寧楠楠，劉 俏，咸文榮，馬永強*，郭青云*

(1.青海大學農(nóng)林科學院，青海 西寧 810016；2.青海省農(nóng)業(yè)有害生物綜合治理重點實驗室，青海 西寧 810016；3.農(nóng)業(yè)農(nóng)村部西寧作物有害生物科學觀測實驗站，青海 西寧 810016)

馬鈴薯是世界第四大作物，兼具較好營養(yǎng)價值和藥用價值，享有“地下蘋果”的美譽[1]。目前，中國馬鈴薯的產(chǎn)量穩(wěn)居世界首位，且其栽培面積占世界馬鈴薯種植總面積的25%[2]。據(jù)報道，馬鈴薯病害逐年加重，嚴重影響馬鈴薯的產(chǎn)量和質(zhì)量，其中由鐮刀菌(Fusariumsp.)引起的干腐病更是制約馬鈴薯產(chǎn)業(yè)穩(wěn)步發(fā)展的頭號大敵，常造成6%～25%的減產(chǎn)，嚴重時減產(chǎn)60%以上[3-4]。

馬鈴薯干腐病是一種世界性土傳病害，對全球馬鈴薯產(chǎn)業(yè)造成巨大危害，且防治較困難。對馬鈴薯干腐病的研究早在20世紀初就有報道，但不同國家和地區(qū)對引起馬鈴薯干腐病的20多個鐮刀菌種或變種及其優(yōu)勢病原菌的報道有所不同[5-6]。2006年，Esfahani[7]報道了伊朗馬鈴薯干腐病是由4種鐮刀菌引起的，其中硫色鐮刀菌(F.sulphureum)和茄病鐮刀菌(F.solani)為優(yōu)勢致病菌。Barasubiye等[8]于2008年報道了病原菌禾谷鐮刀菌(F.graminearum)可侵染加拿大馬鈴薯并引發(fā)干腐病。2011年，Sagar等[9]報道了病原菌接骨木鐮刀菌(F.sambucinum)可引起印度馬鈴薯干腐病。我國學者魏巍等[10]于2013年報道了4種病原菌可引起河北和內(nèi)蒙古兩省馬鈴薯干腐病，其共同優(yōu)勢種群為接骨木鐮刀菌。另一方面，關(guān)于馬鈴薯干腐病的防治研究報道也越來越多，2009年，Recep等[11]利用生物防治手段對尖孢鐮刀菌和黃色鐮刀菌(F.culmorum)的拮抗菌進行篩選研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在8種生防菌中洋蔥伯克霍爾德氏菌(Burkholderiacepacia)的抑制效果最強，對儲藏馬鈴薯干腐病的發(fā)生具有很大防治潛力。Yan 等[12]于2010年報道了利用β-氨基丁酸處理薯塊可提高多種酶的活性，從而誘導(dǎo)馬鈴薯塊莖對干腐病產(chǎn)生抗性。此外，王麗麗等[13]選用8種化學藥劑對烏昌地區(qū)馬鈴薯干腐病菌銳頂鐮刀菌(F.acuminaturn)和黃色鐮刀進行室內(nèi)毒力測定，結(jié)果表明，32.5%苯醚甲環(huán)唑·嘧菌酯和72%霜脲·錳鋅抑菌效果較強，EC50平均值范圍為70.604～76.812 mg/L。刁琢[14]在馬鈴薯收獲后使用3種殺菌劑噴施薯塊，結(jié)果表明25%嘧菌酯懸浮劑500倍液對馬鈴薯干腐病的防控效果最好。此外，寡雄蛋白、檸檬酸和硅酸鈉等非農(nóng)藥類化學物質(zhì)，對馬鈴薯干腐病也具有一定的防控效果[15-17]。

本研究針對青海省馬鈴薯干腐病危害嚴重的病原菌三線鐮刀菌、尖孢鐮刀菌和木賊鐮刀菌，選用5種化學藥劑對其進行室內(nèi)毒力測定，旨在為青海省馬鈴薯干腐病的防控提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

供試菌株：馬鈴薯干腐病病原菌三線鐮刀菌、尖孢鐮刀菌和木賊鐮刀菌，由青海省農(nóng)業(yè)有害生物綜合治理重點實驗室提供。

培養(yǎng)基：馬鈴薯葡萄糖瓊脂(PDA)培養(yǎng)基。

供試藥劑：本試驗所用的藥劑種類、生產(chǎn)廠家及稀釋倍數(shù)見表1。

表1供試藥劑及其稀釋倍數(shù)Tab.1 Different fungicides and their dilution multiples

1.2 試驗方法

1.2.1 制備含藥培養(yǎng)基

在無菌操作臺內(nèi)配制表1所示不同濃度的含藥培養(yǎng)基，以不加藥劑的PDA平板作試驗對照，每處理重復(fù)5次并加入少量鏈霉素，防止細菌污染[18]。

1.2.2 不同藥劑對供試菌株菌絲生長的毒力測定

(1)藥劑抑菌試驗。采用菌絲生長抑制率法[19]，將供試菌落菌餅接種在不同含藥培養(yǎng)基的中間。25 ℃黑暗培養(yǎng)7 d后，采用十字交叉法測量菌落直徑，計算菌絲生長抑制率。抑菌率計算公式如下：

抑菌率=(對照菌落直徑-處理菌落直徑)÷(對照菌落直徑-菌餅直徑)× 100%

(2)藥劑毒力測定。按照藥劑抑菌試驗所述方法，對抑制作用較強的藥劑進行進一步的藥劑毒力測定。將各個藥劑各濃度梯度下菌落生長的抑菌率的值換算成抑制幾率值，作為因變量(y)，藥劑濃度的自然對數(shù)值作為自變量(x)，利用最小二乘法建立“濃度對數(shù)-幾率值”直線方程[20]。用Excel 和DPS軟件求出相關(guān)系數(shù)(r)、抑制中濃度(EC50)及毒力回歸方程(y=ax+b)，以比較不同藥劑對病原菌的毒力效果。

2 結(jié)果與分析

2.1 5種殺菌劑對3種馬鈴薯干腐病菌的抑制作用

由表2可知，隨著供試殺菌劑稀釋倍數(shù)的增高，抑菌率降低。對三線鐮刀菌，50%硫磺·多菌靈和60%唑醚·代森聯(lián)稀釋 500倍時抑制率分別為91.66%和89.10%，稀釋1 000～1 500倍時抑制率分別為84.43%～78.56%和87.66%～85.70%，抑制效果最好；80%多菌靈和60 g/L戊唑醇稀釋500倍時抑制率分別為85.50%和82.96%，抑制效果較好；而80%代森錳鋅稀釋400倍時抑制率僅為34.15%，稀釋800～3 200倍時抑制率為28.98%～18.99%，抑制效果差。對尖孢鐮刀菌，60 g/L戊唑醇、80%多菌靈稀釋500倍時，抑制效果最好，抑制率分別為88.52%和87.28%；50%硫磺·多菌靈、60%唑醚·代森聯(lián)稀釋500倍時抑制率分別為86.33%和86.02%，稀釋1 000～1 500倍時抑制率分別83.27%～77.35%和82.13%～80.60%，效果較好；80%代森錳鋅稀釋200～400倍時抑制率為73.99%～73.24%，稀釋800～3 200倍時抑制率為66.94%～51.52%，抑制效果較差。對木賊鐮刀菌，60%唑醚·代森聯(lián)和 60 g/L戊唑醇稀釋500倍時抑制率分別為89.36%和89.29%,稀釋1 000～1 500倍時抑制率為 82.80%～80.40%和87.28%～85.19%，抑制效果最好；50%硫磺·多菌靈稀釋500～1 500倍時抑制率為86.96%～82.66%，抑制效果也較好；80%代森錳鋅稀釋200～400倍時抑制率為77.70%～75.50%，稀釋800～3 200倍時抑制率為67.60%～60.10%，抑制效果較差。以上結(jié)果表明，在相同稀釋倍數(shù)下，50%硫磺·多菌靈、60%唑醚·代森聯(lián)和 60 g/L戊醇唑?qū)?種病原菌均表現(xiàn)較好的抑制作用。

表2不同稀釋倍數(shù)的殺菌劑對3種病原菌防效測定Tab.2 Control effects of different dilution muitiple of fungicides to 3 kinds of pathogens

2.2 有效藥劑毒力測定

根據(jù)上述藥劑對病原菌抑制活性測定的試驗結(jié)果，對抑菌效果表現(xiàn)較好的 50%硫磺·多菌靈、60%唑醚·代森聯(lián)和 60 g/L戊唑醇進行毒力測定分析。結(jié)果表明，不同種類的干腐病菌對不同殺菌劑的敏感性不同，不同殺菌劑對不同病原菌的毒力作用不同。

表3為3種殺菌劑對三線鐮刀菌的室內(nèi)毒力測定。由表可知，對三線鐮刀菌，60 g/L戊唑醇和 60%唑醚·代森聯(lián)的毒力最強，EC50分別為5.01 mg/L和7.24 mg/L。50%硫磺·多菌靈對三線鐮刀菌的毒力較弱，EC50為107.15 mg/L。

表3 3種殺菌劑對三線鐮刀菌的室內(nèi)毒力測定Tab.3 Indoor virulence test of 3 kinds of fungicides against F.tricinctum

表4為3種殺菌劑對尖孢鐮刀菌的室內(nèi)毒力測定。 由表可知，對尖孢鐮刀菌，60 g/L戊唑醇的毒力最強，EC50為5.75 mg/L，50%硫磺·多菌靈和 60%唑醚·代森聯(lián)的毒力次之，EC50分別為50.11 mg/L和53.70 mg/L。

表4 3種殺菌劑對尖孢鐮刀菌的室內(nèi)毒力測定Tab.4 Indoor virulence test of 3 kinds of fungicides against F.oxysporum

表5為3種殺菌劑對木賊鐮刀菌的室內(nèi)毒力測定。由表可知，對木賊鐮刀菌，60 g/L戊唑醇的毒力最強，EC50為2.40 mg/L。其次是50%硫磺·多菌靈和60%唑醚·代森聯(lián)，EC50分別為28.84 mg/L和66.07 mg/L。

表5 3種殺菌劑對木賊鐮刀菌的室內(nèi)毒力測定Tab.5 Indoor virulence test of 3 kinds of fungicides against F.equiseti

綜上分析，在3種供試藥劑中，以60 g/L戊唑醇對三線鐮刀菌、尖孢鐮刀菌和木賊鐮刀菌的毒力最強，EC50分別為5.01、5.75、2.40 mg/L。且在稀釋500～1 000倍時，對三線鐮刀菌、尖孢鐮刀菌和木賊鐮刀菌的抑制效果較高，抑制率分別為82.96%～79.35%、88.52%～81.90%和89.29%～87.25%。

3 討論與結(jié)論

本研究選用5種常用殺菌劑對3種馬鈴薯主要干腐病致病菌進行抑菌率和室內(nèi)毒力測定，結(jié)果表明，60 g/L 戊唑醇對3種馬鈴薯干腐病菌的毒力作用均明顯優(yōu)于其他藥劑，且抑菌效果較好。50%硫磺·多菌靈和 60%唑醚·代森聯(lián)的毒力作用次之，抑菌率一般。80%代森錳鋅對3種病菌的毒力作用均較低，抑菌效果較差，這與吳金花[26]對山西省馬鈴薯干腐病菌室內(nèi)藥劑篩選結(jié)果一致。

本研究中表現(xiàn)最好的藥劑是60 g/L戊唑醇，戊唑醇作為三哇類殺菌劑，活性高，持效期長，能有效抑制真菌中麥角幽醇的生物合成，對多種作物的病原菌均有較好的抑制作用，可用于防治多種真菌病害[21]。孫清華等[22]測定了噻菌靈、戊唑醇和咯菌腈3種殺菌劑在不同施用濃度下對馬鈴薯干腐病的防治效果，結(jié)果表明，噴施112 mL/t戊唑醇能夠有效控制病害發(fā)生。白劍宇等[23]評價了吡唑醚菌酯、丙環(huán)唑和戊唑醇3種殺菌劑對榛子苗期根腐病的防效，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，戊唑醇對榛子苗期根腐病菌具有明顯的抑菌效果，EC50為0.074 7 mg/L，當有效劑量為50 mg/L時，施藥30 d后田間防效高達90.94%，抑制效果顯著。此外，戊唑醇還可以與其他藥劑混配進行各種病害的防治，如黃瓜白粉病可用11%戊唑醇·環(huán)氟菌胺懸浮劑進行防治，水稻紋枯病可用40%嘧菌酯·戊唑醇進行防治，火龍果褐腐病可用原藥95%戊唑醇和99%咯菌腈質(zhì)量比為8∶2的復(fù)配藥劑進行防治[24-26]。

本研究評價了5種殺菌劑對3種馬鈴薯干腐病菌的毒力效果，篩選出的60 g/L戊唑醇對三線鐮刀菌、尖孢鐮刀菌和木賊鐮刀菌的毒力效果明顯優(yōu)于其他藥劑，EC50分別為5.01、5.75、2.40 mg/L，且在稀釋500～1 000倍時的抑制效果較高。由此可知，60 g/L戊唑醇稀釋500～1 000倍對馬鈴薯干腐病菌具有較強的抑制作用，對選擇馬鈴薯干腐病防治藥劑具有一定的參考價值。