莫志軍， 莫?jiǎng)P迪， 鄧 潔

(永州職業(yè)技術(shù)學(xué)院， 湖南 永州 425000)

生姜(ZingiberofficinaleRosc.)是姜科(Zingiberaceae)姜屬(ZingiberBoehmer)多年生宿根草本植物，是藥食兩用經(jīng)濟(jì)作物，集調(diào)味、食品加工和藥用為一體的多用蔬菜[1-2]。由于利用地下塊莖無性繁殖，每667 m2需要種姜200～300 kg，用種量大，繁殖系數(shù)低[3-4]。連年留種造成病毒、病菌累集嚴(yán)重，造成產(chǎn)量降低，一般造成減產(chǎn)30%～50%[5]。為了提高生姜的繁殖系數(shù)，弄清激素對雙牌虎爪姜快速繁殖的影響，進(jìn)行了不同激素配方的試驗(yàn)[6-7]。

1 材料與方法

1.1 材 料

材料來自雙牌虎爪姜原產(chǎn)地湖南省永州市雙牌縣上梧江鄉(xiāng)。

1.2 試 劑

N 6培養(yǎng)基大量元素為：硝酸鉀2 830 mg·L-1，硫酸銨463 mg·L-1，硫酸鎂185 mg·L-1，磷酸二氫鉀400 mg·L-1，氯化鈣166 mg·L-1。N 6培養(yǎng)基微量元素為：硫酸錳4.4 mg·L-1，硫酸鋅1.5 mg·L-1，碘化鉀0.8 mg·L-1，硼酸1.6 mg·L-1。

N 6培養(yǎng)基有機(jī)物為：肌醇100 mg·L-1，甘氨酸2.0 mg·L-1，煙酸0.5 mg·L-1，鹽酸吡哆醇0.5 mg·L-1，鹽酸硫胺素0.1 mg·L-1。

鐵鹽：硫酸亞鐵27.8 mg·L-1，乙二胺四乙酸鈉37.3 mg·L-1。

激素：6-BA(6-芐基氨基嘌呤)、NAA(萘乙酸)、KT(激動素)和氯化膽堿。

其他：70%乙醇，新潔爾滅，0.1%升汞(HgCl2)，無菌水，瓊脂，蔗糖。

1.3 方 法

1.3.1生姜催芽

取生姜洗凈，瀝干，然后在培養(yǎng)箱內(nèi)進(jìn)行暗培養(yǎng)。保持培養(yǎng)箱內(nèi)濕度75%，溫度25 ℃，直至催出芽達(dá)到1～2 cm時(shí)取用。

1.3.2接種方法

取長1～2 cm的虎爪姜芽在自來水下沖洗2～3 h，然后用0.2%新潔爾滅浸泡10 mim，無菌水沖洗2～3次，在無菌環(huán)境中用70%酒精處理30 s，無菌水沖洗2～3次，然后再用0.1%升汞浸泡8 min，用無菌水沖洗5次。剝?nèi)ド客馊~，留取0.5～1 cm芽尖，移入相應(yīng)的培養(yǎng)瓶中，每瓶移入3個(gè)芽點(diǎn)。每個(gè)處理接種21瓶，3次重復(fù)。每個(gè)處理放到(25±2)℃的培養(yǎng)架上，每天用2 500 lx光照12 h。

1.3.3統(tǒng)計(jì)方法

分別在接種后14 d、28 d和42 d統(tǒng)計(jì)發(fā)芽數(shù)，以芽長0.5 cm為芽數(shù)計(jì)數(shù)。不足0.5 cm長的不計(jì)數(shù)，凡有分化的芽點(diǎn)數(shù)除接種點(diǎn)數(shù)為分化率，各處理分別分階段統(tǒng)計(jì)總分化芽數(shù)。增殖倍數(shù)為某階段的分化芽數(shù)減前階段的芽數(shù)(點(diǎn)數(shù))除接種基數(shù)(點(diǎn)數(shù))。增殖率為某階段的增加芽數(shù)除接種基數(shù)的百分率。

1.3.4不同激素處理

采用N 6培養(yǎng)基，激素分別為6-BA、NAA、氯化膽堿和KT，其配比詳見表1。

表1 不同激素處理

2 結(jié)果與分析

2.1 不同激素配比對姜芽分化率的影響

從表2看出，接種14 d，A 3處理的雙牌虎爪姜每個(gè)芽點(diǎn)都有分化，芽分化率最高，達(dá)100%。其他幾組激素配比姜芽分化都有未分化的芽點(diǎn)，分化率在80%左右。隨6-BA濃度的提高，分化率有所提高。培養(yǎng)28 d后觀察統(tǒng)計(jì)，所有芽點(diǎn)都有分化，分化率都達(dá)到100%。隨著幼芽的分化，幼根也同步發(fā)生。

表2 不同激素配方對姜芽分化率的影響

表3 不同激素配方對姜芽的增殖影響

由于6-BA和NAA均能促進(jìn)幼芽產(chǎn)生，隨著6-BA濃度增加分化更快，氯化膽堿可能促使6-BA的作用發(fā)揮得更佳。這與黃菊輝等[8]研究認(rèn)為6-BA和NAA可促進(jìn)生姜幼芽發(fā)生，且具有相互增益效應(yīng)是相一致。

2.2 不同激素配方對姜芽增殖的影響

不同的激素配方對雙牌虎爪姜芽增殖影響不同，培養(yǎng)14 d以A 3處理配方為最佳，增殖倍數(shù)達(dá)3.06，比A 1處理增長率高53.97%；比A 2處理增長率高47.62%。比A 4處理增長率高49.21%。

培養(yǎng)28 d后顯示A 3處理的配方為最佳，增殖倍數(shù)達(dá)3.95。但是A 4處理的配方后期增殖很快，增殖倍數(shù)達(dá)3.41，均超過了A 1和A 2處理配方。培養(yǎng)42 d后A 3處理的總芽數(shù)268，增殖倍數(shù)4.25，與其他幾個(gè)處理相比，增殖倍數(shù)不明顯。比A 2處理只增加10個(gè)芽，增殖倍數(shù)只增加0.15；比A 1處理配方只增加24個(gè)芽，增殖倍數(shù)增加0.38；比A 4處理增殖倍數(shù)增加0.36。

不管培養(yǎng)多少天，雙牌虎爪姜芽的增殖均以A 3處理配方的增殖倍數(shù)最多。

這些激素的用量效果與杭玲等[9]用廣西靖西縣大肉姜試驗(yàn)，李芳等[10]用山東生姜研究，李曉波等[11]的姜芽研究，吳家麗等[12]對白水生姜研究，趙卓等[13]對湖北來鳳縣的鳳頭姜研究基本相同，他們使用6-BA濃度在1.5～3.0 mg·L-1之間，NAA濃度在0.1～0.2 mg·L-1之間。本實(shí)驗(yàn)添加了氯化膽堿，比只用6-BA和NAA效果更佳。

2.3 不同時(shí)段不同激素配方對姜芽分化影響

從表4看出，前14 d姜芽的增殖速度最快，增殖率都超過150%，其中A 3處理的增殖率最高，達(dá)206.35%。但是28 d和42 d，所有激素配方的增殖率都低于100%。28 d仍以A 3處理的增殖率最高(88.89%)。42 d A 3處理的增殖率只有30.16%，最低。A 1、A 2處理28 d比14 d也下降了，但42 d又比28 d的增殖率有所提高。A 3、A 4處理增殖率連續(xù)下降，28 d比14 d低，42 d又比28 d低。因此，認(rèn)為培養(yǎng)14 d幼芽增殖率最快，隨著培養(yǎng)時(shí)間的推移，姜芽分化慢，增殖率降低，但A 3配方的6-BA和NAA的作用越來越小，可能是氯化膽堿使其作用迅速發(fā)揮了。A 1、A 2配方由于沒有氯化膽堿的誘導(dǎo)，雖然姜芽的增殖率降低了，但培養(yǎng)28 d后再培養(yǎng)14 d又有所增加。NAA和KT的相互作用也是起初很大，后逐漸減弱。

增殖培養(yǎng)可以在培養(yǎng)14 d后轉(zhuǎn)到無激素培養(yǎng)基上培養(yǎng)，利于分蔸種植。為了使姜芽健壯，培養(yǎng)28 d左右為佳。

2.4 不同激素之間的差異比較

培養(yǎng)14 d，A 3處理比A 1、A 2、A 4處理姜芽的增長分別多53.97%、47.62%、49.21%。A 1、A 2、A 4處理之間差異很小。培養(yǎng)28 d后，A 3、A 4處理間的差異變小(僅4.76%)，A 3比A 1、A 2的增長率仍然多30.16%和28.57%。但到了42 d后，A 3比A 1、A 2、A 4姜芽增加緩慢，其他幾個(gè)處理增長反而比A 3快。這也說明了培養(yǎng)時(shí)間以28 d為佳，繼續(xù)培養(yǎng)雖有所增多，但速度緩慢。這既延長繁殖時(shí)間，又不見很好效果。特別是A 3處理配方不要培養(yǎng)太久，以14 d為佳，最多不超過28 d。

從表5看出，在培養(yǎng)14 d，A 1、A 2、A 4三種處理配方差異不大，培養(yǎng)28 d后，A 4分化加快，A 3減慢，兩者之間的差異也不大，但與A 1、A 2的差異較大。

表5 不同激素之間的比較

3 小結(jié)與討論

試驗(yàn)結(jié)果表明，雙牌虎爪姜的姜芽分化以A 3處理(N 6+6-BA 2.5 mg·L-1+NAA 0.1 mg·L-1+氯化膽堿200 mg·L-1)配方為增殖最佳培養(yǎng)基配方，雙牌虎爪姜芽分化最快，增殖最快，增殖倍數(shù)最高。增殖培養(yǎng)時(shí)間以14 d為最佳，最多不超過28 d。該試驗(yàn)結(jié)果與白水生姜，鳳頭姜，山東大姜的激素研究基本一致，但其他研究者用的是MS培養(yǎng)基。

6-BA隨濃度增加，姜芽分化增多。KT的使用量較大，效果沒有6-BA好。6-BA加了氯化膽堿效果更好，更快，但沒加氯化膽堿的6-BA的作用慢且持久，這可能是氯化膽堿促進(jìn)了6-BA和NAA的相互作用，使其誘導(dǎo)雙牌虎爪姜芽的分化。至于氯化膽堿的作用機(jī)理和濃度有待進(jìn)一步研究。