許俊 謝國艷 黃敏

研究表明，與健康人相比，HBV相關的肝癌(HCC)患者會出現(xiàn)過度的氧化應激[1]。然而，氧化應激在HBV相關疾病中的病理生理相關性仍有待闡明。CDH1基因編碼的E-鈣黏蛋白(E-cadherin)可以與核轉錄因子-kB(NF-kB)結合，從而防止NF-kB核定位[2]。同時，促炎細胞因子白細胞介素-1和腫瘤壞死因子-α等介導的E-cadherin表達降低，并減弱E-cadherin介導的langerhans細胞與角質形成細胞的粘附[3]。E-cadherin可以被蛋白酶分解，從而釋放出胞外N端可溶性片段，稱為可溶性E-cadherin(soluble E-cadherin，sE-cadherin)。既往研究認為，sE-cadherin只能作為非功能性肽發(fā)揮作用[4]。同時，sE-cadherin可能是導致HBV相關肝病發(fā)生和發(fā)展的細胞因子之一，HCC患者的sE-cadherin水平明顯高于健康個體[5]。本研究評估了CHB患者血清sE-cadherin水平和體內氧化應激的相關性，進一步揭示CHB的發(fā)病機制。

材料與方法

一、研究對象

研究對象為2018年1月至2019年12月在上海新華醫(yī)院崇明分院診斷為HBsAg陽性54例患者，入組前6個月內未接受抗病毒治療。根據(jù)CHB的嚴重程度分為輕度16例，中度20例和重度18例，所有患者均符合《慢性乙型肝炎防治指南(2015年更新版)》的診斷標準[6]。排除合并有慢性丙型肝炎、酒精性肝病、自身免疫性肝病、代謝性肝病及藥物濫用者。選擇同期健康體檢者20名作為對照組。本研究根據(jù)《赫爾辛基宣言》的原則進行，并獲得醫(yī)院醫(yī)學倫理學委員會批準，所有研究對象簽署知情同意書。

二、標本的采集和測定

采集所有研究對象空腹靜脈血6 mL，分兩管。一管離心后分離血清，采用Au480全自動生化分析儀(日本Olympus公司)測定血清中AST和ALT，然后用采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(試劑盒購于美國Quidel公司)檢測血清中sE-cadherin、谷胱甘肽(glutathione，GSH)、丙二醛(malondialdehyde，MDA)和NADPH氧化酶2(NADPH oxidase 2，NOX2)，操作方法按說明書進行；采用超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)測定試劑盒(WST-1法)測定血清SOD濃度(試劑盒購于南京建城生物工程研究所)。另一管加入1 mL TRIzol 后-80 ℃保存?zhèn)溆谩２捎脤崟r熒光定量PCR(Real-time fluorescent quantitative PCR，RT-PCR)測定血漿中HBV DNA的水平。HBV DNA<2.0×103拷貝/mL為陰性。

三、統(tǒng)計學分析

采用SPSS18.0統(tǒng)計軟件。計量資料以均數(shù)±標準差表示，比較采用方差分析；計數(shù)資料以例數(shù)表示，比較采用χ2檢驗；進行Pearson分析；采用二分類Logistic回歸分析探討重度CHB的影響因素，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

結 果

一、研究對象一般臨床資料比較

各組研究對象的年齡和性別之間，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；與對照組比較，各CHB組患者血清中AST、ALT、sE-cadherin、MDA、NOX2和HBV DNA增加，GSH和SOD濃度降低，且隨著病情的加重呈相應的變化，差異均有統(tǒng)計學意義(均P<0.05)。見表1。

表1 研究對象一般臨床資料比較(±s)

二、sE-cadherin與肝功能指標的相關性分析

血清中sE-cadherin與AST、ALT及HBV DNA呈正相關(r=0.591、0.538、0.675，P<0.05)。

三、sE-cadherin與氧化應激指標的相關性分析

血清中sE-cadherin與GSH和SOD 呈負相關(r=-0.499、-0.492，P<0.05)，與MDA和NOX2呈正相關(r=0.527、0.458，P<0.05)。

四、CHB嚴重程度的影響因素

將sE-cadherin、AST、ALT、HBV DNA、GSH、SOD、MDA和NOX2是否為重度CHB作為因變量進行多因素分析，結果sE-cadherin、HBV DNA和NOX2是重度CHB的影響因素(P<0.05)。見表2。

表2 Logistic回歸分析CHB嚴重程度影響因素

討 論

越來越多的證據(jù)表明，血清sE-cadherin水平升高可能與全身炎癥反應的嚴重程度以及多器官衰竭有關[7]。重癥急性胰腺炎患者血清中sE-cadherin濃度高于輕度急性胰腺炎患者，同時，sE-cadherin濃度與炎癥和器官損傷的標志物成正比[8]。研究顯示，sE-cadherin在肝炎組織中高表達，并且與炎癥活動程度甚至肝纖維化相關，但尚無研究CHB患者中sE-cadherin與氧化應激之間的關系[9]。AST和ALT可以作為HBV誘導的肝臟炎癥和疾病進展的標志物[10]。本研究中，CHB患者的sE-cadherin濃度高于對照組，并且sE-cadherin水平與AST和ALT的水平呈正相關。血清中的HBV DNA水平與肝臟疾病的進展和組織病理學分級之間密切相關[11]。本研究結果顯示sE-cadherin與HBV DNA水平呈正相關。因此，sE-cadherin對慢性HBV感染的臨床預后具有預測價值。

HBV介導的ROS可以誘導慢性感染和炎癥，從而導致嚴重的肝臟疾病[12]。研究證實，脂質氧化與HBV相關疾病的進展有關，MDA、GSH和SOD由于其穩(wěn)定性而通常被用作脂質氧化標志物[13]。NOX2是人類呼吸道合胞病毒誘導的NF-κB抑制蛋白(IκBα)磷酸化過程中的重要調節(jié)劑，可抑制甲型流感病毒的復制，進而改善由甲型流感病毒引起的肺部炎癥反應[14]。重要的是，血清NOX2是HBV相關并發(fā)癥進展的一個重要指標。本研究中，CHB患者的GSH和SOD水平低于健康者，與sE-cadherin呈負相關；CHB患者的MDA和NOX2高于健康者，與sE-cadherin呈正相關；同時，sE-cadherin對CHB嚴重程度具有診斷價值。

綜上所述，CHB患者血清中sE-cadherin濃度升高，sE-cadherin與氧化應激呈正相關，可能是導致CHB相關肝病發(fā)生和發(fā)展的細胞因子之一。