王麗萍

乙型病毒性肝炎(簡稱乙肝)，是指患者受乙肝病毒(HBV)入侵，致使肝臟發(fā)生病變及其他器官受損的一種臨床常見慢性傳染性疾病，具有發(fā)病緩慢、高傳染率及傳播途徑廣泛等特征[1]。乙肝主要是通過精液或血液等途徑傳播，患者若無法得到及時有效的治療，則較易并發(fā)肝癌、肝衰竭及肝硬化等，嚴重者會直接威脅到生命安全[2]。大多數(shù)乙肝患者發(fā)病癥狀不明顯，易出現(xiàn)誤診與漏診現(xiàn)象。因此，給予患者快速準確的診斷具有十分重要的意義。目前，臨床對乙肝患者進行診斷及對預后進行評估的主要依據(jù)是乙肝病毒DNA與乙肝病毒血清學檢測結果。但由于乙肝病毒DNA檢測對實驗室條件的要求較高，因此臨床上大多是給予患者血清學乙肝五項檢測方式[3]。酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)憑借其簡便的操作及低廉的成本已成為目前臨床應用較為廣泛的一種檢測方式，也是乙肝血清學標志物主要檢測方式[4]。隨著近年來生物醫(yī)學技術的飛速發(fā)展，化學發(fā)光法(ECLIA)以其快速的檢測速度、良好的精密度、高敏感性、較寬的線性范圍及廣泛的應用范圍等優(yōu)勢，被逐漸引入臨床診斷治療中。由于ECLIA與ELISA各異的檢測特性與原理，會導致其在乙肝血清學標志物的檢測結果不同[5]。目前，臨床醫(yī)學界對以上兩種檢測方式的診斷價值仍無統(tǒng)一的定論?；诖?，本資料主要探討對乙肝患者臨床治療中分別選用ECLIA與ELISA進行檢測的效果及價值，現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2019年12月—2020年12月于本院門診部就診的乙肝患者66例作為研究對象。A組33例，其中：男15例，女18例；年齡：20～57(33.7±3.7)歲。B組33例，其中：男14例，女19例；年齡：19～58(33.2±2.6)歲。2組患者性別、年齡等基線統(tǒng)計學資料比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會審核批準。

1.2 納入及排除標準 納入標準：(1)符合《病毒性肝炎防治方案》[6]中乙型肝炎診斷標準；(2)均屬于門診病例患者；(3)已簽署相關知情同意書。排除標準：(1)伴有惡性腫瘤者；(2)存在重要臟器(心、腎)等嚴重功能不全者；(3)存在神經(jīng)系統(tǒng)疾病、認知障礙、精神性疾病，治療依從性差者。

1.3 方法

1.3.1 標本采集 采取患者晨時空腹條件下的靜脈血10 mL，以3 000 r/min的轉(zhuǎn)速離心15 min后取上層血清，置于-20 ℃的冰箱內(nèi)待檢。按先后順序進行ELISA與ECLIA檢驗。

1.3.2 ELISA檢測 采用伯樂iMark型酶標儀、伯樂1575型洗板機進行檢測，試劑由上海榮盛生物藥業(yè)有限公司提供，對血清樣本實施雙抗體夾心法檢測HBsAg。全程操作嚴格按試劑說明書進行，將微孔反應條與試劑盒放在室溫下平衡30 min，然后將待檢血清及陰陽性對照加入微孔反應條中，進行封片后將其置于37 ℃的水浴中孵育60 min后取出，再加入酶結合物，實施封板后將其置于37 ℃的水浴中孵育30 min后取出，將微孔反應條中的液體棄去，并進行反復5次洗滌后，加入顯色劑再孵育30 min后加入終止液，用酶標儀讀數(shù)，若血清OD值≥臨界值，即為陽性。另HBsAb采用雙抗原夾心法，若血清OD值≥臨界值，即為陽性。HBeAg采用雙抗體夾心法，若血清OD值≥臨界值，即為陽性。HBeAb采用中和競爭法，若血清OD值≥臨界值，即為陰性。HBcAb采用競爭抑制法，若血清OD值≥臨界值，即為陰性。所有操作步驟嚴格按說明書進行。

1.3.3 ECLIA檢驗 采用四川邁克生物股份有限公司的i3000型全自動化學發(fā)光免疫分析儀進行檢測，試劑為其配套試劑。采用磁微?；瘜W發(fā)光免疫分析法，利用雙抗體夾心法原理檢測HBsAg，通過免疫分析兩步法實現(xiàn)對樣本的檢測。第一步，將樣本和包被抗乙型肝炎病毒表面抗原單克隆抗體的免疫磁微?；旌?，樣本中的HBsAg與抗乙型肝炎病毒表面抗原單克隆抗體結合，形成抗原—抗體復合物；第二步，洗滌后加入吖啶酯標記的抗乙型肝炎病毒表面抗原多克隆抗體，形成抗體—抗原—抗體免疫復合物；再次洗滌，加入底物液發(fā)生化學發(fā)光反應，測量相對發(fā)光值，相對發(fā)光值與樣本中HBsAg的含量成正比關系。另HBsAb采用雙抗原夾心法，HBeAg采用雙抗體夾心法，HBeAb采用中和競爭法，HBcAb采用間接法。

1.3.4 重復性檢驗 將22份低、中、高濃度的乙肝表面抗原(HBsAg)陽性血清進行冷凍保存處理，每天測量1次，對其中的11份進行批間重復性計算，另11份則進行批內(nèi)重復性計算。

1.4 觀察指標 (1)觀察計算2組檢測準確度。(2)觀察2組乙肝5項陽性率的檢測結果。陽性判定標準：若檢測值大于等于參考上限值則判定為陽性。各指標參考上限值標準如下：乙肝表面抗原(HBsAg)為0.05 IU/mL；乙肝表面抗體(HBsAb)為10.0 mIU/mL；乙肝e抗原(HBeAg)為0.1 IU/mL；乙肝e抗體(HBeAb)為0.2 IU/mL；乙肝核心抗體(HBcAb)為0.6 IU/mL[7]。(3)觀察對比2組在低、中、高三種濃度的HBsAg批內(nèi)與批間的檢測重復率。

2 結果

2.1 2種檢測方法檢測準確度比較 A組檢測乙肝5項的準確度為93.93%，高于B組的75.75%，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 2種檢測方法的檢測準確度比較 (例)

2.2 2種檢測方法檢測乙肝5項的陽性率比較 A組檢測HBsAg、HBeAg及HBeAb的陽性率高于B組(P<0.05)；2組檢測HBsAb與HBcAb的陽性率比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。見表2。

表2 2種檢測方法檢測乙肝5項的陽性率比較

2.3 2組檢測重復率比較 2組對高濃度HBsAg含量批內(nèi)與批間的重復率比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；2組對低、中濃度HBsAg含量批內(nèi)與批間檢測重復率高于B組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表3。

表3 2組檢測重復率比較

3 討論

乙肝是一種強傳染性疾病，主要是由于患者受乙肝病毒的感染所致。乙肝病毒長時間潛伏于人體，當其被激活時，就會引發(fā)乙型肝炎[8-9]。乙肝患者發(fā)病期并無明顯的臨床癥狀，因此檢測過程中患者誤診與漏診率均較高。乙肝患者隨著病情的加重會并發(fā)肝硬化或肝癌，不僅對其身心健康造成嚴重影響，還會威脅到其生命安全[10]。因此，給予乙肝患者早期準確的診斷對其臨床治療與預后均具有非常重要的意義。乙肝的防治工作主要是遵循以預防為主，預防與治療相互結合的原則。目前，檢測乙肝病毒血清的主要方法為ECLIA與ELISA檢測法[11]。其中ELISA檢測法具有操作簡便、價格低廉等優(yōu)勢，可用于檢測大批量標本，但此種方法僅可實施定性分析，且操作過程易受其他因素影響，進而對檢驗結果造成影響[12]。

ELISA檢驗法又名固相酶聯(lián)免疫法，是使用酶對抗原(抗體)進行標記的反洗技術[13]。酶具有高效生物催化作用，可促使抗原(抗體)于幾分鐘后被識別出來。該種檢測方式技術可靠，且較易自動化，是目前傳統(tǒng)的HBsAg篩查方式[14]。但有研究[15]表明，ELISA法使用的是間接法測定，其不能實現(xiàn)定量分析，加之操作過程較易受到孵育時間、洗板等眾多因素的影響，檢測結果通常會出現(xiàn)一定誤差；且難以對乙肝病毒感染進行動態(tài)觀察；此外，該種檢驗方式因微孔板間的間隔距離較近，加之操作時間相對較長，易受各種因素影響而受污染，從而影響檢驗結果；同時，其對高濃度血清樣本進行檢測時易產(chǎn)生假陰性，檢測準確率欠佳。本資料結果中，ECLIA檢測方式的檢測準確率及對HBsAg、HBeAg及HBeAb的陽性檢出率均高于ELISA檢驗法，說明ECLIA檢測方式在乙肝血清的檢測上準確率更優(yōu)，此與上述研究結果相近。分析原因可能是ECLIA是目前最科學且先進的一種自動化標記免疫測定系統(tǒng)，其結合了電子發(fā)光技術、納米微粒子技術、生物素一親和素系統(tǒng)、抗原一抗體免疫反應及電磁場分離等，是高靈敏度的化學發(fā)光測定技術與高特異性的免疫反應技術相互結合的產(chǎn)物。ECLIA檢測原理是運用電化學發(fā)光劑聯(lián)合過氧化物酶對抗體(抗原)進行標記，經(jīng)抗原-抗體反應及磁珠分離，在電極表面進行特異性化學發(fā)光反應，通過此反應連接檢測對象和酶，再使用免疫反應結合檢測固相載體上的抗原與檢測對象，最后加入底物以顯色，憑借顯現(xiàn)顏色的深淺對抗體情況進行判斷，具有較高的靈敏性和特異性。ECLIA是通過光電信號進行判斷，因此突變抗體對其影響度較少，且其還可快速做出反應，靈敏度高；其標記物的來源較為豐富，可對各種逃逸的變異株進行有效識別，能免除人為因素對檢驗結果產(chǎn)生的干擾，因此檢測結果準確率更高。ECLIA的載體是順應性微粒，經(jīng)電磁鐵控制，具有標準化與自動化的檢測優(yōu)勢，能有效避免因人工操作所導致的檢驗誤差，進而提升檢驗準確度；此外，檢測系統(tǒng)能直接發(fā)光，無需借助外部光源，有利于提升系統(tǒng)的穩(wěn)定性，進一步確保了檢測的精準度；同時，來源于電磁鐵的電磁能迅速消失，可對抗體和復合抗體分離進行游離抵抗，能有效降低游離抗體所致的假陰性，提升檢測特異性；ECLIA具有較寬的線性范圍，發(fā)光強度介于4～6個數(shù)量級，與測定物呈線性關系，能有效防止“鉤狀效應”，提升檢測特異性和靈敏度。本資料結果中，ECLIA檢測法在中、低濃度HBsAg含量批內(nèi)與批間的重復率均顯著高于ELISA檢驗法，而2種檢驗方式對高濃度的HBsAg含量批內(nèi)與批間的重復率均較高，且組間相較無明顯差異，說明ECLIA檢驗法能更有效的檢出低濃度的HBsAg，其原因可能是ECLIA檢測法具有較高的靈敏度，因此對低濃度標志物的檢測率也更優(yōu)，能更為科學且有效的控制傳染源，具有更高的臨床應用價值。

綜上所述，乙肝病毒血清學檢驗中應用ECLIA與ELISA兩種檢測方式均能獲得較好的檢測價值，但ECLIA檢驗方法對乙肝陽性的檢出更為準確，并能檢出較低濃度的HBsAg，因此其在乙肝血清學的診斷中效果更加理想。