李希政 白中文 朱 琳 夏宏志

（吉林省生物研究所，吉林長春130012）

靈芝是我國從古至今常用的中藥材，在我國已有兩千多年的藥用歷史，被視為能治百病的“仙草”[1]。吉林省長白山區(qū)的紅靈芝譽(yù)滿海內(nèi)外[2]。自20世紀(jì)90年代開始，靈芝棚栽技術(shù)發(fā)展迅速。雖然靈芝栽培技術(shù)不斷進(jìn)步，但栽培菌株較雜[3]，并隨著轉(zhuǎn)代次數(shù)的增加，使用時間過長，出現(xiàn)了老化、退化、抗雜能力弱等問題[4]。雜交育種是新菌株選育的重要手段，而雜交親本性狀優(yōu)選試驗是雜交選育的關(guān)鍵。

1 材料與方法

1.1 供試靈芝菌株

試驗靈芝菌株共計10個，均來自長白山菌株資源庫，其中包括采集的野生靈芝（編號為CJ12）（表1）。所有菌株均通過分離、提純、復(fù)壯，恢復(fù)至其最好性狀。試驗過程均采用菌齡相同的菌株且保證菌種管無污染。

1.2 供試培養(yǎng)基（料）配方

（1）母種培養(yǎng)基：馬鈴薯200 g，五維葡萄糖20 g，瓊脂25 g，磷酸二氫鉀3.5 g，硫酸鎂1.5 g，蛋白胨 5 g，加水 1 000 mL，pH 自然。（2）原種培養(yǎng)料：雜木屑78%，麩皮15%，玉米粉5%，稻殼粉1%，石膏1%。（3）栽培靈芝木段：栽培木段選用新鮮枝條（經(jīng)濟(jì)林可砍伐硬木），將其截成同一長度段，捆成直徑25 cm、高22 cm 的圓木段狀，外包聚丙烯膜，常壓滅菌12 h后備用。

表1 供試靈芝親本菌株名稱及來源

1.3 試驗方法

1.3.1 母種菌絲比較試驗

母種培養(yǎng)基按配方制作后裝入試管，滅菌后，將其擺成長度為7 cm的斜面。每一菌株10支試管，每支試管接種0.5 cm2菌塊。培養(yǎng)條件為27 ℃恒溫。培養(yǎng)24 h 后觀察各試管中菌絲的萌發(fā)情況和生長狀態(tài)。當(dāng)菌絲進(jìn)入快速生長階段時，每兩天測一次長度，取平均值。同時，觀察菌絲色澤、長勢等，記錄滿管時間。

1.3.2 原種菌絲生長比較試驗

將原種培養(yǎng)料按配方稱好，先拌主料，再加輔料，主料、輔料混勻后，加水拌勻，控制料含水量為65%。將料裝入750 mL 玻璃瓶中壓實，然后封口、滅菌。每一菌株10 瓶。接入2 cm 長菌種塊后，27 ℃恒溫暗培養(yǎng)，培養(yǎng)至菌絲封蓋時，劃線記錄生長線。當(dāng)菌絲長至距離瓶底2 cm 時，劃終止線（總長度為10 cm），記錄菌絲生長時間，計算菌絲平均生長速度。觀察菌絲色澤和長勢，記錄菌絲滿瓶時間。

1.3.3 出芝培養(yǎng)和生育期比較試驗

將原種轉(zhuǎn)接至1.2 制備的木段中，每瓶原種接6段，每段接種量一致。每個菌株3次重復(fù)，每次重復(fù)20段，共計60段。每段木段干重2.4 kg。

記錄木段中菌種萌發(fā)時間、菌絲封頂及長滿木段時間。

木段長滿菌絲后，移至陰涼干燥處后熟10～15 d（需覆膜防塵），然后移入棚覆土，同一天覆土、噴水。出芝管理條件同常規(guī)。

記錄子實體現(xiàn)蕾時間、子實體形態(tài)、菌蓋顏色，統(tǒng)計產(chǎn)量，按照常規(guī)方法計算生物學(xué)效率，并用新復(fù)極差法進(jìn)行方差分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 供試靈芝菌株菌絲生長情況

供試靈芝菌株菌絲生長情況見表2。

由表2可知，供試靈芝菌株的母種菌絲、原種菌絲生長速度有差異，菌絲的色澤和長勢也存在差異。SW6、SW9、CJ12菌株菌絲色澤好，萌發(fā)能力強(qiáng)，生長勢好，母種菌絲平均長速分別為1.000 cm/d、1.000 cm/d、1.167 cm/d，原種菌絲平均長速分別為0.284 cm/d、0.309 cm/d、0.356 cm/d，其中 CJ12 菌株菌絲生長最快。

接種后，SW6、SW9、CJ12 菌株母種 6～7 d 均可長滿試管，其原種 30～32 d 長滿瓶。SW11、SW1、SW5、SW4、SW2 菌株菌絲生長速度、顏色、長勢、萌發(fā)能力較SW6、SW9、CJ12菌株稍差，但比SW8、SW7表現(xiàn)好。SW8、SW7 菌株表現(xiàn)最差，生長速度最慢，萌發(fā)最晚，長勢最弱，其母種經(jīng)過11 d 才長滿試管，原種48～49 d才長滿瓶。

表2 供試靈芝菌株母種、原種菌絲生長對比

2.2 供試靈芝菌株生育期

由表 3 可知，供試 10 個靈芝菌株中，SW7、SW8菌株萌發(fā)能力最弱，接入木段后第3天才萌發(fā)菌絲，其他菌株均在接種后第2 天萌發(fā)。在木段上，菌絲生長最快的是CJ12 菌株，接種7 d 菌絲封面，37.3 d后菌絲長滿木段；SW9、SW6 菌株菌絲生長很快，接種 7 d 封面，38.7～39.3 d 后菌絲長滿木段；SW11、SW5、SW1、SW4、SW2 菌株菌絲生長速度較快，接種8～9 d 后菌絲封面，42～43.7 d 均能長滿木段；SW8、SW7菌株菌絲生長速度最慢。

CJ12、SW9、SW6菌株生育期為114～115 d，三者間差異不顯著，與其他菌株呈顯著差異；SW11、SW5、SW1、SW4、SW2 菌株生育期為 122～123 d，相互之間生育期無顯著差異，與其他菌株呈顯著差異；SW7、SW8菌株生育期為131、133 d，兩者間無顯著差異，但與其他菌株呈顯著差異。從出現(xiàn)原基開始，CJ12 菌株菌絲吸收木段營養(yǎng)最快，僅用36 d 靈芝子實體就已經(jīng)成熟并彈射孢子；SW11、SW5、SW1、SW4、SW2 菌株子實體成熟時間僅次于CJ12菌株；SW7、SW8 菌株子實體成熟最晚，因此管理投入人力物力也最多。

表3 供試靈芝菌株生育期比較

2.3 供試靈芝菌株產(chǎn)量

圖1 部分試驗靈芝菌株子實體

由表 4 可知，CJ12、SW9、SW6 菌株平均產(chǎn)量較高，與其他菌株達(dá)顯著性差異；其次是SW11、SW5、SW1、SW4、SW2菌株，產(chǎn)量和生物學(xué)效率表現(xiàn)次之；最差的是SW7、SW8兩個菌株。

2.4 供試靈芝菌株生物性狀比較

供試靈芝菌株的生物性狀見表4、表5。

試驗發(fā)現(xiàn)CJ12、SW9、SW6菌株原基長勢強(qiáng)，原基粗壯，菌柄較短或中等，原基至子實體成熟天數(shù)為36.0～36.7 d，時間較短，菌絲抗雜能力強(qiáng)，子實體褐色，外形各異，產(chǎn)量高。SW11菌株的生物性狀表現(xiàn)次之，再后是SW4、SW1、SW2、SW5菌株，生物性狀表現(xiàn)較好，原基長勢較強(qiáng)，菌柄朵形有差異，原基至子實體成熟天數(shù)為39.3～40.0 d，產(chǎn)量一般。生物性狀最差的是SW7、SW8菌株，產(chǎn)量低，抗雜能力最弱，原基至子實體成熟天數(shù)最長，原基長勢最弱，子實體外形一般。

表4 供試靈芝菌株平均產(chǎn)量

表5 供試靈芝菌株的生物性狀比較

3 小結(jié)

菌絲培養(yǎng)試驗結(jié)果表明，CJ12、SW9、SW6 菌株表現(xiàn)較優(yōu)，其母種、原種、木段培養(yǎng)的菌絲生長表現(xiàn)較佳。出芝試驗結(jié)果，CJ12、SW9、SW6 菌株表現(xiàn)較優(yōu)，生育期適中，產(chǎn)量較高，子實體性狀較好，可以作為靈芝新品種雜交的親本材料。