單銘偉 李方方 李孟良 張瑞陽 張 勇 朱宇旌

(沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)畜牧獸醫(yī)學(xué)院，沈陽110866)

腸膜蛋白粉(dried porcine solubles，DPS)一直因營養(yǎng)好、誘食性佳的特點而被普遍應(yīng)用于斷奶仔豬飼糧中[1]，但動物性蛋白質(zhì)來源的飼料原料始終存在著傳染疾病的風(fēng)險，尤其在我國目前非洲豬瘟爆發(fā)的情況下，替代動物性蛋白質(zhì)來源的飼料原料的開發(fā)和研究更顯得迫在眉睫。但是，目前還沒有一種單一植物性蛋白質(zhì)來源的飼料原料能實現(xiàn)對腸膜蛋白粉在營養(yǎng)和誘食2方面的替代作用。有研究表明，優(yōu)質(zhì)的玉米蛋白粉(corn gluten meal，CGM)蛋白質(zhì)含量高達65%，且含有多種無機鹽和維生素，可提高豬的平均日增重(ADG)和養(yǎng)分消化率[2-3]。鮮味劑(umami enhancer)可以提高豬的采食量和生長性能，并對腸道神經(jīng)有一定的保護作用，同時鮮味劑可以參與并影響飼糧風(fēng)味的形成，起到強烈的增鮮、增香的作用，使飼糧總體味感更加協(xié)調(diào)、細膩，進而增加豬的采食量[4-6]。但目前有關(guān)斷奶仔豬飼糧中玉米蛋白粉配合鮮味劑能否替代腸膜蛋白粉的研究尚未見報道。因此，本試驗擬通過分別向腸膜蛋白粉和玉米蛋白粉飼糧中添加鮮味劑，考察不同蛋白質(zhì)飼料原料種類配合鮮味劑對斷奶仔豬生長性能、養(yǎng)分和氨基酸表觀消化率、血清激素指標及糞便菌群結(jié)構(gòu)的影響，以此來研究斷奶仔豬飼糧中玉米蛋白粉配合鮮味劑能否起到替代腸膜蛋白粉的作用。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

腸膜蛋白粉營養(yǎng)成分含量為：粗蛋白質(zhì)(CP)53.00%、鈣0.40%、總磷0.50%、消化能4.00 MJ/kg、賴氨酸3.74%、蛋氨酸0.54%、蛋氨酸+半胱氨酸0.20%、蘇氨酸1.82%、色氨酸0.50%、纈氨酸3.64%。玉米蛋白粉營養(yǎng)成分含量為：CP 53.90%、鈣0.07%、總磷0.44%、消化能3.60 MJ/kg、賴氨酸0.97%、蛋氨酸1.42%、蛋氨酸+半胱氨酸2.38%、蘇氨酸2.08%、色氨酸0.36%、纈氨酸2.94%。鮮味劑主要成分為雞肉水解蛋白、植物水解蛋白、酵母提取物和核苷酸，其中有效成分含量為4%，其余為載體二氧化硅。

1.2 試驗設(shè)計與飼養(yǎng)管理

試驗采用2×2析因設(shè)計，2個因素分別為蛋白質(zhì)飼料原料種類(腸膜蛋白粉和玉米蛋白粉)和鮮味劑[添加(0.2%)和無添加]。隨機選取28日齡、體重9 kg左右的大白×長白二元斷奶仔豬128頭，按遺傳背景相同、體重基本一致的原則，隨機分為4個組，分別為腸膜蛋白粉組、腸膜蛋白粉+鮮味劑組、玉米蛋白粉組和玉米蛋白粉+鮮味劑組，每組4個重復(fù)，每個重復(fù)8頭豬。試驗期21 d。

試驗在遼寧省鐵嶺市沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)科研種豬場進行，試驗開始前，對試驗豬舍進行了徹底的清洗和消毒，試驗期間所有斷奶仔豬均在相同條件下飼養(yǎng)，于同一棟豬舍進行分欄飼養(yǎng)，按分組飼喂試驗飼料，試驗期間保持溫度在20～30 ℃，同時保持良好的通風(fēng)和光照。斷奶仔豬自由采食和飲水，按照常規(guī)管理規(guī)程及正常免疫程序進行飼養(yǎng)?；A(chǔ)飼糧參照NRC(2012)標準配制，其組成及營養(yǎng)水平見表1。

1.3 測定指標及方法

1.3.1 生長性能

分別于試驗第1天和第21天08:00對每頭仔豬進行稱重，記錄初重(IW)和末重(FW)，計算仔豬ADG。每隔7 d記錄各個重復(fù)試驗豬飼糧供給和余料情況，得出7 d的耗料量，計算平均日采食量(ADFI)。根據(jù)ADG和ADFI計算料重比(F/G)。記錄試驗豬腹瀉情況，計算腹瀉率(diarrhea rate，DR)。計算公式如下：

ADG(g)=(末重-初重)/(試驗天數(shù)×
試驗豬總頭數(shù))；
ADFI(g)=總耗料量/(試驗天數(shù)×
試驗豬總頭數(shù))；
F/G=總耗料量/總增重；
腹瀉率(%)=100×(腹瀉仔豬頭數(shù)×次數(shù)/
飼喂天數(shù)×試驗豬總頭數(shù))。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))

續(xù)表1項目Items腸膜蛋白粉基礎(chǔ)飼糧DPS basal diet玉米蛋白粉基礎(chǔ)飼糧CGM basal diet營養(yǎng)水平 Nutrient levels3)消化能 DE/(MJ/kg)14.5714.49粗蛋白質(zhì) CP16.9016.93可消化賴氨酸 DLys1.301.30可消化蛋氨酸+可消化半胱氨酸 DMet+DCys0.79 0.79可消化蘇氨酸 DThr0.830.83可消化色氨酸 DTrp0.250.25可消化纈氨酸 DVal1.010.98鈣 Ca0.850.85總磷 TP0.700.70

1.3.2 養(yǎng)分和氨基酸表觀消化率

利用外源指示劑法測定養(yǎng)分和氨基酸表觀消化率。試驗第14～21天，各組試驗飼糧以4‰比例加入二氧化鈦(TiO2)，試驗結(jié)束前連續(xù)3 d以不完全收糞法于每個重復(fù)中采集糞便，每天上、下午各收糞1次，每次采集糞便30～50 g，每100 g糞樣加20 mL的10%濃硫酸以固氮，于-20 ℃冰箱保存。將每組糞樣混合攪拌均勻，放置70 ℃烘箱中烘干至恒重，室溫環(huán)境回潮24 h后粉碎過60目篩分裝備測。同時將各組飼糧樣品也粉碎過60目篩備測。

使用日立L-8800全自動氨基酸分析儀，采用外標法測定氨基酸含量。脯氨酸含量測定波長為440 nm，其他氨基酸含量測定波長為570 nm。每組稱取0.02 g樣品于水解管中，加入6 mol/mL鹽酸15 mL于水解管中，1滴正辛醇消泡劑，抽真空10 min后，封水解管，放入110 ℃干燥箱水解24 h，冷卻后定容、趕酸，待測樣于樣品瓶中上機檢測。

采用分光光度計法測定TiO2含量，105 ℃烘箱法測定干物質(zhì)(DM)含量，凱氏定氮法測定CP含量，索氏抽提法測定粗脂肪(EE)含量，乙二胺四乙酸(EDTA)絡(luò)合法測定鈣含量，釩鉬黃比色法測定磷含量。

根據(jù)測定出飼糧和糞便中對應(yīng)養(yǎng)分、氨基酸及指示劑含量計算某指標表觀消化率。

表觀消化率(%)=100×[1-(飼糧中TiO2含量/
糞便中TiO2含量)×(糞便中該指標含量/
飼糧中該指標含量)]。

1.3.3 血清激素指標

于試驗結(jié)束當(dāng)天08：00，分別從每組的每個重復(fù)選取1頭體況良好、接近平均體重的仔豬，前腔靜脈采血10 mL左右，靜置30 min后3 500 r/min離心10 min，將收集的血清分裝于離心管中，于-20 ℃冰箱保存待測。血清胃饑餓素(ghrelin)、促腎上腺皮質(zhì)激素(adrenocorticotropic hormone，ACTH)、胰島素生長因子-Ⅰ(insulin growth factor-Ⅰ，IGF-Ⅰ)、促腎上皮質(zhì)激素釋放激素(corticotropin releasing hormone，CRH)、膽囊收縮素(cholecystokinin，CCK)、瘦素(leptin，LEP)、胰高血糖素樣肽-1(glucagon-like peptide-1,GLP-1)和皮質(zhì)醇(cortisol)含量采用雙抗體夾心法測定，按試劑盒說明書進行操作，試劑盒由江蘇寶萊生物科技有限公司提供。

1.3.4 糞便菌群結(jié)構(gòu)

試驗第21天時，取各組糞樣5.0 g，用于16S rRNA高通量測序分析。提取樣品總DNA，利用1%瓊脂糖凝膠電泳對抽提的基因組DNA進行檢測。在引物341F(5′-CCTACGGGNGGCWGCAG-3′)和805R(5′-GACTACHVGGGTATCTAATCC-3′)末端加上測序接頭，對V3～V4基因片段進行PCR擴增，并對其產(chǎn)物進行純化、定量和均一化形成測定文庫，建好的文庫進行文庫質(zhì)檢，質(zhì)檢合格的文庫用Illumina HiSeq 2500平臺進行測序分析。

1.4 數(shù)據(jù)處理和分析

采用Excel 2007對數(shù)據(jù)進行初步整理，首先采用SPSS 17.0進行單因素方差分析(one-way ANOVA)，當(dāng)差異顯著時采用Duncan氏法進行多重比較，P<0.05為差異顯著，P<0.01為差異極顯著，結(jié)果以平均值±標準差表示。然后采用2×2雙因素試驗設(shè)計進行分析，數(shù)學(xué)模型為：

Xij=μ+αi+βj+(αβ)ij+εij。

式中：Xij為觀測值；μ為總體平均效應(yīng)；αi為蛋白質(zhì)飼料原料種類效應(yīng)；βj為鮮味劑效應(yīng)；(αβ)ij為蛋白質(zhì)飼料原料種類與鮮味劑的交互效應(yīng)；εij為誤差效應(yīng)。

2 結(jié)果與分析

2.1 鮮味劑與不同蛋白質(zhì)飼料原料組合對斷奶仔豬生長性能的影響

如表2所示，主效應(yīng)分析結(jié)果表明，腸膜蛋白粉組斷奶仔豬的末重、ADFI和ADG均極顯著高于玉米蛋白粉組(P<0.01)，F(xiàn)/G和腹瀉率均極顯著低于玉米蛋白粉組(P<0.01)。鮮味劑的添加可以極顯著提高斷奶仔豬末重、ADFI和ADG(P<0.01)，極顯著降低斷奶仔豬F/G和腹瀉率(P<0.01)。

單因素分析結(jié)果表明，玉米蛋白粉+鮮味劑組的ADFI與腸膜蛋白粉組無顯著差異(P>0.05)，玉米蛋白粉+鮮味劑組的ADG顯著低于腸膜蛋白粉組(P<0.05)。

2.2 鮮味劑與不同蛋白質(zhì)飼料原料組合對斷奶仔豬養(yǎng)分表觀消化率的影響

如表3所示，主效應(yīng)分析結(jié)果表明，腸膜蛋白粉組的斷奶仔豬CP表觀消化率極顯著高于玉米蛋白粉組(P<0.01)，DM和EE表觀消化率顯著高于玉米蛋白粉組(P<0.05)。鮮味劑的添加可顯著提高斷奶仔豬的CP表觀消化率(P<0.05)。

單因素分析結(jié)果表明，玉米蛋白粉+鮮味劑組CP表觀消化率顯著低于腸膜蛋白粉組(P<0.05)，其余養(yǎng)分表觀消化率與腸膜蛋白粉組無顯著差異(P>0.05)。

2.3 鮮味劑與不同蛋白質(zhì)飼料原料組合對斷奶仔豬氨基酸表觀消化率的影響

如表4所示，主效應(yīng)分析結(jié)果表明，腸膜蛋白粉組斷奶仔豬的各氨基酸表觀消化率均極顯著高于玉米蛋白粉組(P<0.01)。鮮味劑的添加可極顯著提高賴氨酸、絲氨酸和纈氨酸的表觀消化率(P<0.01)，顯著提高除谷氨酸、組氨酸和脯氨酸外其余氨基酸表觀消化率(P<0.05)。

單因素分析結(jié)果表明，玉米蛋白粉+鮮味劑組斷奶仔豬的賴氨酸、絲氨酸、纈氨酸、異亮氨酸和苯丙氨酸表觀消化率均顯著高于玉米蛋白粉組(P<0.05)。這說明玉米蛋白粉配合鮮味劑可提高氨基酸的表觀消化率，縮小了玉米蛋白粉與腸膜蛋白粉之間的差距。

2.4 鮮味劑與不同蛋白質(zhì)飼料原料組合對斷奶仔豬血清激素指標的影響

如表5所示，主效應(yīng)分析結(jié)果表明，腸膜蛋白粉組斷奶仔豬的血清胃饑餓素和IGF-Ⅰ含量極顯著高于玉米蛋白粉組(P<0.01)，血清ACTH、CRH、CCK和皮質(zhì)醇含量極顯著低于玉米蛋白粉組(P<0.01)。鮮味劑的添加可顯著提高斷奶仔豬的血清胃饑餓素和IGF-Ⅰ含量(P<0.05)，顯著降低血清CRH含量(P<0.05)。

單因素分析結(jié)果表明，玉米蛋白粉+鮮味劑組斷奶仔豬的血清胃饑餓素和IGF-Ⅰ含量顯著高于玉米蛋白粉組(P<0.05)，血清胃饑餓素含量與腸膜蛋白粉組無顯著差異(P>0.05)。

2.5 鮮味劑與不同蛋白質(zhì)飼料原料組合對斷奶仔豬糞便菌群結(jié)構(gòu)的影響

2.5.1 鮮味劑與不同蛋白質(zhì)飼料原料組合對斷奶仔豬糞便菌群α多樣性的影響

如表6所示，4組ACE和Chao1指數(shù)由高到低的排序依次為：腸膜蛋白粉組>玉米蛋白粉+鮮味劑組>腸膜蛋白粉+鮮味劑組>玉米蛋白粉組。4組Shannon指數(shù)由高到低的排序依次為：玉米蛋白粉+鮮味劑組>腸膜蛋白粉組>腸膜蛋白粉+鮮味劑組>玉米蛋白粉組。4組Simpson指數(shù)由高到低的排序依次為：玉米蛋白粉組>腸膜蛋白粉組腸膜蛋白粉+鮮味劑組>玉米蛋白粉+鮮味劑組。

2.5.2 鮮味劑與不同蛋白質(zhì)飼料原料組合對斷奶仔豬糞便菌群結(jié)構(gòu)的影響

如圖1所示，除未知菌屬和其他菌屬，4個組在屬水平上相對豐度超過1%的有巴氏桿菌屬(Barnesiella)、狹義梭菌屬(Clostridiumsensustricto)、致病菌屬(Oscillibacter)、普雷沃菌屬(Prevotella)、密螺旋體菌屬(Treponema)、瘤胃球菌屬(Ruminococcus)、梭菌屬ⅩⅣa(ClostridiumⅩⅣa)、霍爾德曼氏菌屬(Holdemania)、地孢子菌屬(Terrisporobacter)、柯林斯氏菌屬(Collinsella)和梭菌屬Ⅳ(ClostridiumⅣ)。玉米蛋白粉組的巴氏桿菌屬和密螺旋體菌屬相對豐度遠高于其余3組。

表2 鮮味劑與不同蛋白質(zhì)飼料原料組合對斷奶仔豬生長性能的影響

表3 鮮味劑與不同蛋白質(zhì)飼料原料組合對斷奶仔豬養(yǎng)分表觀消化率的影響

表4 鮮味劑與不同蛋白質(zhì)飼料原料組合對斷奶仔豬氨基酸表觀消化率的影響

表5 鮮味劑與不同蛋白質(zhì)飼料原料組合對斷奶仔豬血清激素指標的影響

表6 α多樣性指數(shù)

Unclassified：未分類；Subdivision5_genera incertae_sedis：位置未定的亞門5；Barnesiella：巴氏桿菌屬；Blautia：布勞特氏菌屬；Clostridinm sensu strict：嚴格意義上的梭屬；Megasphaera：巨球菌屬；Oseillibacter：奧塞氏桿菌；Bulleidia：丹毒絲菌屬；Prevotella：普雷沃氏菌屬；Schwartzia：施瓦茨氏菌屬；Treponema：密螺旋體屬；Catenibacterium：鏈型桿菌屬；Ruminococcus：瘤胃球菌屬；Roseburia：羅氏菌屬；Clostridhum ⅩⅤa：梭狀芽孢桿菌ⅩⅤa屬；Merthanobrevibacter：梅爾塔諾布氏桿菌屬；Holdemania：霍爾德曼氏菌屬；Anaerobacter：厭氧桿菌屬；Terrisporobacter：地孢桿菌屬；Chlamydia：衣原體屬；Collinsella：柯林斯菌屬；Alloprevotella：擬普雷沃菌屬；Clostridnum Ⅳ：梭狀芽孢桿菌Ⅳ屬；Saccharibacteria_genera_incertae_se：一般不確定度糖化細菌屬；Eubacterium：真桿菌屬；Buyricicoccus：布氏桿菌；Sporobacter：孢桿菌屬；Gemmiger：芽殖菌屬；Psychrobacter：冷桿菌屬；Ruminococcus2：瘤胃球菌2屬；Lactobacillus：乳酸桿菌；Mitsuokella：光岡菌屬；Oribacterium：原生菌屬；Erysipelothrix：丹毒桿茵屬；Olsenella：歐陸森氏菌屬；Phascolarctobacterium：考拉桿菌屬；Faecalibacterium：糞桿菌屬；Acidaminococcus：氨基酸球菌屬；Lachmospiracea_incertae_sedis：不確定沉積物屬；Coprococcus：糞球菌屬；Peptococcus：消化球菌屬；Holdemanella：霍爾德曼氏菌。

2.5.3 鮮味劑與不同蛋白質(zhì)飼料原料組合對斷奶仔豬糞便菌群功能的影響

由圖2所示，對測序微生物基因組的基因功能的構(gòu)成進行分析可知，玉米蛋白粉+鮮味劑組的功能基因相對豐度最大，其次為腸膜蛋白粉組，玉米蛋白粉組的功能基因相對豐度最低，且玉米蛋白粉+鮮味劑組與腸膜蛋白粉組的功能基因分布最為相似。

如圖3所示，玉米蛋白粉+鮮味劑組和腸膜蛋白粉組的菌群功能最為相似，玉米蛋白粉組在菌群氨基酸和碳水化合物的運輸與代謝、翻譯、核糖體結(jié)構(gòu)和轉(zhuǎn)錄等功能上弱于其余3組，較其余3組顯現(xiàn)出的差異性最大。

[A]：RNA加工與修飾；[B]：染色質(zhì)結(jié)構(gòu)與動力學(xué)；[C]：能源生產(chǎn)和轉(zhuǎn)換；[D]：細胞周期控制、細胞分裂、染色體分裂；[E]：氨基酸轉(zhuǎn)運與代謝；[F]：核苷酸轉(zhuǎn)運與代謝；[G]：碳水化合物轉(zhuǎn)運與代謝；[H]：輔酶轉(zhuǎn)運與代謝；[I]：脂質(zhì)轉(zhuǎn)運與代謝；[J]：翻譯、核糖體結(jié)構(gòu)與生源論；[K]：轉(zhuǎn)錄；[L]：復(fù)制、重組和修復(fù)；[M]：細胞壁/膜/包膜生源論；[N]：細胞運動；[O]：翻譯后修飾、蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)換和伴侶；[P]：無機離子轉(zhuǎn)運與代謝；[Q]：次生代謝生物合成、運輸和分解代謝；[R]：僅限一般功能預(yù)測；[S]：未知功能；[T]：信號傳導(dǎo)機制；[U]：細胞內(nèi)運輸、分泌和囊泡轉(zhuǎn)運；[V]：防衛(wèi)機制；[W]：真核細胞的細胞外結(jié)構(gòu)；[Y]：核結(jié)構(gòu)；[Z]：細胞骨架。下圖同 The same as below。

3 討 論

3.1 鮮味劑與不同蛋白質(zhì)飼料原料組合對斷奶仔豬生長性能的影響

研究表明，腸膜蛋白粉可以提高斷奶仔豬的ADG和ADFI，降低F/G和腹瀉率，同時促進腸道絨毛生長和腺窩細胞發(fā)育[7-9]。本試驗中，主效應(yīng)分析結(jié)果也表明腸膜蛋白粉對斷奶仔豬生產(chǎn)性能各項指標的影響均優(yōu)于玉米蛋白粉，與前人研究結(jié)果[7-9]一致。這與腸膜蛋白粉的蛋白質(zhì)主要以小肽的形式存在有關(guān)，斷奶仔豬消化器官尚未發(fā)育完全，體內(nèi)的蛋白酶分泌量較低，水解大分子蛋白質(zhì)能力弱，而腸膜蛋白粉約有2/3的小肽形式蛋白質(zhì)是可以直接通過小肽轉(zhuǎn)運載體被斷奶仔豬吸收利用，減少了未消化完全的蛋白質(zhì)直接刺激斷奶仔豬腸道，進而極大程度上提高了斷奶仔豬的各項生長性能[10]。

添加鮮味劑的飼糧會更受斷奶仔豬喜愛，提高其采食量、生長性能和飼料消化率，同時會降低仔豬在斷奶后第1周腹瀉的發(fā)生率，并且增強小腸的吸收能力[4-5]。本試驗主效應(yīng)分析結(jié)果也表明，添加鮮味劑可顯著提高斷奶仔豬ADG和ADFI，并降低F/G和腹瀉率，與前人研究結(jié)果[4-5]一致，這是由于鮮味物質(zhì)可以刺激斷奶仔豬的味覺感受器釋放信號，經(jīng)味覺神經(jīng)傳導(dǎo)至下丘腦弓狀核控制口腔及胃腸道中的激素分泌，增加了斷奶仔豬采食量的同時也降低了胃腸道的應(yīng)激反應(yīng)[11]。

單因素分析結(jié)果表明，玉米蛋白粉+鮮味劑組的ADFI與腸膜蛋白粉組相當(dāng)，同時ADG顯著低于腸膜蛋白粉組。這說明玉米蛋白粉+鮮味劑縮短了與腸膜蛋白粉間的差距，起到對腸膜蛋白粉部分替代的作用。

圖3 基于COG的功能豐度熱圖

3.2 鮮味劑與不同蛋白質(zhì)飼料原料組合對斷奶仔豬養(yǎng)分和氨基酸表觀消化率的影響

本試驗主效應(yīng)分析結(jié)果表明，腸膜蛋白粉組相較于玉米蛋白粉組斷奶仔豬的CP和氨基酸表觀消化率極顯著提高，同時DM和EE表觀消化率顯著增加，這與要秀兵[12]的研究結(jié)果一致。這是由于腸膜蛋白粉的小肽在動物體內(nèi)的吸收機制與游離氨基酸相互獨立、互不干擾，與游離氨基酸相比，小肽的吸收速度更快、耗能更低、吸收率更高、載體不易飽和，而且避免了由于游離氨基酸之間相互競爭共同的吸收位點而產(chǎn)生的吸收抑制[13]。

添加鮮味劑可減少仔豬斷奶時腸道應(yīng)激和空腸的萎縮，增加腸道抗氧化能力，顯著提高養(yǎng)分和氨基酸表觀消化率，同時可促進機體蛋白質(zhì)的沉積，從而增加斷奶仔豬的體重[14-15]。本試驗主效應(yīng)分析結(jié)果也表明，添加鮮味劑可增加斷奶仔豬的DM、CP、磷和部分氨基酸的表觀消化率。由于鮮味劑能對小腸細胞的屏障功能起到改善和修復(fù)的作用，而屏障功能越好，其營養(yǎng)物質(zhì)跨膜轉(zhuǎn)運的能力就越強，因此，鮮味劑可提高斷奶仔豬的養(yǎng)分表觀消化率[16-17]。

單因素分析結(jié)果表明，玉米蛋白粉+鮮味劑組的賴氨酸、絲氨酸、纈氨酸、異亮氨酸和苯丙氨酸表觀消化率均顯著高于玉米蛋白粉組。因此，玉米蛋白粉配合鮮味劑可以實現(xiàn)對腸膜蛋白粉CP和氨基酸養(yǎng)分表觀消化率方面部分替代、其余養(yǎng)分表觀消化率方面完全替代的作用。

3.3 鮮味劑與不同蛋白質(zhì)飼料原料組合對斷奶仔豬血清激素指標的影響

胃饑餓素作為餓感信號，通過下丘腦神經(jīng)肽Y和Y1受體作用促進胃動能活性，進而促進動物采食[18]。而CCK作為飽感信號，能夠調(diào)節(jié)某些G蛋白偶聯(lián)受體的興奮性以及其他肽類神經(jīng)遞質(zhì)的釋放，起到抑制動物進食的作用[19]。在動物生長發(fā)育過程中，IGF-Ⅰ是一類具有細胞分化和增殖功能的多肽，它可以直接作用于動物體組織，促進骨骼的合成代謝和細胞的有絲分裂[20]。

目前有關(guān)腸膜蛋白粉在斷奶仔豬血清激素方面的影響未見報道。在本試驗中，主效應(yīng)分析結(jié)果表明，腸膜蛋白粉組相較于玉米蛋白粉組斷奶仔豬的血清胃饑餓素和IGF-Ⅰ含量極顯著提高，血清ACTH、CRH、CCK和皮質(zhì)醇含量極顯著降低。

研究表明，添加鮮味劑能夠增加哺乳仔豬血清中胃饑餓素和IGF-Ⅰ含量，降低GLP-1和CCK含量[21]。本試驗主效應(yīng)分析結(jié)果表明，添加鮮味劑可顯著提高斷奶仔豬的血清胃饑餓素和IGF-Ⅰ含量，顯著降低血清CRH含量，與前人研究結(jié)果[21]一致。當(dāng)鮮味劑被動物采食后會改變星形膠質(zhì)細胞形態(tài)，致使胃饑餓素的mRNA表達量有所提高[22]，影響胃饑餓素的分泌，同時胃饑餓素還會調(diào)節(jié)生長激素(GH)的分泌，兩者存在劑量上的依存關(guān)系，GH的分泌又會對IGF-Ⅰ起到調(diào)控作用，從而間接導(dǎo)致了IGF-Ⅰ分泌的增加[23]。

單因素分析結(jié)果表明，玉米蛋白粉+鮮味劑組斷奶仔豬的血清胃饑餓素和IGF-Ⅰ含量顯著高于玉米蛋白粉組。由此可見，玉米蛋白粉配合鮮味劑可以在仔豬血清胃饑餓素含量上完全替代腸膜蛋白粉，在血清IGF-Ⅰ含量上部分替代腸膜蛋白粉。

3.4 鮮味劑與不同蛋白質(zhì)飼料原料組合對斷奶仔豬糞便菌群結(jié)構(gòu)的影響

很多研究表明，當(dāng)腸道菌群多樣性減少時，引起疾病的概率就會增加[24-27]。而Shannon和Simpson指數(shù)是判定菌群多樣性的重要指標，通常菌群多樣性指數(shù)越高，菌群區(qū)系平衡就越難被破壞[28]。本試驗中，玉米蛋白粉組的Shannon指數(shù)最低，Simpson指數(shù)最高，說明玉米蛋白粉組菌群多樣性最低；而玉米蛋白粉+鮮味劑組Shannon指數(shù)最高，Simpson指數(shù)最低，說明玉米蛋白粉+鮮味劑組菌群多樣性最高。這表明玉米蛋白粉配合鮮味劑能增加斷奶仔豬腸道微生物多樣性，從而形成一種平衡而復(fù)雜的腸道屏障體系，可代替腸膜蛋白粉對斷奶仔豬腸道的保護作用，也是生長性能試驗結(jié)果中提高奶仔豬平均日增重的可能原因之一。

在本試驗中，斷奶仔豬糞便屬水平菌群結(jié)構(gòu)上，玉米蛋白粉組的斷奶仔豬腸道內(nèi)巴氏桿菌屬和密螺旋體菌屬相對豐度最高，而玉米蛋白粉+鮮味劑組相較于較玉米蛋白粉組的巴氏桿菌屬和密螺旋體菌屬相對豐度均降低，使斷奶仔豬腸道菌群的結(jié)構(gòu)相似性更趨近于優(yōu)質(zhì)的腸膜蛋白粉，證明玉米蛋白粉配合鮮味劑可以降低斷奶仔豬患血痢或炎癥的潛在風(fēng)險，這也印證了前文中鮮味劑的添加能夠降低斷奶仔豬的腹瀉率的結(jié)論。巴氏桿菌屬為無芽孢、不運動、兼性厭氧的革蘭氏染色陰性小桿菌，Borewicz等[29]在受腸炎沙門氏桿菌感染豬的研究中發(fā)現(xiàn)，受感染的豬相較于健康的豬，其腸道內(nèi)的巴氏桿菌屬相對豐度有顯著增加，這可能是成為急、慢性病或流行性疾病的病原。密螺旋體菌屬同樣是廣義細菌的一屬，運動活潑，不易著色，在豬體內(nèi)的痢疾蛇樣密螺旋體會導(dǎo)致豬血痢的發(fā)生。Karlsson[30]的研究指出，在豬的各種皮膚潰瘍中都有密螺旋體菌屬的參與，且可能起到致病的主要作用。

通過菌群基因功能預(yù)測可以發(fā)現(xiàn)，玉米蛋白粉組菌群的氨基酸和碳水化合物的運輸與代謝、翻譯、核糖體結(jié)構(gòu)和轉(zhuǎn)錄等功能基因的相對豐度低于其余3組，而玉米蛋白粉+鮮味劑組的菌群功能基因相對豐度最高，與腸膜蛋白粉組菌群功能基因相對豐度最相似，這也印證了鮮味劑的添加可以提高斷奶仔豬的養(yǎng)分和氨基酸消化率及生長性能的結(jié)論。

4 結(jié) 論

玉米蛋白粉配合鮮味劑具有改善飼料適口性、增加斷奶仔豬對養(yǎng)分的消化吸收、提高生長性能的作用。因此，在斷奶仔豬飼糧中使用玉米蛋白粉配合鮮味劑替代腸膜蛋白粉是可行的。