劉素如

布洛芬是臨床上經(jīng)常使用的一種藥物,其主要具有消炎、鎮(zhèn)痛、解熱的作用,如痛經(jīng)、感冒引起的發(fā)熱、關(guān)節(jié)痛等,作用機(jī)制是通過對(duì)環(huán)氧酶的抑制,以此來(lái)減少前列腺素的合成,最終降低人體的神經(jīng)痛覺,調(diào)節(jié)人體溫度,達(dá)到解熱鎮(zhèn)痛的目的［1］。布洛芬顆粒屬于非甾體抗炎藥,其分子式是C13H18O2,分子量是206.28,化學(xué)名為2-甲基丙基(2-甲基-4-)苯乙酸。在臨床研究中發(fā)現(xiàn),布洛芬也能對(duì)血小板有顯著的抑制作用,但是相比于阿司匹林來(lái)說(shuō),布洛芬顆粒的作用時(shí)間更短［2］。世界衛(wèi)生組織已經(jīng)將布洛芬劃定為家中必備藥物之一,并且布洛芬在人們生活中已經(jīng)得到了十分廣泛的應(yīng)用。關(guān)于布洛芬顆粒含量的測(cè)定方法有很多,如紫外分光光度法、容量法、氣相色譜法、HPLC等。同時(shí),在《國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)》中明確記錄了布洛芬顆粒的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn),在該標(biāo)準(zhǔn)中主要采用HPLC方法對(duì)其含量進(jìn)行測(cè)定,其中的流動(dòng)相是具有較大毒性的氯乙酸,并且在實(shí)際的處理過程中樣品消耗時(shí)間較長(zhǎng),檢測(cè)波長(zhǎng)也有差異性,進(jìn)而在操作人員實(shí)際的操作過程中,可能會(huì)造成樣品出現(xiàn)不同程度的損失,藥品的真實(shí)質(zhì)量反應(yīng)也十分不準(zhǔn)確［3］。因此,本文參考《中國(guó)藥典》中布洛芬各類制劑標(biāo)準(zhǔn)中的含量測(cè)定方式,在原有的基礎(chǔ)上對(duì)相關(guān)方法進(jìn)行優(yōu)化,不僅大大提升了操作的便捷性和靈敏性,還能夠更好地控制制劑質(zhì)量,得出較為準(zhǔn)確的數(shù)據(jù)結(jié)果。

1 儀器和試藥

1.1儀器 在本次研究中,選用Waters e2695高效液相色譜儀,具體涵蓋了四元梯度輸液泵,二極管陣列檢測(cè)器；選用了天平AL104-IC(METTLER TOLEDO),一體式超純水制備機(jī)PCJ-40(成都品成科技有限公司),恒溫?cái)?shù)控超聲波清洗器KQ-500gdv［昆山市超聲儀器有限公司(昆山舒美)］。

1.2試藥 標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品：選取經(jīng)過HPLC測(cè)定含量為99.5%的布洛芬顆粒(中國(guó)食品藥品檢定研究院,批號(hào)100722201203)。檢測(cè)樣品：布洛芬顆粒(海南贊邦制藥有限公司,國(guó)藥準(zhǔn)字H20110027,規(guī)格：0.4 g×8片)。試劑：本次研究中使用的甲醇、乙腈均為色譜純,水為超純水,醋酸鈉、冰醋酸為分析純［4］。

2 方法與結(jié)果

2.1制備各個(gè)溶液 對(duì)照品溶液：稱取布洛芬對(duì)照品10 mg放置于20 ml量瓶中,借助甲醇將其稀釋至刻度。供試品溶液：稱取本品10包,將其充分混勻之后放置于50 ml的量瓶中,加入甲醇超聲20 min讓其充分的溶解,并最終稀釋到刻度位置,應(yīng)用0.45 μm的微孔濾膜將其過濾,取出續(xù)濾液獲得。陰性溶液：按照處方的具體比例制備空白輔料,按照上述方法獲得［5］。

2.2考察色譜條件及系統(tǒng)適用性 采用Waters XBridge C18色譜柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),將6.13 g的醋酸鈉融入到750 ml的水中,等待其充分溶解并借助冰醋酸將溶液的pH值調(diào)至到2.5,流動(dòng)相是該溶液-乙腈的比例控制為40∶60,流速為1.0 ml/min,進(jìn)樣量20 μl。

2.3考察專屬性 按照2.1的方式制備溶液后采用HPLC進(jìn)行檢測(cè),檢測(cè)結(jié)果得知布洛芬的理論塔板書是9556,最高峰和相鄰的分離度都高于1.5,其余的空白輔料對(duì)該項(xiàng)檢測(cè)試驗(yàn)沒有明顯干擾。

2.4空白輔料干擾試驗(yàn) 根據(jù)相應(yīng)的處方比例取出空白輔料顆粒,然后按照供試品溶液制備方法,對(duì)空白輔料溶液進(jìn)行制備,進(jìn)樣20 μl,將反應(yīng)結(jié)果的色譜圖記錄下來(lái)。同時(shí),另外取出布洛芬對(duì)照品和供試品溶液適量,按照上述方法操作,得出最后的結(jié)果,表明了空白輔料對(duì)布洛芬顆粒的含量測(cè)定不會(huì)造成顯著影響。

2.5峰純度檢查 取出對(duì)照品溶液和供試品溶液各20 μl,分別注入進(jìn)高效液相色譜儀器中,通過電二極管陣列檢測(cè)器(DAD檢測(cè)器),記錄其在200～400 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)的色譜圖,為后續(xù)的峰純度檢查提供參考依據(jù)。檢測(cè)結(jié)果是對(duì)照品溶液峰純度為999.2,供試品溶液峰純度為999.3.可見,色譜圖中的主峰為純物質(zhì)峰。

2.6考察線性關(guān)系 稱取布洛芬對(duì)照品25 mg,將其放置于20 ml的容量瓶中,并應(yīng)用甲醇稀釋至刻度。分別取出1、2、4、5、10 ml置于10 ml量瓶中,借助甲醇稀釋制作成0.134、0.267、0.534、0.668、1.336 mg/ml的溶液,再依次注入高效液相色譜儀中測(cè)定,應(yīng)用方程計(jì)算峰面積A=1277.393C-0.169(r=0.9999,n=6),可見在0.134～1.336 mg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.7考察精密度 將對(duì)照品溶液按照2.2的方法進(jìn)行檢測(cè),檢測(cè)6次之后取平均值,記錄對(duì)照品峰面積,峰面積相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為0.37%,證明了該儀器精密度良好。

2.8考察穩(wěn)定性 將供試品溶液提取出來(lái),在0、4、8、12、24 h的各個(gè)階段按照2.2的方法進(jìn)行檢測(cè),由此計(jì)算布洛芬的含量,RSD為0.31%,證明了供試品溶液在24 h內(nèi)具有較高穩(wěn)定性［6］。

2.9最低檢出限與定量限 將布洛芬對(duì)照品溶液進(jìn)行提出,并用甲醇按照不同比例程度稀釋之后,按照2.2的方法檢測(cè),S/N=10定為定量限,S/N=3表示最低檢出限。布洛芬的定量限為0.267 μg/ml,最低檢出限為0.0891 μg/ml。

2.10重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 取出檢測(cè)樣品并稱取5份,按照2.1的方法進(jìn)行溶液制備,按照2.2的方法測(cè)定,最終在6次試驗(yàn)之后取平均數(shù)RSD為0.54%(n=6),可見該檢測(cè)方法的重復(fù)性較好。

2.11耐用性試驗(yàn) 為了證明檢測(cè)方法的耐用性是否良好,分別考察其流動(dòng)相的比例、柱溫和流速的實(shí)際變化情況,借助三根不同色譜柱對(duì)其進(jìn)行測(cè)定,檢測(cè)布洛芬顆粒中其含量和RSD,結(jié)合各個(gè)條件綜合觀察,布洛芬理論塔板數(shù)高于2500,RSD低于2.0%。

2.12檢測(cè)加樣回收率 精密稱取布洛芬25 mg,共準(zhǔn)備6份。將6份樣品分別放置于20 ml的量瓶中,并加入甲醇超聲使其溶解,稀釋樣品至刻度,將過濾之后的溶液1 ml放置于25 ml量瓶中,加入濃度為1.254 mg/ml的1 ml對(duì)照品溶液,用甲醇稀釋至刻度［7］。依據(jù)2.2的方法進(jìn)行測(cè)定,并計(jì)算回收率,最終結(jié)果如表1所示。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果 (n=6)

2.13檢測(cè)樣品含量 將布洛芬顆粒樣品準(zhǔn)備各兩份,每份樣品約等于布洛芬25 mg,依次按照2.1和2.2的方法進(jìn)行制備和分析,并記錄下色譜峰面積,最終計(jì)算出布洛芬的含量為99.3%(n=2)和98.9%(n=2)。

3 討論

3.1選擇合宜的流動(dòng)相 我國(guó)《國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)》中明確規(guī)定了,布洛芬顆粒在含量測(cè)定時(shí),其流動(dòng)相是1%的氯乙酸溶液-乙腈(48∶52)。但是在現(xiàn)實(shí)生活中,氯乙酸屬于中等毒性的化學(xué)藥品,若使用不當(dāng),其不僅會(huì)造成皮膚灼傷、眼部灼傷,還會(huì)通過呼吸道進(jìn)入到人體內(nèi),引起肺部組織損傷。與此同時(shí),長(zhǎng)期的接觸氯乙酸,還會(huì)加大人體患癌的風(fēng)險(xiǎn),所以本文選取了醋酸鈉緩沖液-乙腈(40∶60)作為流動(dòng)相［8］。將6.13 g醋酸鈉融入到750 ml的水中,并應(yīng)用冰醋酸將其pH值調(diào)至2.5。采用醋酸鈉緩沖液不僅毒性較小,且十分容易提取和存儲(chǔ)。

3.2選擇合適的檢測(cè)波長(zhǎng) 在原有的標(biāo)準(zhǔn)中顯示,布洛芬顆粒含量檢測(cè)的波長(zhǎng)是254 nm,和已有的研究結(jié)果差異不大。在本次研究過程中,通過紫外光譜掃描,得知在263 nm、273 nm的波長(zhǎng)時(shí),布洛芬會(huì)呈現(xiàn)最大吸收。通過HPLC檢測(cè)發(fā)現(xiàn)：如果檢測(cè)波長(zhǎng)是220 nm,那么布洛芬發(fā)信噪比為3,如果檢測(cè)波長(zhǎng)是254 nm,那么信噪比是1340,如果檢測(cè)波長(zhǎng)是263 nm,那么信噪比是3991。由此本文最終確定263 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)［9］。

3.3確定樣品溶液制備方法 在本次研究中,通過向布洛芬顆粒中加入70%的甲醇溶液并充分搖晃20、30、45 min后,分析甲醇超聲15、20、30 min對(duì)布洛芬含量的實(shí)際影響情況［10］。得知,應(yīng)用純甲醇提取的布洛芬含量高于使用該方法提取的所有布洛芬含量,并且在45 min的時(shí)候,純甲醇提出的布洛芬含量最高。與此同時(shí),超聲20 min和超聲30 min得到的含量無(wú)顯著差異,所以采用甲醇超聲20 min更加簡(jiǎn)單高效。

4 結(jié)語(yǔ)

布洛芬存在的形式有很多,如膠囊、顆粒、緩釋片、混懸液等等。在傳統(tǒng)的布洛芬顆粒含量測(cè)定方法中,如酸堿滴定法、紫外分光光度法等,因?yàn)閷傩暂^差,所以檢測(cè)的結(jié)果十分容易受到輔料等因素的影響。本文通過前期的方法測(cè)驗(yàn)得知,本次測(cè)定方法中空白輔料對(duì)布洛芬顆粒的含量測(cè)定并沒有影響,因此可以排除其干擾,獲得的準(zhǔn)確性也更高。與此同時(shí),在上述色譜條件下對(duì)布洛芬顆粒的含量進(jìn)行檢測(cè),得知色譜峰峰形較好,在合理的時(shí)間范圍內(nèi),輔料對(duì)測(cè)定無(wú)干擾。通過對(duì)布洛芬顆粒的含量測(cè)定,進(jìn)一步優(yōu)化的測(cè)量方法,方法在準(zhǔn)確性、精密度等各個(gè)方面都符合相關(guān)要求,且操作便捷、易于重復(fù),能夠?yàn)椴悸宸翌w粒的質(zhì)量控制提供更加科學(xué)合理的參考建議。在證明本方法作為該藥品的含量測(cè)定依據(jù)時(shí),能夠確保布洛芬顆粒檢測(cè)的數(shù)據(jù)真實(shí)性,能夠?yàn)樗幤返馁|(zhì)量提供檢測(cè)依據(jù)。