岳武成，張凱軍，侯 鑫，賈 延，倪 青，黃愛(ài)彪，王成艷，朱根軍，王 軍，王成輝

(1.農(nóng)業(yè)農(nóng)村部淡水水產(chǎn)種質(zhì)資源重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，水產(chǎn)科學(xué)國(guó)家級(jí)實(shí)驗(yàn)教學(xué)示范中心， 上海水產(chǎn)養(yǎng)殖工程技術(shù)研究中心，上海海洋大學(xué)，上海 201306； 2.黃三水產(chǎn)苗種培育有限公司，江蘇鹽城 224300； 3 寶應(yīng)縣氾水鎮(zhèn)水產(chǎn)技術(shù)指導(dǎo)站，江蘇揚(yáng)州225827)

中華絨螯蟹(Eriocheirsinensis)俗稱河蟹，是重要經(jīng)濟(jì)甲殼類[1-3]。進(jìn)入本世紀(jì)以來(lái)，我國(guó)中華絨螯蟹產(chǎn)業(yè)迅猛發(fā)展，成蟹養(yǎng)殖產(chǎn)量從2000年的23.24萬(wàn)t增加到2018年的75.69萬(wàn)t，并在全國(guó)28個(gè)省市區(qū)養(yǎng)殖[4,5]。眾所周知，成蟹養(yǎng)殖產(chǎn)量的高速發(fā)展離不開(kāi)中華絨螯蟹池塘生態(tài)育苗技術(shù)[6-8]，至2018年，中華絨螯蟹的人工育苗產(chǎn)量已達(dá)891.83 t[4]，養(yǎng)殖上已幾乎完全摒棄了天然蟹苗。池塘生態(tài)育苗技術(shù)促進(jìn)產(chǎn)業(yè)發(fā)展的同時(shí)也為我國(guó)河蟹天然種質(zhì)資源的保護(hù)做出了重要貢獻(xiàn)。

隨著中華絨螯蟹養(yǎng)殖與繁育技術(shù)的逐步發(fā)展，河蟹育苗過(guò)程中親本的使用規(guī)格也逐漸提高，育苗親本從最開(kāi)始的小規(guī)格親蟹(50～100 g)發(fā)展至雌3(150 g)雄4(200 g)規(guī)格，再到被眾多養(yǎng)殖戶青睞的雌4(200 g)雄5(250 g)的大規(guī)格親蟹[1,5,9,10]。親蟹規(guī)格的逐漸提升為養(yǎng)殖戶帶來(lái)了良好的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。茅海成等[5]比較不同規(guī)格中華絨螯蟹親本的育苗效果發(fā)現(xiàn)，大規(guī)格親本(雌≥150 g，雄≥200 g)出苗量更高、育苗效果更好，平均每只母本的出苗量達(dá)1.17 kg，比小規(guī)格母本(100～125 g，出苗0.85 kg/只)提高37.65%。鄧燕飛等[9]在大規(guī)格親本的規(guī)模化育苗中也發(fā)現(xiàn)，單只親蟹出苗量高達(dá)1.20 kg。王少兵等[10]比較了三種不同規(guī)格親本的繁育效果發(fā)現(xiàn)，隨著育苗親本規(guī)格的增大，蟹苗單產(chǎn)也逐步提升，這說(shuō)明親本規(guī)格對(duì)苗種產(chǎn)量的影響很大。在目前的河蟹產(chǎn)業(yè)中，大規(guī)格親本后代良好的養(yǎng)殖性能逐漸被產(chǎn)業(yè)重視，但當(dāng)前“大規(guī)格”親本的使用量以及苗種產(chǎn)量遠(yuǎn)不能滿足產(chǎn)業(yè)需求，且大規(guī)格親本育苗技術(shù)難度也較高，這在很大程度上制約了河蟹產(chǎn)業(yè)的進(jìn)一步發(fā)展。因此，開(kāi)展大規(guī)格親蟹繁育性能評(píng)估和育苗效果研究不僅有利于中華絨螯蟹的種質(zhì)資源保護(hù)，也是實(shí)現(xiàn)中華絨螯蟹產(chǎn)業(yè)持續(xù)穩(wěn)定發(fā)展的重要保障。

2019年在江蘇省射陽(yáng)縣的育苗基地開(kāi)展了大規(guī)格中華絨螯蟹親本[♀：(260.39±10.92)g，♂：(364.20±10.78) g；俗稱“5母7公”]的池塘生態(tài)育苗試驗(yàn)和效果觀察，同時(shí)評(píng)估了親本的基本繁殖性能參數(shù)和繁殖后生理狀態(tài)，旨在為大規(guī)格親本的池塘生態(tài)育苗提供相關(guān)數(shù)據(jù)，為中華絨螯蟹產(chǎn)業(yè)發(fā)展和良種選育提供技術(shù)支撐。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)地點(diǎn)

試驗(yàn)在江蘇省射陽(yáng)港M8標(biāo)段的射陽(yáng)縣黃三水產(chǎn)苗種培育有限公司的育苗基地(30°52′20.65″N， 120°26′53.78″E)進(jìn)行，該基地的海淡水交換方便，育苗池、生物餌料池、淡化池等設(shè)施完善，已有10余年育苗經(jīng)驗(yàn)，育苗技術(shù)成熟。

1.2 親蟹來(lái)源及規(guī)格

試驗(yàn)中華絨螯蟹來(lái)自上海海洋大學(xué)等單位選育的“江海21”親本，♀：(260.39±10.92)g，數(shù)量868只，殼長(zhǎng)(75.13±1.15)mm,肥滿度指數(shù)(61.46±3.22)；♂：(364.20±10.78) g，數(shù)量496只，殼長(zhǎng)(79.49±2.12)mm,肥滿度指數(shù)(72.77±5.56)。所用親本體表無(wú)傷、四肢健全、活力強(qiáng)。

1.3 育苗試驗(yàn)

2018年11月13日，將挑選的大規(guī)格親本放于育苗基地的同一越冬池進(jìn)行自然交配(雌∶雄=1.75∶1)，于親蟹進(jìn)池第2天開(kāi)始投喂冰鮮海魚(yú)，日投喂量為親蟹體重的2%～4%。投喂時(shí)間為17點(diǎn)，投喂后于次日上午觀察攝食情況并對(duì)后續(xù)投喂量進(jìn)行調(diào)整。至12月25日排干池水取出越冬池中的所有雄蟹，保留抱卵雌蟹于原池中繼續(xù)培育越冬并統(tǒng)計(jì)抱卵率。2019年3月29日，將抱卵雌蟹從越冬池中捕出，放于4個(gè)育苗池(0.307 hm2/個(gè))中進(jìn)行掛籠布苗，然后統(tǒng)計(jì)布苗后的雌蟹數(shù)量。育苗技術(shù)操作與管理按照“江海21”池塘生態(tài)育苗技術(shù)操作規(guī)程進(jìn)行。為保證育苗期間水質(zhì)條件優(yōu)良，于抱卵親本掛籠前使用大蘇打(硫代硫酸鈉)清除池塘中的余氯，并于育苗全程開(kāi)啟增氧機(jī)，在抱卵親蟹放苗后于蚤Ⅰ階段投喂酵母時(shí)配合使用乳酸菌調(diào)控水質(zhì)，蚤Ⅱ至蚤Ⅲ階段在晴天中午使用枯草芽孢桿菌調(diào)控水質(zhì)，蚤Ⅳ至大眼幼體階段配合使用枯草芽孢桿菌、光合細(xì)菌調(diào)控水質(zhì)。育苗期間的每日早上(07：00)、中午(13：00)和傍晚(17：00)監(jiān)測(cè)各育苗池的水溫、溶氧、pH、鹽度等主要水質(zhì)參數(shù)，確保池塘水質(zhì)良好。

1.4 母本攻擊性能測(cè)試

育苗母本布苗完成后，隨機(jī)抽取四肢健全、體表無(wú)傷、活力正常的母蟹30只，將每只母蟹放置于120 L(64 cm×45 cm×38 cm)藍(lán)色整理箱中逐個(gè)測(cè)試個(gè)體攻擊性，測(cè)試方法參考文獻(xiàn)[11]。并于早上(08：00)、中午(13：00)和傍晚(17：00)進(jìn)行三次試驗(yàn)，分析大規(guī)格母本產(chǎn)后的生理狀態(tài)。

1.5 母本肌肉組織結(jié)構(gòu)觀察

取攻擊性能測(cè)試后四肢健全、體表無(wú)傷、活力正常的母本6只，使用無(wú)菌鑷子和剪刀采取大螯閉合肌肌肉并切成 2 mm×2 mm×2 mm 的小塊,立即投入電鏡固定液(塞維爾生物科技有限公司，武漢)中于4 ℃固定4 h(固定液和組織的體積比為20∶1)，固定完成后用冰盒郵寄至公司進(jìn)行電鏡制片和拍照觀察。

1.6 數(shù)據(jù)處理

利用SPSS20.0 、EXCEL2019等軟件對(duì)試驗(yàn)河蟹的體重、殼長(zhǎng)、肥滿度、成活率、出苗率等參數(shù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析、 相關(guān)參數(shù)和公式如下：

RIN=(TIN/TMA)×100%

(1)

REM=(TEM/TIN)×100%

(2)

(3)

式中：RIN為成活率(%)，TIN為抱卵雌蟹數(shù)量；TMA為交配雌蟹數(shù)量；REM為出苗率(%)；TEM為總出苗量(kg)；FC肥滿度指數(shù)；WB為體重(g)；LC為殼長(zhǎng)(cm)。

2 結(jié)果分析

2.1 育苗效果

868只交配母本越冬至掛籠時(shí)存活599只，親本成活率達(dá)74.29%，掛籠母本的總出苗量達(dá)1 299 kg，單只母蟹產(chǎn)出大眼幼體量2.17 kg，平均每公頃產(chǎn)蟹苗量1 057.82 kg，產(chǎn)量達(dá)到較高水平，表明育苗效果較好。

2.2 繁育后母本攻擊力與肌肉組織結(jié)構(gòu)觀察

通過(guò)繁育后母本的攻擊力測(cè)試，發(fā)現(xiàn)母本離水后隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，其攻擊力逐漸下降，上午08：00攻擊力最高，達(dá)到(19.4±1.38)次，中午13：00攻擊力下降到(18.63±2.25)次，晚上17：00降低到(15.53±4.73)次。但全天的平均攻擊力相對(duì)較強(qiáng)，每20次測(cè)試攻擊次數(shù)達(dá)到(17.85±3.52)次，說(shuō)明繁殖后親本活力較好。

對(duì)產(chǎn)后母本的大螯肌肉組織(閉合肌)進(jìn)行電鏡觀察，發(fā)現(xiàn)其肌纖維結(jié)構(gòu)完整、排列整齊，無(wú)降解和溶蝕現(xiàn)象，A帶(橫紋肌暗帶)和I帶(橫紋肌明帶)邊界清晰可見(jiàn)，肌纖維的肌質(zhì)網(wǎng)(SR)結(jié)構(gòu)中的線粒體數(shù)量豐富且完整，說(shuō)明本實(shí)驗(yàn)的大規(guī)格親本繁殖后肌纖維生理特性較好，母本仍然具有較好的活力(圖1)。

圖1 繁殖后母本的肌肉組織電鏡觀察Fig.1 Muscle histological observation under the electron microscope of the female parent after breeding A：A帶；I：I帶；SR：肌漿網(wǎng)；M：線粒體

3 討論

在實(shí)際生產(chǎn)中，大規(guī)格親本的單產(chǎn)可以達(dá)到小規(guī)格親本的1.5～3倍。王少兵等[10]對(duì)三種不同規(guī)格親蟹的育苗效果對(duì)比發(fā)現(xiàn)，當(dāng)雌性親本的規(guī)格提升69.89%時(shí)，單只抱卵母蟹的大眼幼體產(chǎn)量提升了64.19%，大規(guī)格親本單產(chǎn)是小規(guī)格的1.64倍。而在茅海成等[5]對(duì)五種規(guī)格親本的對(duì)比實(shí)驗(yàn)中，最大規(guī)格親本的單產(chǎn)是最小規(guī)格的2.52倍，說(shuō)明親本規(guī)格對(duì)大眼幼體單產(chǎn)的貢獻(xiàn)來(lái)源于大規(guī)格抱卵母本具有更高的繁殖性能。然而研究也發(fā)現(xiàn)：親本規(guī)格越大，越冬成活率越低，隨著親本規(guī)格逐漸上升，最大規(guī)格親本的死亡率達(dá)到49.22%，大規(guī)格親本的投入產(chǎn)出比較低[10]。然而在本研究中大規(guī)格親本的成活率(74.29%)達(dá)到較高水平，說(shuō)明大規(guī)格親本的越冬成活率并非不可控，親本規(guī)格的增大應(yīng)提升的是親本培育的技術(shù)難度。此外，當(dāng)前生產(chǎn)上的苗種產(chǎn)量通常在750 kg/hm2左右，但也有的育苗實(shí)驗(yàn)產(chǎn)量最高分別達(dá)到957 kg/hm2和917 kg/hm2[10,12,13]。本實(shí)驗(yàn)中大規(guī)格親本的單位產(chǎn)量達(dá)到1 058 kg/hm2，育苗產(chǎn)量進(jìn)一步提高，說(shuō)明在良好的親本培育和育苗技術(shù)的保障下，大規(guī)格親本的繁殖性能可以達(dá)到較高水平。

另一方面，中華絨螯蟹是典型的2年生甲殼類，通常情況下，繁殖后的中華絨螯蟹親本會(huì)逐漸失去活力并死亡[1,14]。本試驗(yàn)中，對(duì)產(chǎn)后母本通過(guò)攻擊力測(cè)試發(fā)現(xiàn)，產(chǎn)后親本仍然具有較高活力，進(jìn)一步對(duì)螯足肌肉組織進(jìn)行顯微觀察也從生理層面證實(shí)了大規(guī)格產(chǎn)后親本較好的生理機(jī)能。研究發(fā)現(xiàn)，攻擊力強(qiáng)的動(dòng)物個(gè)體在生存環(huán)境中具有更高的資源統(tǒng)治地位[15]，如Matheson等[16]在普通濱蟹(CancerirroratusSay)的資源爭(zhēng)奪的研究中發(fā)現(xiàn)，規(guī)格大的個(gè)體具有更強(qiáng)的競(jìng)爭(zhēng)優(yōu)勢(shì)，攻擊力也更強(qiáng)，并且其競(jìng)爭(zhēng)優(yōu)勢(shì)不會(huì)受到環(huán)境溫度、大螯丟失的影響。而B(niǎo)eattie等[17]和McLain等[18]在大西洋招潮蟹(Ucapugilator)、鋸緣青蟹(Scyllaserrataforskal)的打斗實(shí)驗(yàn)中也發(fā)現(xiàn)規(guī)格越大的個(gè)體越容易獲得勝利。而對(duì)于繁殖期的中華絨螯蟹來(lái)說(shuō)，競(jìng)爭(zhēng)獲勝可以使得動(dòng)物個(gè)體獲得更多的領(lǐng)地以及食物資源，這對(duì)大規(guī)格母本更高的營(yíng)養(yǎng)需求以及配子更好的發(fā)育提供了進(jìn)一步保障。