王曉麗 陳治水 周靜霞

(聯(lián)勤保障部隊(duì)第九八八醫(yī)院檢驗(yàn)科 焦作 454000)

在全球范圍內(nèi)結(jié)核病都屬于普遍存在的問題，結(jié)核桿菌侵犯支氣管、氣管及周圍組織則稱之為支氣管結(jié)核，如果是單純病癥患者，難以通過CT或胸片診斷出來，所以很多患者無法及時(shí)確診和治療[1]。如今纖維支氣管鏡廣泛應(yīng)用，可以一并進(jìn)行診斷和治療，肺泡灌洗后對(duì)灌洗液進(jìn)行檢測(cè)，能確診是否存在結(jié)核桿菌，不過目前有著多種檢測(cè)方法，診斷效果也各不相同[2]。

1 資料和方法

1.1 一般資料

本次研究對(duì)象是我院2017年11月～2018年11月期間收治的56例肺結(jié)核患者(納入觀察組)，同時(shí)選取28例非結(jié)核性肺部疾病患者(納入對(duì)照組)。觀察組中菌陽肺結(jié)核、菌陰肺結(jié)核患者各28例，均符合中華醫(yī)學(xué)會(huì)的《肺結(jié)核診斷和治療指南》，其中男31例，女25例，年齡19～71歲，平均年齡(42.3±7.5)歲；對(duì)照組男15例，女13例，年齡20～72歲，平均年齡(42.7±7.4)歲。兩組基線資料經(jīng)過對(duì)比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

1.2 方法

1.2.1灌洗液采集

根據(jù)患者實(shí)際情況選擇適合規(guī)格的纖維支氣管鏡，術(shù)前禁食6h，術(shù)前30min肌肉注射阿托品、霧化吸入2%利多卡因行鼻腔喉頭表面麻醉；術(shù)中將纖維支氣管鏡經(jīng)鼻腔送入聲門后，將2%利多卡因滴入氣管行局部麻醉，過程中要行鼻導(dǎo)管供氧，還要監(jiān)測(cè)血樣飽和度、呼吸、心率等指標(biāo)；纖維支氣管鏡抵達(dá)病變位置后，活檢、刷檢后進(jìn)行肺泡灌洗，共灌洗3次，之后吸出灌洗液放置于無菌瓶中，采集20mL進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)。

1.2.2熒光定量PCR檢測(cè)法(FQ-PCR)

取1～1.5mL灌洗液進(jìn)行離心處理，時(shí)長(zhǎng)5min，速度為12 000r/min，去除上層清液，在沉淀物中加入1mL無菌生理鹽水混勻，再次離心處理5min，速度為12 000r/min，去除上層清液，將50μL DNA提取液放入沉淀物中混勻，放入100℃恒溫環(huán)境中10min；之后放在冰箱中冷卻到室溫后，再次離心處理5min，速度12 000r/min，取2μL上層清液置于PCR反應(yīng)管中，以8 000r/min速度離心處理數(shù)秒，再將其放在PCR儀中，進(jìn)行擴(kuò)增處理；先在93℃環(huán)境下預(yù)變性2min，再依次93℃45s、55℃60s，共計(jì)10個(gè)循環(huán)，之后再依次93℃45s、55℃120s，共計(jì)30個(gè)循環(huán)；最后進(jìn)行熒光檢測(cè)，對(duì)結(jié)果進(jìn)行解讀。

1.2.3結(jié)核抗體檢測(cè)法(膠體金法)

將2滴封閉液滴入反應(yīng)板的反應(yīng)孔中，等待薄膜吸入；取40μL灌洗液標(biāo)本，滴入反應(yīng)孔中，等待薄膜吸入；之后滴入6滴洗活液，等待薄膜吸入；再滴入2滴金標(biāo)液，等待薄膜吸入。質(zhì)控點(diǎn)為紅色，反應(yīng)孔內(nèi)存在紅色斑點(diǎn)則為陽性。

1.2.4培養(yǎng)檢測(cè)法

灌洗液標(biāo)本行常規(guī)處理，再根據(jù)《全國結(jié)核病菌學(xué)檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)化規(guī)程》操作，分離培養(yǎng)時(shí)應(yīng)用全自動(dòng)分枝桿菌培養(yǎng)監(jiān)測(cè)儀。

1.2.5涂片檢測(cè)法

以中國防癆協(xié)會(huì)發(fā)布的《結(jié)核病診斷細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)規(guī)程》為操作標(biāo)準(zhǔn)，用萋-尼氏抗酸染色法，結(jié)果觀察用油鏡，陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)為≥3條抗酸桿菌/300視野。

1.3 觀察指標(biāo)

對(duì)比分析4種檢測(cè)的結(jié)核桿菌陽性率。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

使用SPSS23.0軟件對(duì)研究中所得數(shù)據(jù)進(jìn)行記錄和分析，計(jì)數(shù)資料采用率(%)表示，行χ2檢驗(yàn)。當(dāng)組間差異較大時(shí)，呈現(xiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

2 結(jié)果

菌陽肺結(jié)核組檢測(cè)陽性率：FQ-PCR法明顯高于結(jié)核抗體法、涂片法，差異呈統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=10.220/31.540，P<0.05)；FQ-PCR法與培養(yǎng)法相同，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.000，P>0.05)。菌陰肺結(jié)核組檢測(cè)陽性率：FQ-PCR法明顯高于結(jié)核抗體法、涂片法，差異呈統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=14.292/39.030，P<0.05)；FQ-PCR法略高于培養(yǎng)法，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=2.276，P>0.05)。與對(duì)照組相比較，菌陽肺結(jié)核組和菌陰肺結(jié)核除了涂片法，其它方法均明顯更高，組間對(duì)比差異呈統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。4種檢測(cè)方法有著不同的敏感性，菌陰肺結(jié)核和菌陽肺結(jié)核組FQ-PCR法、培養(yǎng)法的陽性率均明顯高于結(jié)核抗體法和涂片法，差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表1。

表1 4種檢測(cè)中結(jié)核分支桿菌的陽性率[n(%)]

3 討論

結(jié)核病一直都是影響人類健康且具有傳染性的疾病，為了控制病情蔓延、提升患者的生存質(zhì)量，要及早進(jìn)行診斷和治療[3]。目前該病的診斷方式主要是細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)，痰涂片鏡檢是常規(guī)方法，具有經(jīng)濟(jì)、無創(chuàng)、簡(jiǎn)單等特點(diǎn)，不過會(huì)受到多種因素干擾，所以準(zhǔn)確性不高，特別是在支氣管結(jié)核病的診斷中效果不理想，所以逐漸被灌洗液檢測(cè)替代。通過纖維支氣管鏡獲得肺泡灌洗液標(biāo)本，該標(biāo)本中細(xì)菌濃度高、污染低，從而診斷結(jié)果更有保障，但是不同的檢測(cè)方法對(duì)結(jié)核桿菌的檢測(cè)結(jié)果不同，診斷效果也存在一定差異性。

涂片檢測(cè)法屬于經(jīng)濟(jì)、快捷、簡(jiǎn)便的方式，不過檢查率僅為30%～40%，也不能區(qū)分非結(jié)核桿菌和結(jié)核桿菌，所以靈敏度、特異性均不高；且檢測(cè)液難以控制定量，也就影響了最終診斷結(jié)果。如今，分子生物學(xué)技術(shù)不斷更新，F(xiàn)Q-PCR檢測(cè)技術(shù)被逐漸應(yīng)用，它集光譜技術(shù)、雜交技術(shù)、核酸擴(kuò)增技術(shù)于一身，檢測(cè)環(huán)境為封閉狀態(tài)，可以避免受到外界因素干擾，配合特異性探針隨時(shí)檢測(cè)，實(shí)現(xiàn)自動(dòng)分析一體化，結(jié)核桿菌DNA<10copies也能穩(wěn)定檢測(cè)出。

本次研究中，菌陽肺結(jié)核組FQ-PCR法的陽性率為89.29%，明顯高于結(jié)核抗體法的50%、涂片法的14.29%，差異呈統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；菌陰肺結(jié)核組的陽性率為82.14%，明顯高于結(jié)核抗體法的32.14%，差異呈統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；對(duì)照組與菌陰肺結(jié)核組對(duì)比，F(xiàn)Q-PCR法陽性率差異顯著，呈現(xiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。由此可證實(shí)，在支氣管結(jié)核診斷中，熒光定量PCR檢測(cè)法有著較高的診斷準(zhǔn)確率，而且檢測(cè)速度快，如果為了進(jìn)一步提升診斷效果可以與其它檢測(cè)方法聯(lián)合使用。