所引起家畜的過敏現(xiàn)象。本研究所制備的驅(qū)蚊酯長效驅(qū)避劑具有配方及工藝簡單、成本低廉的優(yōu)點，可為獸醫(yī)臨床防控硬蜱提供一種新的技術(shù)手段。