彭 平，熊少哲，張 蓓，易劍平，杜 菁，楊 璇，范國(guó)強(qiáng)，顧海鷗，王志斌*

1.北京同仁堂科技發(fā)展股份有限公司制藥廠(chǎng)，北京 100079

2.中國(guó)北京同仁堂（集團(tuán)）有限責(zé)任公司，北京 100079

芩連制劑所涉及的中成藥有芩連片、芩連膠囊、芩連丸，其處方由黃芩、連翹、黃連、川黃柏、赤芍、甘草6 味藥味組成，具有清熱解毒、消腫止痛的功效，其中芩連片收載于《中國(guó)藥典》2020年版，3 個(gè)劑型的芩連藥物處方制法均為黃芩、連翹、川黃柏、甘草合并提取，黃連、赤芍粉碎，混合后經(jīng)不同制劑工藝而得。

現(xiàn)有中成藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中，對(duì)其原料的質(zhì)量控制包括黃連、赤芍藥味的顯微鑒別項(xiàng)，黃連、黃芩、赤芍藥味的薄層鑒別項(xiàng)，黃芩藥味的含量測(cè)定項(xiàng)。其中對(duì)黃連、川黃柏藥物的薄層鑒別項(xiàng)以鹽酸小檗堿為對(duì)照，缺失專(zhuān)屬性同時(shí)缺少對(duì)主要指標(biāo)成分的定量測(cè)定[1]；對(duì)連翹、甘草藥味缺少相應(yīng)的質(zhì)量控制方法。有文獻(xiàn)報(bào)道采用RP-HPLC 等色譜方法建立了芩連片中黃芩苷、鹽酸小檗堿、芍藥苷、甘草苷、連翹苷等指標(biāo)性成分的含量測(cè)定方法，進(jìn)一步完善了芩連片復(fù)方藥物的質(zhì)量控制[2-6]，但研究發(fā)現(xiàn)不同芩連制劑中指標(biāo)性成分含量差異較大，普通液相色譜法受限于最低檢測(cè)限和測(cè)定回收率范圍，難以實(shí)現(xiàn)對(duì)芩連制劑整體質(zhì)量表征的廣泛測(cè)定；且現(xiàn)有研究方法對(duì)組方藥物質(zhì)量的控制還有遺漏，不能有效控制川黃柏、赤芍藥味的特征性質(zhì)量。

經(jīng)過(guò)對(duì)芩連制劑處方藥味原料質(zhì)量研究的相關(guān)文獻(xiàn)分析發(fā)現(xiàn)，赤芍、川赤芍及其易混品白芍藥材質(zhì)量差異成分包括芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷、1,2,3,4,6-五-O-倍酰-D-葡萄糖（PGG）[7-10]，黃連和川黃柏及關(guān)黃柏質(zhì)量差異成分是鹽酸黃柏堿、鹽酸巴馬汀[11-13]，綜合連翹、黃芩、甘草藥材的《中國(guó)藥典》指標(biāo)性成分連翹苷、連翹酯苷A、甘草苷、甘草酸、黃芩苷、漢黃芩苷以及鹽酸小檗堿，共計(jì)12 個(gè)指標(biāo)性成分含量是芩連片質(zhì)量評(píng)價(jià)的主要指標(biāo)[14-19]。因此，本實(shí)驗(yàn)將采用分離效能和靈敏度均較高的UPLC-PDA 色譜法[20]，以芩連片為研究載體，建立其特征圖譜質(zhì)量表征方法，同時(shí)測(cè)定芩連片中12個(gè)指標(biāo)成分的含量，并應(yīng)用于該類(lèi)中成藥的質(zhì)量評(píng)價(jià)之中，為其質(zhì)量表征與控制提供方法支持。

1 儀器與材料

1.1 儀器

Waters Acquity HClass 超高效液相色譜儀，包括四元溶劑管理器，PAD 檢測(cè)器，在線(xiàn)溫度控制器，樣品管理器，Empower 工作站，美國(guó)Waters 公司；KQ-250 DE 型數(shù)控超聲波清洗機(jī)，昆山超聲儀器有限公司；Mettler ML 204 型電子分析天平、Mettler XP 205 型電子分析天平，瑞士梅特勒-托利集團(tuán)；0.22 μm 微孔濾膜，天津津騰實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司。

1.2 材料

試藥：乙腈，默克公司，色譜純；甲酸，分析純，天津光復(fù)精細(xì)化工研究所；乙酸銨，分析純，南開(kāi)大學(xué)精細(xì)化學(xué)實(shí)驗(yàn)廠(chǎng)；超純水，Milli-Q 超純水儀制備。

對(duì)照品：鹽酸小檗堿（質(zhì)量分?jǐn)?shù)86.7%，批號(hào)110713-201814）、鹽酸巴馬?。ㄙ|(zhì)量分?jǐn)?shù)86.8%，批號(hào)110732-201611）、鹽酸黃柏堿（質(zhì)量分?jǐn)?shù)95.8%，批號(hào)111895-201303）、黃芩苷（質(zhì)量分?jǐn)?shù)93.3%，批號(hào)110715-201318）、漢黃芩苷（質(zhì)量分?jǐn)?shù)98.5%，批號(hào)112002-201702）、甘草酸按（質(zhì)量分?jǐn)?shù)93.0%，批號(hào)110731-201619）、甘草苷（質(zhì)量分?jǐn)?shù)93.7%，批號(hào)111610-201106）、芍藥苷（質(zhì)量分?jǐn)?shù)95.1%，批號(hào)110736-201943）、連翹酯苷A（質(zhì)量分?jǐn)?shù)94.1%，批號(hào) 111810-201405）、鹽酸黃連堿（質(zhì)量分?jǐn)?shù)95.1%，批號(hào)112026-201601）均購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院；芍藥內(nèi)酯苷（質(zhì)量分?jǐn)?shù)≥98%，批號(hào)YZ3O10H101115）、連翹苷（質(zhì)量分?jǐn)?shù)98%，批號(hào)Z17A8X34077）、表小檗堿（質(zhì)量分?jǐn)?shù)98%，批號(hào)W06M8Z30708）、連翹酯素（質(zhì)量分?jǐn)?shù)97%，批號(hào)YZ3O10H101115）、PGG（質(zhì)量分?jǐn)?shù)98%，批號(hào)P28M9F54631）購(gòu)自上海源葉生物科技有限公司。

研究用飲片：黃連Coptis chinensisFranch、黃柏Phellodendron chinenseSchneid（川黃柏）、連翹Forsythia suspensa(Thunb.) Vahl（青翹）、黃芩Scutellaria baicalensisGeorgi、甘草Glycyrrhiza uralensisFisch.、赤芍Paeonia lactifloraPall.均由北京同仁堂科技發(fā)展股份有限公司提供，由北京同仁堂科技發(fā)展股份有限公司工程師劉博譞鑒定，均符合《中國(guó)藥典》2020年版要求。

芩連制劑中成藥樣品：芩連片，北京同仁堂科技發(fā)展股份有限公司制藥廠(chǎng)（S1、S2）、牡丹江靈泰藥業(yè)股份有限公司（S3）、哈爾濱三木制藥廠(chǎng)（S4、S5）、山東孔府制藥有限公司（S6）；芩連膠囊，成都迪康藥業(yè)股份有限公司（S7、S8）、吉林敖東集團(tuán)力源制藥股份有限公司（S9、S10）；芩連丸，四川旭華制藥有限公司（S11）均為市場(chǎng)購(gòu)買(mǎi)，生產(chǎn)廠(chǎng)家分別編號(hào)M1～M7。

2 方法與結(jié)果

2.1 樣品處理方法

2.1.1 對(duì)照品溶液的制備 分別用70%甲醇配制供定量用的對(duì)照品溶液，取連翹酯苷A、鹽酸黃柏堿、芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷、甘草苷、黃芩苷、PGG、連翹苷、鹽酸小檗堿、巴馬汀、甘草酸、漢黃芩苷對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加70%甲醇制成含連翹酯苷A 20 μg/mL、鹽酸黃柏堿15 μg/mL、芍藥內(nèi)酯苷20μg/mL、芍藥苷350 μg/mL、甘草苷20 μg/mL、黃芩苷450 μg/mL、PGG 25 μg/mL、連翹苷20 μg/mL、鹽酸小檗堿250 μg/mL、巴馬汀30 μg/mL、甘草酸50 μg/mL、漢黃芩苷100 μg/mL 的混合對(duì)照品溶液，即得。

2.1.2 供試品溶液的制備 取裝量差異項(xiàng)下芩連制劑成品約10 g，磨成細(xì)粉，取約0.5 g，精密稱(chēng)定，置于具塞三角瓶中，精密加入70%甲醇25 mL，稱(chēng)定質(zhì)量，加熱回流處理90 min，放冷，用提取溶劑補(bǔ)足減失的質(zhì)量，用0.22 μm 微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。

2.2 芩連制劑特征圖譜質(zhì)量表征方法

2.2.1 色譜條件 色譜柱為Waters Cortecs T3 柱（100 mm×2.1 mm，1.6 μm）；柱溫30 ℃；流動(dòng)相乙腈（含0.02%甲酸，A）-（10 moL/L 乙酸銨-0.09%甲酸緩沖液，B），梯度洗脫：0～10 min，10%～12%A；10～11 min，12%～15% A；11～18 min，15%～16% A；18～32 min，16% A；32～35 min，16%～19% A；35～40 min，19%～21% A；40～45 min，21%～50% A；45～48 min，50%～90% A；48～52 min，90%A；52～55 min，90%～10% A；55～60 min，10% A；體積流量0.3 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)230 nm（連翹酯苷A 含量測(cè)定檢測(cè)波長(zhǎng)330 nm）；進(jìn)樣體積1 μL。

2.2.2 系統(tǒng)適用性 取對(duì)照品溶液和供試品溶液適量，在“2.2.1”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)圖1、2，結(jié)果表明，理論塔板數(shù)按黃芩苷峰計(jì)均大于30 000，12 個(gè)主要指標(biāo)性成分色譜峰的分離度均大于1.5，表明系統(tǒng)適用性符合相關(guān)測(cè)定要求。

2.2.3 特征峰指認(rèn) 分別取芩連制劑處方6 味藥物，采用已建立的樣品處理方法，在“2.2.1”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣測(cè)定，標(biāo)記了38 個(gè)含量較高且色譜分離效果穩(wěn)定的特征色譜峰，采用對(duì)照品標(biāo)記了其中15 個(gè)主要色譜峰化學(xué)結(jié)構(gòu)。其中包括黃連特征峰3個(gè)，黃柏特征峰1 個(gè)，黃連、黃柏同源特征峰6 個(gè)，赤芍特征峰7 個(gè)，連翹特征峰8 個(gè)，黃芩特征峰11個(gè)，甘草特征峰2 個(gè)。結(jié)果見(jiàn)表1。

圖1 芩連制劑樣品 (S1) 的全方特征指紋圖譜Fig.1 Whole prescription characteristic spectrum of Qinlian preparation sample (S1)

圖2 12 個(gè)指標(biāo)成分混合對(duì)照品溶液色譜圖Fig.2 Chromatograms of solutions of 12 index ingredients mixed control solution

2.2.4 指標(biāo)性成分含量測(cè)定專(zhuān)屬性考察 按照芩連制劑處方配比，分別配制芩連制劑缺黃芩、缺黃連和黃柏、缺黃柏、缺黃連、缺連翹、缺赤芍、缺甘草陰性樣品，按照芩連制劑供試品處理方法處理各芩連制劑陰性樣品溶液，在“2.2.1”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣測(cè)定，見(jiàn)圖3、4。在本色譜條件下，檢測(cè)波長(zhǎng)為230 nm 下赤芍中指標(biāo)性成分芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷、PGG 色譜峰處無(wú)明顯干擾，黃連中指標(biāo)性成分鹽酸巴馬汀色譜峰處無(wú)明顯干擾，黃柏中指標(biāo)性成分鹽酸黃柏堿色譜峰處無(wú)明顯干擾，黃柏和黃連中指標(biāo)性成分鹽酸小檗堿色譜峰處無(wú)明顯干擾，連翹中指標(biāo)性成分連翹苷色譜峰處無(wú)明顯干擾，甘草中指標(biāo)性成分甘草苷、甘草酸色譜峰處無(wú)明顯干擾，黃芩中指標(biāo)性成分黃芩苷、漢黃芩苷色譜峰處無(wú)明顯干擾；檢測(cè)波長(zhǎng)330 nm 下連翹中指標(biāo)性成分連翹酯苷A 色譜峰無(wú)明顯干擾。

表1 芩連制劑特征圖譜中38 個(gè)特征峰信息Table 1 Information of 38 characteristic peaks in characteristic map of Qinlian preparation

2.2.5 精密度考察 取同一芩連制劑供試品溶液，在“2.2.1”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣測(cè)定，連續(xù)進(jìn)樣6 針測(cè)定，記錄芩連制劑特征圖譜中38 個(gè)特征峰峰面積和保留時(shí)間，得芩連制劑供試品溶液特征圖譜中38個(gè)特征峰峰時(shí)間和峰面積的精密度結(jié)果，各色譜峰相對(duì)保留時(shí)間和峰面積RSD 值均小于3%，表明儀器精密度符合要求。

2.2.6 穩(wěn)定性考察 取同一芩連制劑供試品溶液，在“2.2.1”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣測(cè)定，分別于超聲處理后0、3、6、9、12、24 h 進(jìn)樣，記錄芩連制劑特征圖譜中38 個(gè)特征圖譜峰面積，得芩連制劑供試品溶液特征圖譜中38 個(gè)特征峰峰面積和相對(duì)保留時(shí)間的穩(wěn)定性結(jié)果，各色譜峰峰面積RSD 值均小于5%，表明方法穩(wěn)定性符合要求。

圖3 檢測(cè)波長(zhǎng)230 nm 下芩連制劑陰性樣品與混合對(duì)照品液相色譜圖對(duì)比圖Fig.3 Chromatograms of negative samples of Qinlian preparation under detection wavelength of 230 nm compared with those of mixed controls

圖4 檢測(cè)波長(zhǎng)330 nm 下芩連制劑陰性樣品與連翹酯苷A 對(duì)照品液相色譜圖對(duì)比圖Fig.4 Chromatograms comparison of negative sample of Qinlian preparation with forsythoside A standard under detection wavelength of 330 nm

2.2.7 線(xiàn)性關(guān)系考察 分別配制質(zhì)量濃度為連翹酯苷A 897.0 μg/mL、鹽酸黃柏堿804.7 μg/mL、芍藥內(nèi)酯苷576.6 μg/mL、芍藥苷739.9 μg/mL、甘草苷816.7 μg/mL、PGG 1 059.3 μg/mL、連翹苷982.4μg/mL、鹽酸小檗堿982.5 μg/mL、巴馬汀733.6μg/mL、甘草酸77.9 μg/mL、漢黃芩苷439.2 μg/mL的對(duì)照品溶液儲(chǔ)備液，分別取各對(duì)照品儲(chǔ)備液采用70%甲醇溶液稀釋2、2.5、5、10、20、50、100、200 倍進(jìn)樣，配制質(zhì)量濃度為287.1 μg/mL 黃芩苷對(duì)照品溶液分別進(jìn)樣0.2、0.6、0.8、1.0、1.4、1.8、2.2 μL，以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)（X），對(duì)照品峰面積為縱坐標(biāo)（Y），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。建立色譜峰峰面積對(duì)進(jìn)樣量的回歸方程（表2），結(jié)果表明，各指標(biāo)成分在檢測(cè)的質(zhì)量濃度范圍內(nèi)線(xiàn)性關(guān)系良好。

2.2.8 重復(fù)性考察 分別取芩連片、芩連膠囊、芩連丸樣品各6 份，分別按樣品處理方法制備樣品溶液，在“2.2.1”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣測(cè)定，記錄芩連制劑特征圖譜中38 個(gè)指標(biāo)性成分色譜峰面積，得芩連制劑供試品溶液特征圖譜中38 個(gè)特征峰峰面積和相對(duì)保留時(shí)間的重復(fù)性結(jié)果，各特征峰面積和相對(duì)保留時(shí)間RSD 值均小于5%，采用外標(biāo)法計(jì)算樣品中12 個(gè)指標(biāo)性成分含量，結(jié)果見(jiàn)表3。

表2 12 個(gè)指標(biāo)性成分線(xiàn)性回歸方程Table 2 Linear regression equation of 12 exponential components

2.2.9 加樣回收率考察 取已知指標(biāo)性成分含量的3 種芩連制劑粉末各6 份，每份250.0 mg，參考“2.2.8”項(xiàng)下重復(fù)性含量測(cè)定結(jié)果，按照中間質(zhì)量濃度加樣回收率測(cè)定方法，分別加入25 mL 含有相應(yīng)對(duì)照品質(zhì)量濃度的70%甲醇，稱(chēng)定質(zhì)量，加熱回流處理90 min，放冷，用70%甲醇溶液補(bǔ)足減失的質(zhì)量，用0.22 μm 微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液，在“2.2.1”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣測(cè)定。根據(jù)“2.2.8”項(xiàng)下重復(fù)性考察測(cè)得的各成分的量，計(jì)算各成分的加樣回收率和RSD，結(jié)果見(jiàn)表4，12 個(gè)指標(biāo)性成分回收率在83.58%～106.76%。

2.3 多批次芩連制劑質(zhì)量測(cè)定結(jié)果

2.3.1 芩連制劑特征圖譜質(zhì)量表征結(jié)果 取11 批不同廠(chǎng)家生產(chǎn)芩連制劑樣品，按照已建立的樣品處理方法，在“2.2.1”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣測(cè)定。各研究用樣品均可檢出38 個(gè)特征色譜法，各樣品特征圖譜結(jié)果見(jiàn)圖5。記錄峰面積值，以黃芩苷色譜峰（峰20）為參比峰（s），計(jì)算38 個(gè)色譜峰相對(duì)峰面積比值，見(jiàn)表5。

2.3.2 芩連制劑中12 個(gè)指標(biāo)成分的含量測(cè)定結(jié)果采用已建立的分析方法，測(cè)定11 份芩連制劑中12個(gè)指標(biāo)性成分質(zhì)量分?jǐn)?shù)，結(jié)果見(jiàn)表6。

表3 芩連制劑指標(biāo)性成分含量測(cè)定重復(fù)性結(jié)果Table 3 Repeatability results of determination of index components in Qinlian preparation

表4 芩連制劑指標(biāo)性成分含量測(cè)定回收率考察結(jié)果Table 4 Test results of recoveries for determination of index compounds of Qinlian preparation

圖5 11 批芩連制劑樣品特征圖譜Fig.5 Sample characteristics profiles of 11 batches of Qinlian preparation

表5 11 批芩連制劑樣品特征圖譜相對(duì)峰面積測(cè)定結(jié)果Table 5 Determination of relative peak area of 11 batches of samples from Qinlian preparation

續(xù)表5

表6 11 份芩連制劑中12 個(gè)指標(biāo)性成分含量測(cè)定結(jié)果Table 6 Determination of 12 index ingredients in 11 samples of Qinlian preparation

2.4 多批次芩連制劑樣品質(zhì)量分析

2.4.1 芩連制劑樣品整體質(zhì)量分析 采用SIMCA 13.0 統(tǒng)計(jì)分析軟件PCA-X，OPLS-DA 分析方法，以芩連制劑特征圖譜中38 個(gè)特征峰的相對(duì)峰面積比值及其12 個(gè)指標(biāo)性成分含量為質(zhì)量表征數(shù)據(jù)，分析11 份芩連制劑質(zhì)量分布狀況。

如圖6所示，在無(wú)監(jiān)督模型下（PCA-X），11批次芩連制劑整理質(zhì)量分布按聚集程度分為3 類(lèi)：第1 類(lèi)包括S1～S3（片劑）、S6～S8（片劑、膠囊劑）、S11（丸劑）；第2 類(lèi)包括S4～S5（片劑）；第3 類(lèi)包括S9～S10（膠囊劑）。

圖6 無(wú)監(jiān)督模型下11 批次芩連制劑特征圖譜質(zhì)量表征分布散點(diǎn)圖Fig.6 Scatter plot of quality characterization profiles of 11 batches of Qinlian preparation under unsupervised model

圖7 以生產(chǎn)廠(chǎng)家為分類(lèi)的有監(jiān)督模型下11 批次芩連制劑特征圖譜質(zhì)量表征分布散點(diǎn)圖Fig.7 Scatter plot of quality characterization distribution of 11 batches of Qinlian preparations under a supervised model classified by manufacturer

圖8 以生產(chǎn)廠(chǎng)家為分類(lèi)的有監(jiān)督模型下11 批次芩連制劑特征成分VIP 得分圖Fig.8 VIP score chart of characteristic components of 11 batches of Qinlian preparations under a supervised model classified by manufacturer

如圖7所示，在以生產(chǎn)廠(chǎng)家為分類(lèi)的監(jiān)督模型下（OPLS-DA），11 批芩連制劑整體質(zhì)量分布趨勢(shì)，與無(wú)監(jiān)督模型下一致（第1 類(lèi)：S1～S2 廠(chǎng)家1，S3廠(chǎng)家2，S6 廠(chǎng)家4，S7～S8 廠(chǎng)家5，S11 廠(chǎng)家7；第2 類(lèi)：S4～S5 廠(chǎng)家3；第3 類(lèi)：S9～S10 廠(chǎng)家6）；如圖8所示，質(zhì)量差異成分VIP 值得分高于1.0 的指標(biāo)成分有13 個(gè)，依次為（VIP 值1.6～1.0 從大到小）：峰22（黃芩）、2（赤芍）、36［連翹（連翹酯素）］、21［赤芍（PGG）］、8（黃連、川黃柏）、3（連翹）、25（黃連）、38（黃芩）、7［赤芍（芍藥內(nèi)酯苷）］、30（連翹）、27（黃芩）、24（黃連）、4（黃連、川黃柏）；質(zhì)量分類(lèi)的相關(guān)成分主要來(lái)源于：黃芩（峰22、38、27），赤芍［峰2、21（PGG）、7（芍藥內(nèi)酯苷）］，連翹［峰36（連翹酯素）、30）］，黃連（峰24），黃連-川黃柏（峰8、4），連翹-赤芍（峰3）。

2.4.2 芩連制劑樣品指標(biāo)性成分的含量分析 根據(jù)指標(biāo)性成分來(lái)源，分別對(duì)11 批芩連制劑中各藥味指標(biāo)性成分含量進(jìn)行分析，統(tǒng)計(jì)11 批次芩連制劑中各指標(biāo)性成分含量范圍，計(jì)算最大含量和最小含量倍量關(guān)系，見(jiàn)表5；12 個(gè)指標(biāo)成分含量差異范圍為2～71 倍，根據(jù)各指標(biāo)成分含量范圍最大值與最小值的差量倍數(shù)依次從大到小排序?yàn)樯炙巸?nèi)酯苷（71.38倍）＞連翹酯苷A（43.24 倍）＞連翹苷（18.64倍）＞PGG（16.50 倍）＞芍藥苷（6.70 倍）＞甘草酸（4.58 倍）＞鹽酸黃柏堿（4.90 倍）＞鹽酸巴馬?。?.26 倍）＞漢黃芩苷（3.19 倍）＞鹽酸小檗堿（3.14 倍）＞甘草苷（2.68 倍）＞黃芩苷（2.24倍）；指標(biāo)性成分含量差異大于5 倍的藥味來(lái)源主要是：連翹（連翹酯苷A 和連翹苷）、赤芍（芍藥內(nèi)酯苷、PGG 和芍藥苷）。

3 討論

3.1 芩連制劑質(zhì)量差異表征分析

芩連片、芩連膠囊、芩連丸3 種制劑中成藥處方組成相同，導(dǎo)致其質(zhì)量差異的主要因素有：原料質(zhì)量、提取次數(shù)、提取時(shí)間、提取溶劑量、干燥方式、輔料添加量等。因此，不同批次的芩連制劑特征圖譜及其12 個(gè)指標(biāo)性成分含量，都表現(xiàn)為以廠(chǎng)家為主的質(zhì)量聚類(lèi)分布。

從芩連制劑的整體質(zhì)量分布分析結(jié)果看，以廠(chǎng)家為主的質(zhì)量聚類(lèi)分布相關(guān)因子，主要來(lái)源于黃芩（峰22、38、27）、赤芍［峰2、21（PGG）、7（芍藥內(nèi)酯苷）］、連翹［峰36（連翹酯素）、30）］、黃連（峰24）、黃連-川黃柏（峰8、4）、連翹-赤芍（峰3）。

從芩連制劑的指標(biāo)性成分含量差異上看，不同廠(chǎng)家的生產(chǎn)工藝均由黃芩、川黃柏、甘草、連翹4味飲片同時(shí)提取制備，而黃芩、甘草、川黃柏指標(biāo)性成分含量差異范圍（2～5 倍）明顯低于連翹指標(biāo)性成分連翹酯苷A 含量差異（43.24 倍）；同樣，不同劑型的芩連制劑中赤芍和黃連均為粉碎后與提取物混合制備藥物，而赤芍指標(biāo)性成分芍藥內(nèi)酯苷含量差異（71.38 倍）明顯高于其它黃芩、甘草、川黃柏、黃連的含量差異范圍。結(jié)合連翹和赤芍原料飲片及其中藥材的質(zhì)量特征可知，青翹和老翹不同規(guī)格的連翹中連翹酯苷A 含量差異較大，赤芍和易混藥材白芍中芍藥內(nèi)酯苷含量差異較大，芩連制劑中這兩個(gè)成分含量的顯著差異，應(yīng)與原料中藥材的質(zhì)量差異相關(guān)。

3.2 芩連制劑特征圖譜分析方法

在分析方法建立的過(guò)程中，通過(guò)甲酸、磷酸等不同流動(dòng)相的對(duì)比考察，不同體積流量考察，發(fā)現(xiàn)赤芍成分與黃連、黃柏成分相互干擾嚴(yán)重，受流動(dòng)相pH 值變化影響較大；小檗堿等生物堿成分拖尾較為嚴(yán)重，不易與連翹苷等成分分離檢測(cè)；經(jīng)實(shí)驗(yàn)選定了乙腈（含0.02%甲酸）-（10 mol/L 乙酸銨-0.09%甲酸緩沖液）為流動(dòng)相，實(shí)現(xiàn)了目標(biāo)測(cè)定成分較為穩(wěn)定的分離效果。研究最終采用UHPLCDAD 法建立了芩連制劑特征圖譜質(zhì)量表征方法，在已有文獻(xiàn)報(bào)道的基礎(chǔ)上，提高了指標(biāo)性成分定量范圍的寬度和準(zhǔn)確度，并首次建立了對(duì)芩連制劑組方6 味中藥的12 個(gè)關(guān)鍵指標(biāo)性成分含量的同時(shí)測(cè)定，為芩連制劑的質(zhì)量評(píng)價(jià)提供的研究基礎(chǔ)。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突