陳奕穎 陳宋欽 陳華宏

1.廣東省揭陽市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣東揭陽 522000；2.廣東省揭陽市人民醫(yī)院病理科，廣東揭陽 522000

肺炎支原體（mycoplasma pneumonia，MP）不同于普通的細(xì)菌和病毒，其是目前已知的能獨(dú)立生活的最小微生物，是中國兒童社區(qū)獲得性肺炎（Community-acquired pneumonia，CAP）的重要病原之一[1]。MP主要通過呼吸道傳播，在人群聚集地可出現(xiàn)暴發(fā)流行。兒童感染MP后，除出現(xiàn)呼吸道癥狀外，還可導(dǎo)致心肌炎、腦炎、腎炎等多種肺外并發(fā)癥以及肺壞死[2]，嚴(yán)重影響兒童健康。近年來，MP感染率明顯上升[3]，且文獻(xiàn)報(bào)道不同地區(qū)MP感染流行病學(xué)特征存在顯著差異[4]，而揭陽地區(qū)兒童MP的感染情況未見文獻(xiàn)報(bào)道。本研究通過對2873例呼吸道感染患兒的MP-RNA檢測結(jié)果進(jìn)行回顧性分析，探討分析揭陽地區(qū)兒童MP的感染情況及流行病學(xué)特點(diǎn)，為臨床診治MP感染提供參考依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2018年7月至2019年6月揭陽市人民醫(yī)院收治的呼吸道感染兒童2873例為研究對象。納入標(biāo)準(zhǔn)：①年齡0～14歲；②以發(fā)熱、咳嗽等呼吸道癥狀為首發(fā)癥狀；③均符合《諸福棠實(shí)用兒科學(xué)（8版）》[5]中關(guān)于小兒呼吸道感染疾病的相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)。按患兒發(fā)育不同階段將其分為：嬰兒組（＜1歲，1070例）、幼兒組（1～＜3歲，896例）、學(xué)齡前組（3～＜6歲，607例）、學(xué)齡組（6～14歲，300例）。

1.2 儀器與試劑

廈門天中達(dá)生物科技有限公司生產(chǎn)的化學(xué)發(fā)光檢測儀TZD-CL-200S，杭州奧盛儀器有限公司生產(chǎn)的迷你金屬浴，以及武漢中幟生物科技股份有限公司生產(chǎn)的肺炎支原體/肺炎衣原體核酸檢測試劑盒（雙擴(kuò)增法）。

1.3 檢測方法

所有患兒于入院24 h內(nèi)無菌采集咽試子標(biāo)本（或肺泡灌洗液），置于保存液中立即送檢。向標(biāo)本中加入20 μl細(xì)胞裂解液，旋渦震蕩30 s，室溫裂解15 min；往17 μl擴(kuò)增反應(yīng)液中加入2 μl裂解后的樣本，然后進(jìn)行T7核酸擴(kuò)增和多生物素信號(hào)放大的相關(guān)操作。根據(jù)待測樣本與陰性質(zhì)控物的相對光單位比值R進(jìn)行結(jié)果判讀：比值R＞1.0判斷為陽性，比值R≤1.0判斷為陰性。所有操作過程均嚴(yán)格按照試劑盒說明書且保證質(zhì)控在控的情況下進(jìn)行。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

應(yīng)用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對本研究數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)量資料以（x±s）表示，符合正態(tài)分布的多組間資料比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)，不符合正態(tài)分布的資料采用獨(dú)立樣本的秩和檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料以[n（%）]表示，采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 MP感染總體情況

2873例呼吸道感染患兒中，檢出MP感染患兒186例，總感染陽性率為6.47%。

2.2 不同性別患兒MP感染情況比較

2873例患兒中共檢測男性患兒1804例，陽性116例，陽性率為6.43%；檢測女性患兒1069例，陽性70例，陽性率為6.55%。不同性別的患兒間MP檢出率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=0.015，P＞0.05）。

2.3 不同年齡患兒MP感染情況比較

6～14歲學(xué)齡組患兒MP檢出率最高，其次是學(xué)齡前組；且隨著年齡的增長，MP檢出率呈增高趨勢；各年齡組間MP檢出率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=152.372，P＜0.01）。見表1。

表1 不同年齡患兒MP感染陽性比較

2.4 不同季節(jié)患兒MP感染情況比較

根據(jù)廣東地區(qū)的季節(jié)特點(diǎn)，按陽歷月份將各季節(jié)劃分如下：春季（3～5月）；夏季（6～8月）；秋季（9～11月）；冬季（12月至次年2月）。春季的MP檢出率最高，其次是夏季；春夏季間患兒MP檢出率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=0.074，P＞0.05）；秋冬季間患兒MP檢出率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=0.003，P＞0.05）；夏秋季間患兒MP檢出率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=6.049，P＜0.05）；而春秋季、春冬季、夏冬季間患兒的MP檢出率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=8.133，P＜0.01；χ2=10.429，P＜0.01；χ2=7.583，P＜0.01）。見表2。

表2 不同季節(jié)患兒MP-RNA檢測結(jié)果

3 討論

肺炎支原體是人類支原體肺炎的病原體，鑒于MP無細(xì)胞壁的特殊結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，大環(huán)內(nèi)酯類抗生素已成為治療兒童MP感染的首選藥物，但近年研究發(fā)現(xiàn)，MP對大環(huán)內(nèi)酯類藥物的耐藥情況日益嚴(yán)重，難治性MP肺炎的病例也逐年增加。而如何快速地診斷和治療MP感染是防止MP耐藥和暴發(fā)流行的關(guān)鍵。血清學(xué)特異性抗體檢測（MP-Ab）是目前臨床上最常用的檢測方法，但也存在諸多的影響因素，如疾病病程、個(gè)體免疫狀態(tài)差異等[6]。PCR技術(shù)的應(yīng)用，與傳統(tǒng)的血清學(xué)方法相比，敏感性、特異性和準(zhǔn)確性更高，且不受患兒免疫狀態(tài)的影響，有利于MP感染的早期診斷[7]。但MP-DNA的檢測與MP的存活狀態(tài)無關(guān)，陽性結(jié)果無法提示是否是現(xiàn)癥感染。本研究所采用的雙擴(kuò)增技術(shù)，以RNA恒溫?cái)U(kuò)增法為基礎(chǔ)，將T7核酸擴(kuò)增和多生物素信號(hào)放大技術(shù)相結(jié)合，對樣本中MP的RNA進(jìn)行檢測，是一種全新的核酸檢測技術(shù)。RNA僅存在于活菌中，MP死亡后RNA快速降解，因此采用此方法進(jìn)行MP的檢測，如果陽性提示MP近期感染，而不是既往感染[8-9]。該方法具有更高的敏感性和特異性，且所需時(shí)間短，是目前能夠比較準(zhǔn)確地反應(yīng)MP感染狀態(tài)的檢測方法。

最近幾年各地呼吸道感染兒童MP檢出率各不相同且差異大[10-11]，但以此次揭陽地區(qū)的MP檢出率最低，可能與標(biāo)本取材、標(biāo)本類型、取樣時(shí)間、檢測方法和選擇的檢測對象有關(guān)。MP感染是否存在性別差異，到目前為止尚無統(tǒng)一說法。各地區(qū)不同性別間兒童MP檢出率各不相同，本研究顯示，男性患兒MP感染率為6.43%，女性患兒MP感染率為6.55%，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。MP感染可發(fā)生于兒童各年齡段，國內(nèi)外報(bào)道均顯示，MP感染發(fā)病的高峰期為學(xué)齡前期和學(xué)齡期兒童[12-13]，本研究結(jié)果顯示，揭陽地區(qū)學(xué)齡組呼吸道感染兒童MP檢出率明顯高于其他年齡組，其次是學(xué)齡前組；且MP檢出率隨著年齡的增長呈增高趨勢；各年齡組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；此結(jié)論與上述文獻(xiàn)報(bào)道一致。學(xué)校群體的生活環(huán)境和免疫力低下是導(dǎo)致學(xué)齡組、學(xué)齡前組兒童MP感染高發(fā)的主要原因。在季節(jié)分布方面，MP感染全年均有散發(fā)，由于地域的不同，流行季節(jié)也可能存在差異[14]。本研究結(jié)果顯示，春季呼吸道感染兒童MP的檢出率最高，其次是夏季，與其他文獻(xiàn)的報(bào)道不太一致[15-16]。由于該項(xiàng)目開展時(shí)間不長，現(xiàn)有的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)只能說明春季是本年份MP感染的高發(fā)季節(jié)。至于流行季節(jié)的統(tǒng)計(jì)，筆者將會(huì)進(jìn)一步追蹤報(bào)道。

綜上所述，本研究分析了揭陽地區(qū)呼吸道感染兒童MP感染情況和流行現(xiàn)狀，對高危人群及高發(fā)季節(jié)常規(guī)進(jìn)行MP-RNA檢測，更早期地診斷MP感染，可有效避免MP感染的漏診、誤診，防止抗生素的濫用；對MP感染兒童采取必要的隔離措施，可有效地防止MP在學(xué)校等兒童聚集地的暴發(fā)流行。