胥小榮，王照友，王艷英，孔慶巖

（1.承德市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心，河北承德 067000；2.承德市雙橋區(qū)市場(chǎng)監(jiān)督管理局，河北承德 067000）

我國(guó)的白酒歷史最為悠久。白酒由1種或多種糧谷釀造而成，通常以高粱、大米、小麥、大麥和玉米為原料[1]。此外，有些白酒由諸如小米與薏仁（我國(guó)的珍珠大麥）等類的禾本科植物經(jīng)發(fā)酵、蒸餾工序釀造而成。選擇何種原料釀酒取決于釀酒人的釀制需求。白酒的類型主要有清香型、濃香型、醬香型（似醬油味），占據(jù)白酒總份額的60%～70%。不同香型的白酒呈味酸不盡相同，比如清香型白酒呈味酸主要為乙酸、濃香型白酒呈味酸主要為己酸、老白干主要呈味酸為乳酸等[2-3]。

目前，檢測(cè)乙酸的方法主要有氣相色譜法、液相色譜法、離子色譜法和分光光度法等方法[4]。白酒屬于易揮發(fā)的樣品，選取不同的檢測(cè)設(shè)備會(huì)對(duì)檢驗(yàn)數(shù)據(jù)結(jié)果有一定的影響，應(yīng)用離子色譜法，樣品前處理簡(jiǎn)便不容易造成損失，檢測(cè)時(shí)間短，儀器具有高靈敏度，結(jié)果準(zhǔn)確等特點(diǎn)。本文選取離子色譜法為白酒中乙酸的測(cè)定方法，通過(guò)查閱資料建立離子色譜法檢驗(yàn)白酒中乙酸的方法，并結(jié)合自身在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的經(jīng)驗(yàn)，對(duì)試驗(yàn)過(guò)程進(jìn)行了一定的優(yōu)化，主要針對(duì)當(dāng)前運(yùn)用離子色譜法測(cè)定白酒酒中乙酸方法研究關(guān)注點(diǎn)少、考慮的關(guān)鍵控制點(diǎn)不全、檢測(cè)時(shí)間較長(zhǎng)等問(wèn)題。優(yōu)化檢測(cè)分析方法能夠?qū)θ姘芽匕拙粕a(chǎn)過(guò)程中的質(zhì)量、保證食品安全起到更加有效的監(jiān)督作用，促進(jìn)食品行業(yè)朝著更安全更嚴(yán)謹(jǐn)?shù)姆较虬l(fā)展。

《白酒分析方法[附修改單]》（GB/T 10345—2007）中未規(guī)定乙酸、己酸的檢驗(yàn)方法，白酒產(chǎn)品相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)的理化要求項(xiàng)目總酸都是以乙酸計(jì)，但均未規(guī)定檢驗(yàn)方法，目前，白酒分析方法（征求意見(jiàn)稿）中單列出乙酸、己酸的檢驗(yàn)方法，且乙酸只能使用氣相色譜法進(jìn)行檢測(cè)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

白酒，市售；乙酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液，天津市大茂化學(xué)試劑廠；乳酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

離子色譜儀（配備電導(dǎo)檢測(cè)器和自動(dòng)再生抑制器），型號(hào)：ICS1600，賽默飛；超純水儀，型號(hào)：Milli.Q，美國(guó) Millipore公司；電子天平，型號(hào)ML802/02，梅特勒儀器（上海）有限公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 色譜條件

ASll-19陰離子分離柱（4 mm×250 mm），AGll-19保護(hù)柱（4 mm×100 mm）；淋洗方式：等度淋洗；流動(dòng)相：設(shè)備自動(dòng)生成所需淋洗液，KOH溶液；檢測(cè)器：電導(dǎo)檢測(cè)器；流動(dòng)相流速：1.00 mL/min；柱溫箱溫度：35 ℃；樣品進(jìn)樣量50 μL[5]。

1.3.2 樣品前處理

柚皮苷在大鼠在體單向腸灌流模型上的吸收特征研究…………………………………………………… 陳潤(rùn)芝等（9）：1194

取10.0 mL樣品放入50 mL離心管中，在10 000 r/min條件下離心15 min，取上清液0.50 mL至100 mL容量瓶中，超純水定容至刻度，搖勻并靜置10 min，取10.0 mL此液，過(guò)0.22 μL水相過(guò)濾膜，棄去前面3.00 mL，收集后面清液，上機(jī)檢測(cè)[5]。

1.3.3 方法建立

（1）色譜柱設(shè)定。選擇陰離子色譜柱，目前市售陰離子色譜柱主要為ASl1、ASl 1-HC、ASl9等類型，進(jìn)行分離對(duì)比實(shí)驗(yàn)。通過(guò)乙酸和乳酸混合標(biāo)準(zhǔn)溶液出峰時(shí)間、峰型、數(shù)據(jù)結(jié)果因素，選出最佳的色譜柱類型。

（2）流速設(shè)定。根據(jù)參考文獻(xiàn)及相關(guān)方法設(shè)定5種不同流速，分別為0.50 mL/min、0.75 mL/min、1.00 mL/min、1.25 mL/min和 1.50 mL/min，根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果選擇最適流速。

（3）柱溫設(shè)定。選擇不同柱溫，規(guī)避環(huán)境溫度對(duì)實(shí)驗(yàn)造成的影響，參照液相色譜法流動(dòng)相溫度控制，選取25 ℃、30 ℃、35 ℃、40 ℃和45 ℃，根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果選擇最佳柱溫。

（4）淋洗度設(shè)定。查閱相關(guān)文獻(xiàn)，淋洗條件可選擇等度洗脫與梯度洗脫；淋洗液淋洗度分別為2 mmol/L、3 mmol/L、5 mmol/L和8 mmol/L，根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果選擇最佳淋洗度。

2 結(jié)果與分析

2.1 白酒測(cè)定方法的建立

2.1.1 色譜柱

根據(jù)1.3.3（1）條件進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)色譜柱ASl1-19是一種高容量、強(qiáng)親水性色譜柱，出峰時(shí)間適當(dāng)，峰型好，適用白酒中乙酸和乳酸同時(shí)測(cè)定。

2.1.2 流速

根據(jù)1.3.3（2）條件進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)不同數(shù)量級(jí)流速對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果影響比較大。①在低流速0.50 mL/min和0.75 mL/min時(shí)，由于流速比較低，致使壓力偏低，存在出峰時(shí)間靠后、峰寬大、靈敏度不高等問(wèn)題；②中流速1.00 mL/min時(shí)，流速適度，壓力適中，出峰時(shí)間達(dá)到預(yù)期目標(biāo)、峰型完美，靈敏度高；③高流速1.25 mL/min和1.50 mL/min，流速較高，致使系統(tǒng)壓力偏高，直接影響色譜柱使用時(shí)效，造成試驗(yàn)成本過(guò)高。通過(guò)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，綜合考慮各種因素，最后選擇1.00 mL/min為本實(shí)驗(yàn)流速。

2.1.3 柱溫

根據(jù)1.3.3（3）條件進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，在確定流速為1.00 mL/min的條件下，結(jié)果發(fā)現(xiàn)溫度低，出峰時(shí)間較晚，溫度高，峰分離不好，故選擇35 ℃為柱溫箱的溫度。

2.1.4 淋洗條件的選擇

根據(jù)1.3.3（4）條件進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，由于乙酸和乳酸2種物質(zhì)極性差異不大，且出峰時(shí)間較早，無(wú)需選擇梯度洗脫，只需等度即可，根據(jù)出峰時(shí)間、分離度、峰型以及泵壓力等條件，選擇淋洗濃度為2.0 mmol/L。

2.2 方法學(xué)考察

2.2.1 線性范圍與檢出限

在0.8～1.6 mg/L、0.4～0.8 mg/L質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，進(jìn)行了7個(gè)不濃度水平標(biāo)準(zhǔn)工作液的測(cè)定，以組分質(zhì)量濃度（X）為橫坐標(biāo)，以組分峰面積（Y）為縱坐標(biāo)，進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)曲線線性擬合，線性相關(guān)系數(shù)R均＞0.99，線性良好；檢出限在0.000 1～0.072 8 mg/L。

2.2.2 回收率

根據(jù)不同白酒中乙酸和乳酸含量，國(guó)家安全標(biāo)準(zhǔn)中有關(guān)指標(biāo)規(guī)定，選取0.8 mg/L、1.0 mg/L、1.2 mg/L 3個(gè)不同濃度，添加至樣品中進(jìn)行回收率測(cè)定實(shí)驗(yàn)，來(lái)驗(yàn)證設(shè)定的實(shí)驗(yàn)方法的準(zhǔn)確度。

通過(guò)實(shí)驗(yàn)獲得組分測(cè)定回收率為95%～112%，回收率結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）在1.07%～10.23%，準(zhǔn)確度較好。由此可見(jiàn)，此試驗(yàn)方法設(shè)計(jì)合理。

2.2.3 精密度

根據(jù)《化學(xué)分析方法驗(yàn)證確認(rèn)和內(nèi)部質(zhì)量控制要求》（GB/T 32465—2015），選取代表性樣品進(jìn)行精密度驗(yàn)證。每個(gè)樣品同一濃度進(jìn)行實(shí)驗(yàn)次數(shù)為6，根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。通過(guò)計(jì)算得知，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為3.38%～4.97%，該精密度符合化學(xué)分析方法檢測(cè)技術(shù)要求，證明該檢測(cè)方法精密度良好。

2.3 實(shí)際樣品測(cè)定

由于目前國(guó)家安全標(biāo)準(zhǔn)中涉及產(chǎn)品參數(shù)技術(shù)規(guī)定主要有乙酸和乳酸，本試驗(yàn)主要進(jìn)行乙酸、乳酸測(cè)定。取15種白酒用該法進(jìn)行2種組分測(cè)定，其離子色譜圖見(jiàn)圖1，各組分測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 不同白酒中有機(jī)酸含量測(cè)定結(jié)果

圖1 2種有機(jī)酸混合標(biāo)準(zhǔn)溶液離子色譜圖

白酒的品質(zhì)體現(xiàn)在呈味物質(zhì)含量多少，呈味物質(zhì)主要是乙酸乙酯、乙酸己酯等，酯類物質(zhì)形成與白酒中有機(jī)酸形式直接相關(guān)，白酒中主要有機(jī)酸是乙酸和乳酸，其含量大小是白酒質(zhì)量的一個(gè)重要標(biāo)志。通過(guò)試驗(yàn)法可以看出，不同品種中有機(jī)酸含量差異比較大，乙酸和乳酸含量高的樣品，市場(chǎng)售價(jià)相對(duì)較高，有機(jī)酸含量較低，符合國(guó)家安全標(biāo)準(zhǔn)的樣品，樣品品質(zhì)一般，市場(chǎng)售價(jià)也較低。通過(guò)對(duì)不同香型白酒中乙酸的測(cè)定，雖然含量較高的乙酸和乳酸分離度不夠高，但是整體基線平穩(wěn)，各組分色譜峰形尖銳，色譜峰分離度較理想，說(shuō)明檢測(cè)方法穩(wěn)定、實(shí)用。

3 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)影響因素如色譜柱、流速、柱溫和淋洗液濃度等分析，確定一種適合檢驗(yàn)檢測(cè)機(jī)構(gòu)或白酒企業(yè)檢驗(yàn)室白酒中乙酸和乳酸組分利用離子色譜進(jìn)行實(shí)驗(yàn)的分離的條件，建立運(yùn)用離子色譜法快速測(cè)定白酒中乙酸含量的實(shí)驗(yàn)方法。結(jié)果表明，色譜柱選擇ASl1-19，流速為1.00 mL/min，柱溫30 ℃，淋洗濃度為2 mmol/L，乙酸和乳酸組分分離效果理想。該實(shí)驗(yàn)方法具有操作簡(jiǎn)便、靈敏度高、檢驗(yàn)時(shí)間短等優(yōu)點(diǎn)，完全適于檢驗(yàn)檢測(cè)機(jī)構(gòu)與白酒企業(yè)中白酒中乙酸含量快速測(cè)定。提高乙酸和含量檢測(cè)分析方法效率，能夠?qū)θ姘芽匕拙粕a(chǎn)過(guò)程中的質(zhì)量、保證食品安全起到更加有效的監(jiān)督作用，促進(jìn)了食品行業(yè)朝著更安全更嚴(yán)謹(jǐn)?shù)姆较虬l(fā)展。