趙 芳

（晉中市綜合檢驗(yàn)檢測中心，山西晉中 030600）

蜂蜜中富含多種糖類、氨基酸、維生素等營養(yǎng)成分，清甜爽口、老少皆宜，飲用蜂蜜具有緩解疲勞、有益身體健康和抗菌消炎、保養(yǎng)皮膚的功效[1-3]。近年來，隨著人們食療養(yǎng)身意識的逐漸提升，純天然蜂蜜和農(nóng)家土蜂蜜備受歡迎，但市場上的蜂蜜品類較多，部分商家、養(yǎng)蜂戶夸大自身產(chǎn)品的品質(zhì)、功效，摻水、添加蔗糖或人工轉(zhuǎn)化糖等情況時(shí)有發(fā)生，因此相關(guān)部門要加強(qiáng)對蜂蜜質(zhì)量的監(jiān)測與評價(jià)[4]。蜂蜜中的還原糖主要有果糖、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖和乳糖5種，國家標(biāo)準(zhǔn)GB 5009.8—2016[5]中規(guī)定食品中上述5種還原糖用高效液相色譜-示差折光檢測器法（High Performance Liquid Chromatography coupled with Refractive Index Detector，HPLC-RID）、高效液相色譜-蒸發(fā)光檢測器法（High Performance Liquid Chromatography with Evaporative Light Scattering Detector，HPLC-ELSD）測定，本研究結(jié)合實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)有儀器條件，參照該標(biāo)準(zhǔn)建立了HPLC-RID測定蜂蜜中果糖、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖及乳糖5種還原糖的分析方法，為山西省晉中市綜合檢驗(yàn)檢測中心開展蜂蜜、糖漿等食品中5種還原糖的檢測提供技術(shù)支撐。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

蜂蜜購自某超市；果糖標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（編號GBW 10063）、葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（編號GBW 10062）、蔗糖標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（編號GBW 10067）和乳糖標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（編號GBW 10065）均由中國計(jì)量科學(xué)研究院提供；麥芽糖標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（編號CAS 69-79-4，77456）壇墨質(zhì)檢科技股份有限公司；乙腈（色譜純，德國默克）；實(shí)驗(yàn)用水為一級超純水。

1.2 儀器與設(shè)備

1260 infinity Ⅱ高效液相色譜儀（帶示差折光檢測器，美國安捷倫）；XP205分析天平（精度0.000 1 g，瑞士梅特勒－托利多）；VORTEX MS3旋渦混合儀（德國艾卡）；0.22 μm微孔濾膜（日本島津）。

1.3 試樣前處理

準(zhǔn)確稱取2 g混勻的蜂蜜試樣于50 mL容量瓶中，用純水定容至刻度，搖勻后用濾紙過濾，棄去初濾液，收集后續(xù)濾液過0.45 μm微孔濾膜，上機(jī)測試。

1.4 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

1.4.1 混合標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

準(zhǔn)確稱取果糖、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖及乳糖標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)各1 g，用超純水溶解、定容至50 mL容量瓶中，搖勻，配制5種還原糖的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液。

1.4.2 標(biāo)準(zhǔn)工作系列配制

準(zhǔn)確吸取糖混合標(biāo)準(zhǔn)溶液0.50 mL、1.00 mL、2.00 mL、3.00 mL和5.00 mL于5個(gè)10 mL容量瓶中，用超純水定容至刻度，即配制成5種還原糖組分質(zhì)量濃度均為1.0 mg/mL、2.0 mg/mL、4.0 mg/mL、6.0 mg/mL和10.0 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)工作系列。

1.5 液相色譜條件

氨基色譜柱：Kromasil 100-5-NH2（250 mm×4.6 mm）；柱溫：40 ℃；流動(dòng)相：水+乙腈（30+70，V/V），等度洗脫，流速為1.0 mL/min；檢測器：示差折光檢測器（RID）；檢測池溫度：40 ℃；進(jìn)樣體積：20 μL；色譜峰保留時(shí)間定性；峰面積外標(biāo)法定量。

2 結(jié)果與分析

2.1 色譜的分離分析

在1.5色譜條件下，15 min內(nèi)能完成果糖、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖和乳糖5種還原糖的分離分析，5種還原糖組分目標(biāo)峰分離較好，各組分峰形對稱，且蜂蜜試樣中的雜質(zhì)組分未對5種還原糖的目標(biāo)峰產(chǎn)生干擾，可進(jìn)行準(zhǔn)確的定性定量檢測。

2.2 方法的線性關(guān)系與檢出限

以5種還原糖組分目標(biāo)峰的峰面積Y為縱坐標(biāo)，以相對應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)系列濃度點(diǎn)的質(zhì)量濃度X為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。以信噪比為3時(shí)的進(jìn)樣濃度確定儀器最低檢出濃度，計(jì)算稱樣量為2 g，定容體積為50 mL時(shí)5種還原糖的方法檢出限。5種還原糖組分的標(biāo)準(zhǔn)曲線線性方程、相關(guān)系數(shù)及檢出限見表1。5種還原糖組分在1.0～10.0 mg/mL線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)r均大于0.998，方法檢出限均為0.5 g/100 g，符合GB 5009.8—2016的要求。

表1 5種還原糖組分的線性方程、相關(guān)系數(shù)及檢出限

2.3 方法的加標(biāo)回收率與精密度

在某已知5種還原糖含量的蜂蜜試樣中添加低、中、高3種濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，每個(gè)添加濃度水平進(jìn)行6次平行測定，計(jì)算方法的加標(biāo)回收率與精密度RSD。5種還原糖組分加標(biāo)回收率與精密度的統(tǒng)計(jì)結(jié)果見表2。蜂蜜中5種還原糖組分低、中、高3種濃度的加標(biāo)回收率為82.4%～109.7%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD為0.87%～3.77%，表明該方法測定蜂蜜中果糖、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖和乳糖的回收率與精密度良好，符合GB/T 27404—2008中的要求[6]。

表2 5種還原糖組分的加標(biāo)回收率及精密度試驗(yàn)結(jié)果

3 結(jié)論

本研究參照GB 5009.8—2016中高效液相色譜法，建立了HPLC-RID測定蜂蜜中果糖、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖及乳糖5種還原糖的方法，試樣處理過程簡單、準(zhǔn)確度高、精密度好，通過考察方法的線性關(guān)系、檢出限、回收率與精密度，均符合GB 5009.8—2016與GB/T 27404—2008中的相關(guān)規(guī)定，滿足食品檢驗(yàn)檢測機(jī)構(gòu)對蜂蜜中果糖、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖及乳糖5種還原糖準(zhǔn)確、快速、高通量的檢測需求，對相關(guān)部門加強(qiáng)蜂蜜質(zhì)量的監(jiān)督抽檢、風(fēng)險(xiǎn)監(jiān)測具有參考意義。