牟春堂 楊文軍 王鵬舉 任國棟 劇 浩 張暄梓 張建新 郝小燕
(山西農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科學(xué)學(xué)院,晉中030801)
由于季節(jié)性和地區(qū)性的優(yōu)質(zhì)粗飼料資源缺乏,高精料飼糧在我國反芻動物生產(chǎn)中應(yīng)用非常普遍。長期飼喂高精料飼糧容易造成反芻動物瘤胃代謝異常,進(jìn)而發(fā)生瘤胃酸中毒,導(dǎo)致瘤胃內(nèi)產(chǎn)生并積累大量的異常代謝物,包括D-乳酸、組胺、色胺和脂多糖(LPS)等[1]。反芻動物長期攝入高精料飼糧,瘤胃和后腸道中低pH和高濃度LPS會導(dǎo)致細(xì)胞上皮結(jié)構(gòu)受損,細(xì)胞間緊密連接的屏障功能受到破壞,游離的LPS會遷移至循環(huán)系統(tǒng)[2]。LPS進(jìn)入循環(huán)系統(tǒng)中會引起動物氧化應(yīng)激和免疫活化,增加動物對病原的易感性。Nagaraja等[3]報道,發(fā)生瘤胃酸中毒后,外周血中中性粒細(xì)胞比例增加,淋巴細(xì)胞比例降低。吳永霞[4]研究也表明,高精料飼糧組較低精料飼糧組奶牛的外周血中白細(xì)胞和中性粒細(xì)胞數(shù)量顯著升高。
細(xì)胞免疫是動物免疫系統(tǒng)的重要組成部分,而T細(xì)胞在細(xì)胞免疫中至關(guān)重要。T細(xì)胞的過度增殖和活化均不利于機(jī)體健康。白細(xì)胞分化抗原(cluster of differentiation,CD)是存在于T細(xì)胞膜表面的主要標(biāo)志物,其中CD4和CD8分別存在于輔助性T細(xì)胞和細(xì)胞毒性T細(xì)胞的膜表面。機(jī)體CD4+T細(xì)胞比例高時,能夠迅速啟動免疫系統(tǒng)抵抗外源性病原微生物的入侵,不易感染疾病。當(dāng)機(jī)體CD8+T細(xì)胞比例高時,說明機(jī)體遭受外源感染的程度更嚴(yán)重,機(jī)體自身的免疫功能降低,需要依靠外源藥物抵抗病原[5]。因此,機(jī)體T淋巴細(xì)胞中CD4+和CD8+的細(xì)胞比例及二者的比值高低與動物機(jī)體的免疫功能密切相關(guān)。
葡萄籽原花青素(GSPs)廣泛存在于葡萄枝葉、果皮、果肉和籽實(shí)中,由不同數(shù)量的黃烷醇單體聚合而成。研究表明,植物多酚和黃酮類化合物可以增強(qiáng)動物機(jī)體抗氧化力,調(diào)節(jié)機(jī)體免疫反應(yīng),改善動物健康狀況,促進(jìn)機(jī)體生長發(fā)育[6]。邢文麗等[7]研究表明,GSPs能夠上調(diào)大鼠血清白細(xì)胞介素-12(IL-12)含量,促進(jìn)CD4+T細(xì)胞的活化,提高機(jī)體免疫功能。茅婷婷等[8]報道,GSPs可以促進(jìn)體外培養(yǎng)的大鼠脾臟淋巴細(xì)胞增殖,具有提高細(xì)胞抗氧化和細(xì)胞免疫的作用。沙蔥黃酮對綿羊免疫功能有調(diào)控作用,可以提高綿羊外周血淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率,上調(diào)CD4+T細(xì)胞比例及CD4+/CD8+比值,下調(diào)CD8+T細(xì)胞比例[9],同時促進(jìn)淋巴細(xì)胞增殖[10]。目前,關(guān)于GSPs在反芻動物的中應(yīng)用研究主要集中在對機(jī)體抗氧化能力和瘤胃內(nèi)環(huán)境調(diào)控等方面,而對于反芻動物免疫功能調(diào)控作用方面的研究很少。本試驗在高精料飼糧舍飼條件下給羔羊飼喂不同水平GSPs,旨在探究GSPs對羔羊外周血淋巴細(xì)胞亞群、淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率和凋亡率、細(xì)胞因子水平的影響,旨在為開發(fā)綿羊功能性免疫佐劑提供理論指導(dǎo),為舍飼羔羊健康、高效養(yǎng)殖提供新思路。
GSPs購自南京某生物科技有限公司,其主要成分為原花青素(96.4%)、兒茶素(0.533%)、表兒茶素(0.239%)、表沒食子兒茶素沒食子酸酯(0.225%)、表兒茶素沒食子酸酯(0.171%)。
本試驗在山西農(nóng)業(yè)大學(xué)國家肉羊產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系飼料資源崗位試驗基地進(jìn)行,選取48只4月齡、體重[(22.75±1.20) kg]相近的杜寒雜交一代公羔羊,嚴(yán)格檢疫。試驗開始前對羊舍進(jìn)行全面的清洗、消毒,對試驗羊進(jìn)行羊痘、口蹄疫和小反芻獸疫疫苗免疫。采用單因素完全隨機(jī)試驗設(shè)計,將48只試驗羊隨機(jī)分成4組,每組12只羊。各組分別在基礎(chǔ)飼糧中添加0(對照組)、10(10GSPs組)、20(20GSPs組)、40 mg/(kg BW·d)(40GSPs組)的GSPs。試驗期共60 d,其中預(yù)試期15 d,正試期45 d。
GSPs的飼喂量在正試期每周根據(jù)體重調(diào)整1次,提前用分析天平準(zhǔn)確稱取每只羔羊每日GSPs的飼喂量,在晨飼前與100 g粉狀飼料混合后,逐只一次性飼喂,確保每只羊完全采食GSPs后再投喂飼料。基礎(chǔ)飼糧精粗比例為70∶30,基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平見表1。所有羔羊單欄(3.0 m×0.8 m)飼養(yǎng),每日飼喂2次(07:00和19:00),自由采食、飲水,記錄每只羔羊日采食量。分別于正試期第1和45天晨飼前稱量試驗羊體重,計算平均日增重。
表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平(干物質(zhì)基礎(chǔ))
分別于正試期第1、15、30和45天晨飼前頸靜脈采集血液于5 mL肝素鈉采血管中,迅速帶回實(shí)驗室,待測淋巴細(xì)胞亞群。第45天同時采集2份5 mL血液,一份用于測定淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率和凋亡率;另一份用常規(guī)方法分離血清后-20 ℃保存,待測細(xì)胞因子和免疫球蛋白含量。
1.3.1 飼糧營養(yǎng)水平的測定
飼料原料及基礎(chǔ)飼糧經(jīng)粉碎后過1 mm篩,制成風(fēng)干樣品待測。干物質(zhì)、粗灰分、粗蛋白質(zhì)、粗脂肪含量參照AOAC(2000)[12]的方法測定。中性洗滌纖維和酸性洗滌纖維含量參照Van Soest等[13]的方法,采用Ankom 220纖維分析儀(美國ANKOM公司)測定。
1.3.2 外周血淋巴細(xì)胞亞群CD4+、CD8+T細(xì)胞比例的測定
外周血淋巴細(xì)胞亞群檢測參考木其爾[9]的測定方法,即取60 μL血液于流式管中,加入MOUSE ANTI SHEEP CD4∶TITC和MOUSE ANTI SHEEP CD8∶RPE抗體,室溫避光孵育20 min。再加入1×紅細(xì)胞裂解液(索萊寶生物科技有限公司,No.:R1010)2 mL,輕輕混勻,室溫避光孵育10 min。300×g離心5 min,棄上清。再加入4 mL磷酸鹽緩沖液(PBS),300×g離心5 min,棄上清。加入300 μL流式細(xì)胞儀上機(jī)液(或PBS),上流式細(xì)胞儀(FACSCalibur,美國BD公司)檢測。
1.3.3 外周血淋巴細(xì)胞的分離
利用試劑盒(索萊寶生物科技有限公司,No.:P9030)分離綿羊外周血淋巴細(xì)胞,按說明書操作步驟進(jìn)行。1)使用真空采血管采集試驗羊新鮮血液3 mL,迅速帶回實(shí)驗室;2)在無菌操作臺中,將血液與稀釋液等體積混合均勻;3)先往15 mL進(jìn)口離心管中加入4 mL的淋巴細(xì)胞分離液,再緩慢沿管壁加入5 mL稀釋血液,1 000×g離心25 min;4)用移液槍小心吸取白色中間層,再加入5 mL PBS+1%雙抗緩沖液,500×g離心5 min;5)加入5 mL 1×紅細(xì)胞裂解液,室溫裂解5 min,500×g離心5 min;6)PBS+1%雙抗緩沖液重復(fù)清洗2遍,獲得淋巴細(xì)胞;7)將收集的淋巴細(xì)胞置于5%胎牛血清(美國Gibco公司,No.:26010074)和1%雙抗RPMI-1640的細(xì)胞培養(yǎng)液中,待用。
1.3.4 外周血淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率的測定
外周血淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率檢測參考朱麗君等[14]報道的方法并加以改進(jìn)。將已分離的外周血淋巴細(xì)胞濃度調(diào)整為2×106個/mL,取100 μL接種于96孔板中,標(biāo)記組別,設(shè)置對照組,每個樣品3個重復(fù)。試驗組每孔加入10 g/mL刀豆蛋白(ConA)100 μL,對照組加入等體積PBS,在37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱(型號:BC-J80-S,上海博迅醫(yī)療生物儀器股份有限公司)中培養(yǎng)48 h。培養(yǎng)結(jié)束前4 h每孔加入CCK-8溶液10 μL,置于培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。培養(yǎng)結(jié)束,取出96孔板,用酶標(biāo)儀測定450 nm處的吸光度值(OD450)。按以下公式計算羔羊外周血淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率:
外周血淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率(%)=100×(試驗組
OD450-對照組OD450)/對照組OD450。
1.3.5 外周血淋巴細(xì)胞凋亡率的測定
外周血淋巴細(xì)胞凋亡率的測定參考木其爾[9]的方法。將羔羊外周血淋巴細(xì)胞懸液置于離心管中,1 000×g離心5 min,棄掉細(xì)胞培養(yǎng)液,再用預(yù)冷的PBS漂洗2次,收集細(xì)胞。使用1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,并調(diào)整細(xì)胞濃度至1×106個/mL。吸取100 μL細(xì)胞懸液至流式管中,再加入膜聯(lián)蛋白V(Annexin V)異硫氰酸熒光素(FITC)和碘化丙啶(PI)各5 μL,輕輕混合均勻,室溫避光孵育15 min。染色孵育后,加入1×Binding buffer工作液400 μL,1 h內(nèi)使用流式細(xì)胞儀檢測。
1.3.6 血清細(xì)胞因子和免疫球蛋白含量的測定
采用比色法測定血清中免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白M(IgM)和免疫球蛋白A(IgA)含量;采用酶聯(lián)免疫吸附測定試驗(ELISA)法測定血清中白細(xì)胞介素-2(IL-2)、白細(xì)胞介素-4(IL-4)、白細(xì)胞介素-6(IL-6)和干擾素-γ(IFN-γ)含量,ELISA試劑盒購自南京建成生物工程研究所。
利用Excel 2013進(jìn)行試驗數(shù)據(jù)初步整理,采用SAS 9.2軟件進(jìn)行單因素方差分析(one-way ANOVE),并采用Duncan氏法進(jìn)行多重比較,通過正交多項式分析處理的線性和二次效應(yīng)。P<0.05表示差異顯著,0.05≤P<0.10表示有顯著的趨勢。
GSPs對羔羊生長性能的影響詳見牟春堂等[15]。簡言之,10GSPs和20GSPs組羔羊平均日增重和平均日采食量顯著高于對照組和40GSPs組(P<0.05),40GSPs與對照組差異不顯著(P>0.05);各組料重比無顯著差異(P>0.05)。
由表2可知,在正試期第1天,各組間羔羊外周血中CD4+和CD8+T細(xì)胞比例及CD4+/CD8+比值均無顯著差異(P>0.05)。正試期第15天,GSPs對外周血中CD4+T細(xì)胞比例沒有顯著影響(P>0.05),但CD8+T細(xì)胞比例有線性降低的趨勢(P=0.057),CD4+/CD8+比值有線性升高的趨勢(P=0.075)。正試期第30天,20GSPs和40GSPs組外周血中CD4+T細(xì)胞比例顯著高于對照組(P<0.05),CD8+T細(xì)胞比例顯著低于對照組(P<0.05),10GSPs組與對照組之間差異不顯著(P>0.05);20GSPs組CD4+/CD8+比值最高,顯著高于10GSPs和對照組(P<0.05)。正試期第45天,與對照組相比,20GSPs和40GSPs組外周血中CD8+T細(xì)胞比例顯著降低(P<0.05),CD4+T細(xì)胞比例及CD4+/CD8+比值顯著升高(P<0.05);10GSPs組與20GSPs和對照組差異不顯著(P>0.05)。
表2 GSPs對羔羊外周血淋巴細(xì)胞亞群的影響
由表3和圖1可知,隨著GSPs添加水平的增加,外周血淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率線性升高(P<0.05);20GSPs和40GSPs組的外周血淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率顯著高于對照組(P<0.05),與10GSPs組差異不顯著(P>0.05)。隨著GSPs添加水平的增加,GSPs外周血淋巴細(xì)胞凋亡率線性降低(P<0.05);20GSPs和40GSPs組的外周血淋巴細(xì)胞凋亡率顯著低于對照組(P<0.05)。
由表4可知,隨著GSPs添加水平的增加,血清IL-2含量有線性升高的趨勢(P=0.057),血清IL-6含量有線性降低的趨勢(P=0.074),但各組間血清IL-2、IL-6含量差異不顯著(P>0.05)。20GSPs和40GSPs組血清IL-4含量顯著高于對照組(P<0.05)。各組間血清IFN-γ含量差異不顯著(P>0.05)。隨著GSPs添加水平的增加,血清IgG含量線性增加(P<0.05);20GSPs組血清IgG含量顯著高于10GSPs和對照組(P<0.05),40GSPs組顯著高于對照組(P<0.05)。各組間血清IgA和IgM含量差異不顯著(P>0.05)。
表3 GSPs對羔羊外周血淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率和凋亡率的影響
A:對照組;B:10GSPs組;C:20GSPs組;D:40GSPs組。Q1:機(jī)械性死亡細(xì)胞區(qū)域;Q2:晚期凋亡和壞死細(xì)胞區(qū)域;Q3:活細(xì)胞區(qū)域;Q4:早期凋亡細(xì)胞區(qū)域。
表4 GSPs對羔羊血清細(xì)胞因子及免疫球蛋白含量的影響
在高產(chǎn)奶牛、肉牛和肉羊生產(chǎn)中,通常會采用高精低粗的飼糧結(jié)構(gòu)滿足其營養(yǎng)需求。然而,反芻動物長期飼喂高精料飼糧會引起瘤胃發(fā)酵及微生物區(qū)系的改變,引發(fā)機(jī)體代謝紊亂,造成酸中毒、脂肪肝、蹄葉炎和全身炎癥等[16]。研究發(fā)現(xiàn),與低精料飼糧組相比,飼喂以玉米秸稈為唯一粗飼料的高精料飼糧后,奶牛血液中白細(xì)胞和中性粒細(xì)胞數(shù)量升高,CD4+/CD8+比值顯著降低,表明不同飼糧模式對奶牛免疫功能會產(chǎn)生不同的影響[4]。血液中淋巴細(xì)胞亞群的變化是衡量機(jī)體免疫功能的重要指標(biāo),能夠反映機(jī)體的健康狀況。孫國慶等[5]研究發(fā)現(xiàn),隨著日齡的不斷增加,羔羊血液中CD4+T淋巴細(xì)胞含量逐漸升高,之后趨于穩(wěn)定狀態(tài),此時機(jī)體處于免疫功能最佳狀態(tài)。CD8+T細(xì)胞比例越高,CD4+/CD8+比值越低,表明機(jī)體的免疫能力越弱。在人醫(yī)臨床上,CD4+/CD8+比值大小常作為病毒感染、腫瘤或其他造成免疫功能降低的疾病臨床診斷的重要指征[17-18]。本研究中,羔羊的基礎(chǔ)飼糧精料比例為70%,正試期第30天和第45天各組羔羊外周血中CD4+細(xì)胞比例在數(shù)值上比第1天均有所升高,可能與羔羊日齡增加有關(guān);各組羔羊的CD8+細(xì)胞比例在數(shù)值上也較第1天有明顯的增加,說明飼喂高精料可能使羔羊的免疫機(jī)能降低。試驗組給羔羊飼喂不同水平GSPs,飼喂30和45 d后外周血淋巴細(xì)胞亞群有所改善,20GSPs和40GSPs組羔羊CD4+T細(xì)胞比例較對照組顯著增加,CD8+T細(xì)胞比例較對照組低,說明一定水平的GSPs可以緩解羔羊長期采食高精料造成的CD8+T細(xì)胞比例增加的免疫反應(yīng)。據(jù)報道,GSPs具有很強(qiáng)的抗氧化、抗炎功能[19],同時具有一定的免疫調(diào)節(jié)功能[20]。茶多酚可以提高斷奶仔豬血液中CD4+T淋巴細(xì)胞的比例,抑制T細(xì)胞向CD8+分化,緩解氧化應(yīng)激造成的仔豬免疫功能紊亂[21]。木其爾[9]研究發(fā)現(xiàn),沙蔥黃酮可以降低肉羊外周血中CD8+T細(xì)胞比例,提高CD4+T淋巴細(xì)胞的比例及CD4+/CD8+比值,改善肉羊的免疫功能。張海軍等[20]研究表明,適量的葡多酚可以改善肉仔雞免疫功能,但高水平葡多酚(>15 mg/kg飼糧)會降低各類淋巴細(xì)胞的數(shù)量,影響肉仔雞的生長性能。本課題組前期研究也發(fā)現(xiàn),適量的GSPs可以提高羔羊的平均日增重和育肥末體重,但40GSPs組羔羊的平均日增重和平均日采食量低于20GSPs和10GSPs組[15],一方面原因可能是適量的GSPs發(fā)揮其天然抗氧化功能,有效清除機(jī)體自由基[6],降低高精料飼糧引起的羔羊氧化應(yīng)激,提高羔羊的免疫力,有利于羔羊的健康;另一方面原因可能是因為酚類物質(zhì)降低了飼糧蛋白質(zhì)在瘤胃中的降解率,增加了小腸中可消化飼糧蛋白質(zhì)的比例[22],為機(jī)體提供了充足的代謝蛋白質(zhì)。而高水平的GSPs會抑制瘤胃微生物活性,從而抑制羔羊采食和生長[23]。
在機(jī)體免疫應(yīng)答過程中,淋巴細(xì)胞增殖分化程度與機(jī)體的免疫應(yīng)答水平有直接關(guān)系。T淋巴細(xì)胞表面有多種受體存在,在受到特異性抗原或特異性有絲分裂原(如ConA)作用時,細(xì)胞代謝會加強(qiáng),體積變大,轉(zhuǎn)化為原淋巴細(xì)胞。研究表明,機(jī)體在應(yīng)激狀態(tài)下T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化顯著被抑制[24]。房群[25]研究表明,大量自由基的攻擊會引起體內(nèi)T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率下降,通過給大鼠補(bǔ)充適量的抗氧化劑可以提高機(jī)體的抗氧化能力,可以改善淋巴細(xì)胞膜的流動性,提高淋巴細(xì)胞物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)、信號傳導(dǎo)的功能,提高大鼠外周血淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率。木其爾[9]研究顯示,沙蔥黃酮可以有效提高肉羊T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率。在幼犬的飼糧中添加適量(0.3%或0.5%)的茶多酚,可以提高幼犬的抗氧化能力和淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率,改善幼犬的健康狀況[26]。本研究中,羔羊長期采食高精料飼糧可能引起機(jī)體的氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)[27],而補(bǔ)飼GSPs后機(jī)體的抗氧化能力有所改善[28],機(jī)體抗氧化能力的改善可能有助于淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率的提高。因此,本研究中20GSPs和40GSPs組淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率顯著高于對照組,說明GSPs對羔羊細(xì)胞免疫水平有一定的調(diào)控作用。
細(xì)胞凋亡是正常細(xì)胞在生理和病理的刺激下發(fā)生的一種自發(fā)性死亡過程。機(jī)體可以通過細(xì)胞凋亡來清除衰老的細(xì)胞,保持機(jī)體細(xì)胞的正常新陳代謝。機(jī)體在維持免疫穩(wěn)態(tài)的過程中,淋巴細(xì)胞凋亡發(fā)揮著關(guān)鍵作用。淋巴細(xì)胞的凋亡和增殖調(diào)控是一個復(fù)雜的過程,受多種細(xì)胞因子、激素以及外界環(huán)境誘因(如溫度、藥物、感染、射線等)的調(diào)控。有研究表明,熱應(yīng)激能顯著提高奶牛的外周血淋巴細(xì)胞凋亡率,造成機(jī)體一定程度的免疫抑制[29]。雛雞發(fā)生銅中毒時,血液和免疫器官中淋巴細(xì)胞凋亡率均會顯著升高[30],機(jī)體免疫功能下降。劉玉娟等[31]研究表明,葡多酚可以有效緩解X射線引起的人外周血淋巴細(xì)胞凋亡,對淋巴細(xì)胞輻射損傷有良好的保護(hù)作用。紅松球果多酚類化合物可以改善患腫瘤小鼠的脾臟組織損傷,降低脾臟淋巴細(xì)胞的凋亡率,改善小鼠的免疫功能[32]。本研究中,20GSPs和40GSPs組淋巴細(xì)胞凋亡率較對照組顯著降低,說明GSPs一定程度上改善了高精料引起的機(jī)體免疫功能下降。但木其爾[9]研究發(fā)現(xiàn)沙蔥黃酮一定程度上提高了肉羊的淋巴細(xì)胞凋亡率,造成研究結(jié)果不一致的原因尚不明確,可能與試驗動物機(jī)體氧化應(yīng)激程度和免疫功能水平不同有關(guān)。
淋巴細(xì)胞可以分泌多種細(xì)胞因子,其中IL-2和IFN-γ主要由CD4+T細(xì)胞中的炎癥性T細(xì)胞分泌。IL-4則主要由CD4+T細(xì)胞中的輔助性T細(xì)胞產(chǎn)生。炎癥性T細(xì)胞的主要功能是激活T細(xì)胞,參與細(xì)胞免疫;輔助性T細(xì)胞的主要功能是促進(jìn)B淋巴細(xì)胞增殖和產(chǎn)生抗體,參與體液免疫。機(jī)體在氧化應(yīng)激時T淋巴細(xì)胞的活性降低,血清中IL-2含量降低,淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率降低[33],免疫球蛋白含量降低[34]。有研究表明,茶多酚可以有效緩解斷奶仔豬的氧化應(yīng)激,增加CD4+T細(xì)胞比例,提高血清IL-2和IL-4含量,提高機(jī)體細(xì)胞免疫功能[19]。GSPs可以提高血清中IgG、IgM含量,提高機(jī)體體液免疫功能[35]。Iqbal等[36]報道,利用原花青素替代維生素E飼喂肉仔雞可以提高肉仔雞的抗氧化能力和抗體效價。本研究中,長期采食高精料可能引起羔羊機(jī)體氧化應(yīng)激以及胃腸道上皮黏膜損傷,引起機(jī)體炎癥反應(yīng)。GSPs對血清中IL-2和IFN-γ含量影響不顯著,而血清中IL-4含量隨著GSPs添加水平的增加線性升高,說明GSPs促進(jìn)了CD4+細(xì)胞向Th2細(xì)胞分化,進(jìn)一步促進(jìn)B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生抗體,提高血清IgG含量。此外,GSPs抑制T細(xì)胞向CD8+細(xì)胞分化,使機(jī)體細(xì)胞免疫和體液免疫得到改善。然而,Correddu等[37]報道,給泌乳母羊飼喂葡萄籽(300 g/d)會輕微降低母羊血清中IgG含量,降低CD4+/CD8+比值,引起一定的免疫抑制。因此,我們推測適量的GSPs有助于提高機(jī)體的抗氧化能力和免疫功能,而原花青素的攝入量超過一定水平后可能造成免疫抑制。
適量的GSPs可以提高羔羊平均日增重,提高外周血淋巴細(xì)胞中CD4+T細(xì)胞比例及CD4+/CD8+比值,促進(jìn)淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化,提高血清IgG含量。綜上所述,適量的GSPs可以改善羔羊生長性能和免疫功能,本試驗條件下,GSPs的適宜添加水平為20 mg/(kg BW·d)。