陳光元，黃平，廖小花，謝家濱

子宮內(nèi)膜異位癥是指于子宮內(nèi)膜外部位有活性內(nèi)膜細(xì)胞的婦科疾病，主要以月經(jīng)異常、慢性盆腔痛、痛經(jīng)及不孕表現(xiàn)為主，可影響患者的生殖系統(tǒng)功能[1]。據(jù)流行病學(xué)統(tǒng)計[2]，育齡期女性子宮內(nèi)膜異位癥發(fā)生率約為10%，致使其生活質(zhì)量下降，嚴(yán)重危害患者身心健康。因此，需找尋一種有效治療方法，改善患者臨床癥狀，提升生活質(zhì)量。桂枝茯苓丸屬中成藥，主要由桃仁、牡丹皮、茯苓及桂枝組成，具有消癥、化瘀及活血之效，可緩解婦女月經(jīng)不暢、閉經(jīng)、痛經(jīng)、血色暗紫及下腹包塊等癥狀[3]。目前，臨床上關(guān)于桂枝茯苓丸治療子宮內(nèi)膜異位癥的研究較多，但仍未明確其具體作用機(jī)制。鑒于此，本研究對子宮內(nèi)膜異位癥造模成功的大鼠展開研討，探討桂枝茯苓丸對子宮內(nèi)膜異位癥的治療作用與機(jī)制?，F(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 材料 (1)動物：未交配過的健康雌性、性成熟大鼠，體質(zhì)量185～220 g，均來源于上海劍鈍生物科技有限公司。(2)藥物和試劑：桂枝茯苓丸(同藥集團(tuán)大同制藥有限公司生產(chǎn)，國藥準(zhǔn)字Z14020280)，達(dá)那唑(廣州白云山光華制藥股份有限公司生產(chǎn)，國藥準(zhǔn)字H44020421)，布洛芬緩釋膠囊(芬必得，上海信誼天平藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，國藥準(zhǔn)字H31022720)，血栓素2(TXB2)、β-內(nèi)啡肽(β-EP)、6-酮前列腺素F1α(6-keto-PGF1α)放免試劑盒(上海生物科技有限公司生產(chǎn))，苯二胺、機(jī)制金屬蛋白酶抗體顯色試劑盒(上海古朵生物科技有限公司生產(chǎn))。(3)儀器：石蠟切片機(jī)(浙江省金華市華速科技有限公司生產(chǎn)，型號：HS-3315)，醫(yī)院計算機(jī)圖像分析系統(tǒng)。

1.2 實驗方法

1.2.1 大鼠模型建立：選取動情周期5 d且持續(xù)有2個正常動情周期的大鼠，于第3個動情周期，通過子宮內(nèi)膜肢體移植法，構(gòu)建大鼠子宮內(nèi)膜異位癥模型。在建模術(shù)后4周，借助涂片法，查看大鼠動情期與性周期，隨機(jī)選取5只，實施開腹檢查，觀察病灶生長狀況，同時開展病理組織檢查，探查移植物生存狀況，如果移植物存活且有間質(zhì)細(xì)胞、腺體、子宮內(nèi)膜上皮生長，則證明建模成功。

1.2.2 分組及用藥：采用隨機(jī)數(shù)字表法，將100只建模成功的大鼠分成A、B、C、D、E組，每組20只。A組予以桂枝茯苓丸1.024 g/kg，B組予以桂枝茯苓丸0.256 g/kg，C組予以達(dá)那唑0.036 g/kg，D組予以芬必得0.054 g/kg，E組予以等體積生理鹽水，灌胃給藥，每天1次。5組治療時間均為28 d。

1.3 觀察指標(biāo)與方法

1.3.1 血清免疫球蛋白M(IgM)、免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白G(IgG)水平：通過免疫比濁法測定5組大鼠血清IgM、IgA、IgG水平。

1.3.2 血漿TXB2、β-EP、6-keto-PGF1α水平：在大鼠最后1次給藥后，禁食12 h，取靜脈血2 ml，快速放于抗凝管內(nèi)，以3 000 r/min的速度離心10 min，取血漿，在-20 ℃條件下保存?zhèn)溆茫煌ㄟ^放免法測定TXB2、β-EP、6-keto-PGF1α水平。

1.3.3 異位內(nèi)膜中基質(zhì)金屬蛋白酶-9(MMP-9)、基質(zhì)金屬蛋白酶-2(MMP-2)表達(dá)：取血后，采用戊巴比妥鈉將大鼠麻醉，取出移植物，借助游標(biāo)卡尺測量其體積，對比各組體積狀況。體積=高×長×寬×0.52。采用4%多聚甲醛進(jìn)行固定，實施常規(guī)石蠟包埋與切片，通過免疫組織化學(xué)染色法開展檢測工作。顯色深淺評分標(biāo)準(zhǔn)：0分：顯色不清或不顯色；1分：淺黃色；2分：棕黃色；3分：褐黃色。陽性細(xì)胞百分率評分標(biāo)準(zhǔn)：0分：未發(fā)現(xiàn)細(xì)胞顯色；1分：細(xì)胞顯色率<25%；2分，細(xì)胞顯色率為25%～50%；3分：細(xì)胞顯色率>50%。染色強度評分標(biāo)準(zhǔn)：0～1分：呈陰性；2分：表現(xiàn)為弱陽性；3～4分：呈中度陽性；5～6分：呈強陽性。采用顯色深淺半定量得分+陽性細(xì)胞百分率得分+染色強度評分作為評分標(biāo)準(zhǔn)，評估5組異位內(nèi)膜中MMP-9、MMP-2表達(dá)水平。

2 結(jié) 果

2.1 血清IgM、IgA、IgG水平比較 A、B、C、D組IgM、IgA、IgG水平低于E組(P<0.05)；A、B、C、D組IgM、IgA、IgG水平相比，A組最低(P<0.05)。見表1。

表1 5組血清IgM、IgA、IgG水平比較

2.2 血漿TXB2、β-EP、6-keto-PGF1α水平比較 A、B、D組血漿TXB2水平低于C組、E組，血漿β-EP、6-keto-PGF1α水平高于C、E組(P<0.05)。見表2。

表2 5組血漿TXB2、β-EP、6-keto-PGF1α水平 比較

2.3 異位內(nèi)膜中MMP-9、MMP-2表達(dá)情況比較 A、B組MMP-9、MMP-2總積分低于C、D、E組(P<0.05)。見表3。

表3 5組異位內(nèi)膜中MMP-9、MMP-2表達(dá)情況 比較分)

3 討 論

子宮內(nèi)膜異位癥屬臨床常見婦科疾病，患者可伴有不同程度的痛經(jīng)，甚至?xí)霈F(xiàn)不孕現(xiàn)象，嚴(yán)重影響患者的身心健康。該病的發(fā)生可能與內(nèi)分泌功能失調(diào)、體質(zhì)與遺傳因素、免疫防御功能缺陷等因素有關(guān)[4]。西醫(yī)主要采用達(dá)那唑、布洛芬治療子宮內(nèi)膜異位癥。達(dá)那唑主要是通過對子宮內(nèi)膜細(xì)胞雌激素受體的作用，抑制雌激素效能，促使子宮正常及異常的內(nèi)膜不活動與萎縮，從而減輕患者臨床癥狀[5]。布洛芬在子宮內(nèi)膜異位癥引起的痛經(jīng)治療中效果較好，但對子宮內(nèi)膜異位癥的整體治療效果并不顯著。

中醫(yī)認(rèn)為子宮內(nèi)膜異位癥屬“癥瘕”“痛經(jīng)”范疇，主要是由血瘀絡(luò)阻而致，因此，治療時應(yīng)以活絡(luò)通經(jīng)、活血化瘀治療為主[6]。桂枝茯苓丸是一種中成藥，具有消癥、化瘀、活血之效，主要用于血瘀閉經(jīng)、腹痛的治療。在子宮內(nèi)膜異位癥治療中桂枝茯苓丸可有效緩解患者疼痛，促進(jìn)內(nèi)膜異位腫塊的消除。有學(xué)者認(rèn)為[7]，子宮內(nèi)膜異位癥可能屬自動免疫性疾病，在B細(xì)胞分化成漿細(xì)胞后，IgM會率先生成，之后通過轉(zhuǎn)化合成IgA、IgG。當(dāng)無內(nèi)源性感染的條件下，腹腔膜會產(chǎn)生多種抗體。IgG可參與機(jī)體的自動免疫反應(yīng)與慢性炎性反應(yīng)，IgA可參與到黏膜的免疫中，IgM可參與急性炎性反應(yīng)。以往研究表明[8]，子宮內(nèi)膜異位癥患者腹膜液IgG含量較高，且經(jīng)子宮內(nèi)膜腺上皮染色發(fā)現(xiàn)，IgA、IgG水平也較高。本結(jié)果顯示,A組IgM、IgA、IgG水平低于B、C、D、E組，表示高劑量桂枝茯苓丸能有效改善患者炎性反應(yīng)與自動免疫應(yīng)答反應(yīng)，從而緩解子宮內(nèi)膜異位癥臨床癥狀。

文獻(xiàn)報道[9]，子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)生，造成組織或血漿內(nèi)的TXA2、PGI2失去平衡，從而引發(fā)子宮小動脈痙攣而導(dǎo)致子宮體缺血，最終產(chǎn)生疼痛，致使6-keto-PGF1α、TXB2在體內(nèi)的含量出現(xiàn)異常變化，子宮產(chǎn)生異常收縮，抑制機(jī)體排卵。而桂枝茯苓丸則可有效調(diào)節(jié)患者體內(nèi)6-keto-PGF1α與TXB2水平，促使機(jī)體有關(guān)指標(biāo)水平較快恢復(fù)，從而促進(jìn)患者康復(fù)。本研究中A、B、D組TXB2低于C、E組，β-EP、6-keto-PGF1α水平高于C、E組，可見桂枝茯苓丸能有效改善患者機(jī)體內(nèi)有關(guān)指標(biāo)水平。

子宮內(nèi)膜異位癥存在與惡性腫瘤類似的轉(zhuǎn)移侵襲能力，細(xì)胞基質(zhì)的重建、降解是其重要因素，基質(zhì)金屬蛋白酶則關(guān)系到細(xì)胞基質(zhì)的降解。有關(guān)文獻(xiàn)報道[10]，基質(zhì)金屬蛋白和細(xì)胞基質(zhì)的發(fā)生存在密切關(guān)系，其中MMP-9、MMP-2皆參與了子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)生與發(fā)展。有關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，MMP-9、MMP-2于異位內(nèi)膜細(xì)胞中的表達(dá)程度上升，可提高血管生成數(shù)量。另外，MMP-9、MMP-2于子宮內(nèi)膜異位癥發(fā)病過程中發(fā)揮關(guān)鍵性作用。本研究中A、B組MMP-9、MMP-2表達(dá)低于C、D、E組，這提示桂枝茯苓丸可抑制MMP-9、MMP-2的表達(dá)，防止該病深入發(fā)展。

綜上所述，在子宮內(nèi)膜異位癥大鼠治療中桂枝茯苓丸可發(fā)揮較好治療作用，其可能作用機(jī)制：(1)通過對子宮內(nèi)膜異位癥大鼠免疫功能功能的調(diào)節(jié)，改善其臨床癥狀；(2)通過抑制子宮平滑肌痙攣，改善患者前列腺素水平，降低MMP-9、MMP-2的表達(dá)。