吳蔚，肖珍，張順芝，曹天然，黃慶，張小敏，魯萍（長(zhǎng)沙市第一醫(yī)院，長(zhǎng)沙 410013）

復(fù)方磺胺甲噁唑片屬于磺胺類抗菌藥物，是磺胺甲噁唑（SMZ）與甲氧芐啶（TMP）的復(fù)方制劑，對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌、陰性菌均有較好的抗菌作用。SMZ 作用于二氫葉酸合成酶，TMP 作用于葉酸合成代謝，選擇性抑制二氫葉酸還原酶，兩者合用可使細(xì)菌的葉酸代謝受到雙重阻斷，協(xié)同抗菌作用較單藥增強(qiáng)，對(duì)其耐藥的菌株減少[1]。本文旨在研究復(fù)方磺胺甲噁唑片在中國(guó)健康受試者體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)特征和安全性，并對(duì)兩種制劑是否生物等效進(jìn)行評(píng)價(jià)，為臨床用藥安全性和有效性提供數(shù)據(jù)參考[2]。

1 材料

復(fù)方磺胺甲噁唑片（受試制劑，規(guī)格：含SMZ 0.4 g、TMP 80 mg，批號(hào)：2001402，山東新華制藥股份有限公司）；復(fù)方磺胺甲噁唑片（參比制劑，商品名：BACTRIM，規(guī)格：含SMZ 0.4 g、TMP 80 mg，批號(hào)：7005301，Sun Pharmaceutical Industries Inc）；SMZ （批號(hào)：100025-201505，純度：99.6%）、TMP（批號(hào)：100031-201606， 純度：99.8%）對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院）；SMZ -d4（SMZ-d4，批號(hào)：3147-019A3，純度：98.9%）和甲氧芐啶-d3（TMP-d3，批號(hào)：3066-017B3，純度：97.2%）對(duì)照品（TLC Pharmaceutical Standards）。

LC-20AD 高效液相色譜儀（日本島津公司）；API 4000 質(zhì)譜系統(tǒng)（AB SCIEX 公司）；TGL 16M離心機(jī)（長(zhǎng)沙英泰儀器有限公司）；十萬(wàn)分之一分析天平（賽多利斯SQP/SECURA225D）。

2 方法與結(jié)果

2.1 受試者選擇

共入組32 名健康志愿者，男性26 例、女性6 例。年齡18 ～36 歲，體質(zhì)量45.4 ～ 80.7 kg，體質(zhì)量指數(shù)（BMI）19.2 ～24.9 kg·m－2。每個(gè)受試者進(jìn)行兩周期試驗(yàn)，洗脫期7 d。試驗(yàn)方案通過(guò)長(zhǎng)沙市第一醫(yī)院臨床試驗(yàn)倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)，編號(hào)：20200331CSSY00101。受試者均簽署知情同意書(shū)。

入選標(biāo)準(zhǔn)：①年齡≥18周歲，體質(zhì)量男性≥50 kg，女性≥45 kg，BMI 在19.0 ～26.0 kg·m－2；② 所有受試者經(jīng)生命體征、心電圖及各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)室檢查無(wú)異?；?yàn)椴痪哂信R床意義的異常，無(wú)神經(jīng)系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)、內(nèi)分泌系統(tǒng)、泌尿系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)、消化系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)等明確病史。

排除標(biāo)準(zhǔn)：① 既往或目前任何臨床嚴(yán)重疾病者或能干擾試驗(yàn)結(jié)果的任何其他疾??；② 有藥物、食物或其他物質(zhì)過(guò)敏史；③ 試驗(yàn)前14 d 服用任何藥物者；④ 試驗(yàn)前30 d 使用干擾藥物代謝的藥物者；⑤ 嗜煙嗜酒者；⑥ 近3 個(gè)月內(nèi)獻(xiàn)血或作為受試者被采樣者；⑦ 肌酐清除率≤80 mL·min－2者[3]。

2.2 試驗(yàn)過(guò)程

采用隨機(jī)、開(kāi)放、自身交叉、雙周期、單次給藥試驗(yàn)設(shè)計(jì)。每周期在空腹?fàn)顟B(tài)下口服受試制劑或參比制劑1 片。受試者于給藥前1 d 入住病房，給藥前禁食10 h 以上，藥物使用240 mL 溫開(kāi)水送服。給藥前、后1 h 禁水。分別于每周期給藥前（0 h）及給藥后0.25、0.5、0.75、1、1.5、2、2.5、3、3.5、4、5、6、8、12、24、36、48 h 采集靜脈血各4 mL 置于肝素鈉抗凝采血管中。全血樣品采集后60 min 內(nèi)開(kāi)始離心，2000 g 離心10 min，2 h 內(nèi)儲(chǔ)存于（－70±10）℃冰箱保存。

2.3 血藥濃度的測(cè)定

2.3.1 色譜條件 色譜柱：Ultimate UPLC Polar RP（3.0 mm×100 mm，1.8 μm），預(yù)柱：ACE 3 μm C182.1 mm GUARD CART，流動(dòng)相：A 為5 mmol·L－1甲酸銨水溶液，B 為乙腈，洗脫條件：0 ～3 min，40%A[4-5]；進(jìn)樣量：2.0 μL；流速：0.4 mL·min－1。

2.3.2 質(zhì)譜條件 電噴霧離子源；正離子模式；監(jiān)測(cè)離子對(duì)：m/z254.2 →m/z156.2（SMZ），m/z258.2 →m/z160.2（內(nèi)標(biāo)SMZ-d4），監(jiān)測(cè)離子對(duì)：m/z291.1 →m/z123.2（TMP），m/z294.1 →m/z123.1（內(nèi)標(biāo)TMP-d3）；離子噴霧電壓：4500 V；去簇電壓：SMZ 78.0 V，SMZ-d4 70.0 V，TMP 115.0 V，TMP-d3 90.0 V；碰撞能量：SMZ 30.0 V，SMZ-d4 17.0 V，TMP 30.0 V，TMP-d3 28.0 V；氣簾氣：30 psi；離子源溫度：450℃。

2.3.3 血漿樣品處理 移取血漿樣品50 μL 于1.5 mL 深孔96 孔板中，加入內(nèi)標(biāo)溶液20 μL，再加入乙腈400 μL，渦旋振蕩15 min，離心 15 min（5℃、2480 g），移取上清液 50 μL 于另一潔凈96 孔板中，向所有樣本加入50%乙腈200 μL，渦旋振蕩 3 min，離心 10 min（5℃、2480 g），取上清液2.0 μL 進(jìn)行分析。

2.3.4 專屬性 將空白血漿、加入對(duì)照品的血漿樣本及受試者服藥后血漿樣本按“2.3.3”項(xiàng)下方法處理并進(jìn)樣分析，色譜圖見(jiàn)圖1，表明方法專屬性良好。

圖1 典型色譜圖Fig 1 Typical multiple reaction monitoring chromatograms

2.3.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線與定量限 取新配制的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣本（SMZ：0.50、1.00、2.00、4.00、10.00、20.00、40.00、50.00 μg·mL－1，TMP：0.02、0.05、0.10、0.20、0.40、1.00、1.80、2.00 μg·mL－1）按“2.3.1”項(xiàng)下條件分析，分別以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，各自峰面積與內(nèi)標(biāo)峰面積的比值為縱坐標(biāo)，進(jìn)行加權(quán)回歸，權(quán)重因子 1/χ2，得標(biāo)準(zhǔn)曲線分別為YSMZ＝2.56X－0.003 46，R2＝0.9974，YTMP＝2.31X－ 0.004 12，R2＝0.9976。SMZ、TMP 定量限分別為0.5 μg·mL－1、0.02 μg·mL－1。

2.3.6 精密度與回收率 配制低、中、高（SMZ：1.50、5.00、35.00 μg·mL－1，TMP：0.06、0.20、1.50 μg·mL－1）3 個(gè)質(zhì)量濃度的質(zhì)控樣本，每個(gè)質(zhì)量濃度平行制備6 份，連續(xù)測(cè)定3 個(gè)批次，計(jì)算日內(nèi)、日間精密度及回收率。結(jié)果SMZ 和TMP 的日內(nèi)精密度RSD在－3.1%～5.4%，日間精密度RSD在0.060%～3.7%；平均回收率在97.7%～108.3%，對(duì)應(yīng)的RSD均小于5%。

2.3.7 基質(zhì)效應(yīng) 分別取 6 個(gè)不同批次的空白人血漿，每個(gè)批次配制一份，按“2.3.3”項(xiàng)下方法處理后進(jìn)樣分析，結(jié)果SMZ 高、中、低質(zhì)控水平樣品的內(nèi)標(biāo)歸一化的基質(zhì)效應(yīng)因子變異分別為0.98%、0.98%、2.00%。TMP 高、中、低質(zhì)控水平樣品的內(nèi)標(biāo)歸一化的基質(zhì)效應(yīng)因子變異分別為2.15%、2.13%、2.17%。內(nèi)標(biāo)和待測(cè)物均無(wú)基質(zhì)效應(yīng)。

2.3.8 穩(wěn)定性 考察全血樣品分別在室溫放置 0 h 和 27 h，在－20℃冰箱存放17 d，－80℃冰箱中存放33 d，在－20 ℃ 凍融5 次，在－80 ℃凍融5 次，白光室溫放置 2 h，在自動(dòng)進(jìn)樣器（5℃，避光）中放置 81 h 的穩(wěn)定性。結(jié)果SMZ、TMP 質(zhì)量濃度的RSD均＜9.3%，說(shuō)明血漿樣品在上述條件下穩(wěn)定性。

2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

使用Phoenix WinNonlin 軟件8.2 版本的非房室模型（NCA）計(jì)算各受試者的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)Cmax、AUC0～t、AUC0～∞、t1/2、tmax實(shí)測(cè)值采用非參數(shù)Wilcoxon 法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理。Cmax和AUC經(jīng)對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換后進(jìn)行多因素方差分析（ANOVA）、雙單側(cè)t檢驗(yàn)和90%置信區(qū)間分析，并進(jìn)行等效性比較，等效區(qū)間設(shè)定為80.00%～125.00%。

2.5 血藥濃度-時(shí)間曲線

受試者空腹單次口服磺胺甲噁唑片受試制劑（T）與參比制劑（R）后SMZ 與TMP 的平均血藥濃度-時(shí)間圖見(jiàn)圖2。兩組健康受試者血藥濃度-時(shí)間曲線的變化趨勢(shì)基本一致。

圖2 空腹條件下口服復(fù)方磺胺甲噁唑片受試制劑（T）與參比制劑（R）后SMZ（A）、TMP（B）的平均血藥濃度-時(shí)間曲線Fig 2 Mean plasma concentration-time curve of SMZ（A）and TMP（B）after single oral administration of test and reference drugs under fasting

2.6 生物等效性評(píng)價(jià)

受試制劑/參比制劑中SMZ 的幾何均值比為94.97%（91.37%～98.72%），其90%置信區(qū)間分別為100.17%（98.34%～102.03%），100.36%（98.41% ～102.35%）；TMP 的Cmax、AUC0～t、AUC0～∞為103.34%（96.79%～110.34%），102.49%（99.04%～106.07%），102.02%（98.76%～105.38%）。兩者幾何均值比的90%CI均落在80.00%～125.00%，表明復(fù)方磺胺甲噁唑片受試制劑和參比制劑在空腹給藥時(shí)具有生物等效性（見(jiàn)表1）。

表1 受試者單次口服復(fù)方磺胺甲噁唑片受試制劑和參比制劑后SMZ 和TMP 的主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)( ±s)Tab 1 Main pharmacokinetic parameters of SMZ and TMP after single oral administration of test or reference drugs of sulfamethoxazole ( ±s)

表1 受試者單次口服復(fù)方磺胺甲噁唑片受試制劑和參比制劑后SMZ 和TMP 的主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)( ±s)Tab 1 Main pharmacokinetic parameters of SMZ and TMP after single oral administration of test or reference drugs of sulfamethoxazole ( ±s)

參數(shù)SMZTMP受試制劑參比制劑受試制劑參比制劑Cmax/ （μg·mL－1）29.2±4.630.8±5.31.1±0.21.1±0.2 AUC0 ～t /（h·μg·mL－1）430.5±66.7430.2±59.410.7±2.710.5±2.5 AUC0 ～∞/（h·μg·mL－1）450.9±73.7449.6±65.711.1±2.710.9±2.4 tmax/h3.0（1.5 ～5.0）2.5（0.7 ～5.0）1.0（0.5 ～3.5）0.7（0.5 ～3.5）t1/2/h10.3±1.210.2±1.17.4±1.37.4±1.1

2.7 安全性評(píng)價(jià)

本次試驗(yàn)共有20 例受試者發(fā)生30 例次不良事件（含第一周期12 號(hào)受試者服藥前發(fā)生的1 例次不良事件），其中受試制劑共11 例發(fā)生17 例次不良事件，參比制劑共9例發(fā)生12例次不良事件，除1例嚴(yán)重程度為中度（12號(hào)受試者給藥前暈針），其余均為輕度，以尿膽紅素升高、三酰甘油升高為主。除1 例受試者三酰甘油升高轉(zhuǎn)歸為失訪外，其他均為恢復(fù)。受試制劑和參比制劑不良事件發(fā)生情況總體相似，未出現(xiàn)嚴(yán)重不良事件，所有受試者生命體征平穩(wěn)，對(duì)兩種藥物的耐受性良好。

3 討論

根據(jù)NMPA 發(fā)布的《關(guān)于可豁免或簡(jiǎn)化人體生物等效性（BE）試驗(yàn)品種》通告要求，復(fù)方磺胺甲噁唑片（SMZ 0.4 g，TMP 80 mg）可豁免餐后生物等效性研究[6]。因此本文僅進(jìn)行了空腹研究。復(fù)方磺胺甲噁唑片口服后迅速吸收，TMP 和SMZ 均在1 ～4 h 達(dá)血藥峰濃度，且t1/2均為8 ～10 h，故本研究在4 h 前設(shè)計(jì)了10 個(gè)采血點(diǎn)，采血到48 h。

本研究共有3 例受試者脫落：12 號(hào)受試者第一周期給藥前因?yàn)闀炨樜唇o藥退出研究，20 號(hào)受試者在第一周期洗脫期隨訪抽煙符合入住排除標(biāo)準(zhǔn)脫落，8 號(hào)受試者第二周期服藥前因血壓低退出。31 例受試者納入全分析集、安全數(shù)據(jù)集、PK 濃度數(shù)據(jù)集和PK 參數(shù)分析集；31 例受試者納入BE 分析集。

4 總結(jié)

復(fù)方磺胺甲噁唑片是治療和預(yù)防卡氏肺孢子菌肺炎最有效的首選藥物，也是國(guó)內(nèi)治療弓形蟲(chóng)感染的首選用藥，對(duì)國(guó)產(chǎn)的該品種進(jìn)行生物等效性研究確保質(zhì)量、療效與原研藥一致具有重大意義。根據(jù)NMPA 發(fā)布的《關(guān)于可豁免或簡(jiǎn)化人體生物等效性（BE）試驗(yàn)品種》通告要求，復(fù)方磺胺甲噁唑片（SMZ 0.4 g，TMP 80 mg）可豁免餐后BE 研究[6]，因此本文僅進(jìn)行了空腹研究。

根據(jù)既往研究，復(fù)方磺胺甲噁唑片口服后迅速吸收，TMP 和SMZ 均在1 ～4 h 達(dá)血藥峰濃度，且t1/2均為8 ～10 h。故本研究在0 ～4 h 設(shè)計(jì)了10 個(gè)采血點(diǎn)，采血到48 h。復(fù)方磺胺甲噁唑過(guò)敏反應(yīng)較為常見(jiàn)[7]，本研究在篩選受試者時(shí)對(duì)本品或其他藥物、食物或過(guò)敏體質(zhì)者均進(jìn)行了排除，給藥后4 h 內(nèi)對(duì)受試者進(jìn)行了重點(diǎn)監(jiān)護(hù)。同時(shí)，該品種在用藥期間需足量飲水以防結(jié)晶尿和結(jié)石的形成[8]，本研究對(duì)受試者飲水也進(jìn)行了重點(diǎn)管控。

本研究共有3 例受試者脫落：31 例受試者納入全分析集、安全數(shù)據(jù)集、PK 濃度數(shù)據(jù)集和PK參數(shù)分析集；31 例受試者納入BE 分析集。綜合以上數(shù)據(jù)分析，受試制劑和參比制劑在安全性方面未見(jiàn)明顯差異，受試制劑和參比制劑在空腹給藥時(shí)具有生物等效性。