李 蕾 王青青 許艷華 張俊濤

1.山東省東營市東營區(qū)人民醫(yī)院病理科，山東東營 257000；2.山東省濱州市人民醫(yī)院病理科，山東濱州 256600

宮頸癌是全世界女性第四大常見的惡性腫瘤，嚴(yán)重影響女性健康[1]。在我國每年宮頸癌新發(fā)病例13.15 萬，宮頸癌已成為我國中青年女性的第二大高發(fā)惡性腫瘤，占到全球病例的28%以上，且發(fā)病人群出現(xiàn)傾向年輕化的趨勢，同時每年有5 萬左右的人死于該病[2]。目前，雖然隨著篩查工作的普及患者的病死率逐年降低，但是宮頸癌傳統(tǒng)的治療方式損傷大，易產(chǎn)生耐藥性，效果不理想，因此找到合理有效的治療手段是臨床醫(yī)務(wù)工作迫切需要解決的問題。Survivin蛋白和p300/CBP相關(guān)因子參與了腫瘤細(xì)胞的發(fā)生發(fā)展、凋亡、侵襲轉(zhuǎn)移和腫瘤中血管的生成，目前研究發(fā)現(xiàn)Survivin蛋白在多種腫瘤組織中呈現(xiàn)高表達，同時p300/CBP相關(guān)因子低表達甚至不表達。本研究通過檢測宮頸癌組織內(nèi)Survivin蛋白和p300/CBP相關(guān)因子的表達水平，探討Survivin蛋白、p300/CBP相關(guān)因子與宮頸癌的關(guān)系以及兩種蛋白之間的關(guān)聯(lián)性，以期為宮頸癌的預(yù)后判斷以及治療提供新的思路，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇東營市東營區(qū)人民醫(yī)院2016年2月～2020年2月病理科保存并經(jīng)病理證實的宮頸癌組織40例（30例為鱗狀細(xì)胞癌，10例為腺癌）和非宮頸癌宮頸組織10例（因子宮肌瘤或子宮脫垂行全子宮切除術(shù)），分為宮頸癌組和非宮頸癌組。宮頸癌組中，年齡38～70歲，中位年齡46歲；≥50歲20例，<50歲20例；腫瘤分期：Ⅰ期+Ⅱ期28例，Ⅲ期+Ⅳ期12例；病理分級：G1級+G2級26例，G3級14例。非宮頸癌組中，年齡35～69歲，中位年齡44歲。兩組患者一般資料比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）,具有可比性。本研究經(jīng)東營市東營區(qū)人民醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)，患者及家屬均知情并簽署同意書。納入標(biāo)準(zhǔn)：①臨床資料完整；②均為首發(fā)病例。排除標(biāo)準(zhǔn)：術(shù)前有化療、放療以及免疫治療史者。

1.2 方法

所有組織石蠟塊5 μm 切片，免疫組化SP 法進行標(biāo)記。Survivin 單克隆抗體（Abcam，美國，CSR-0290）購自上海威奧生物科技有限公司，p300/CBP相關(guān)因子單克隆抗體（Santa Cruz 生物公司，美國，sc-13124）購自上海煊翎生物科技有限公司。

1.3 觀察指標(biāo)及評價標(biāo)準(zhǔn)

細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)棕色或棕黃色顆粒為陽性細(xì)胞，Survivin蛋白表達定位在細(xì)胞質(zhì)，p300/CBP相關(guān)因子定位在細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核，根據(jù)陽性細(xì)胞百分比進行判讀：陽性細(xì)胞百分比≥10%判定為陽性結(jié)果。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 18.0 統(tǒng)計學(xué)軟件進行數(shù)據(jù)分析，計數(shù)資料用率表示，組間比較采用χ2檢驗；采用Pearson列聯(lián)系數(shù)C 來分析兩個分類變量之間關(guān)系的密切程度，以P<0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2.結(jié)果

2.1 宮頸癌組、非宮頸癌組Survivin蛋白及p300/CBP相關(guān)因子陽性表達率的比較

宮頸癌組Survivin蛋白陽性表達率（72.5%）高于非宮頸癌組（0.0%），差異有高度統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=17.262，P<0.001）；宮頸癌組p300/CBP相關(guān)因子陽性表達率（40.0%）低于非宮頸癌組（80.0%），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=5.128，P=0.024）（表1）。

2.2 不同類型宮頸癌組織中，Survivin蛋白及p300/CBP相關(guān)因子陽性表達率的比較

Survivin蛋白的陽性表達率隨宮頸癌腫瘤分期及病理分級的增高而逐漸增高（P<0.05），與患者年齡和組織學(xué)類型無關(guān)（P>0.05）；p300/CBP相關(guān)因子的陽性表達率隨宮頸癌腫瘤分期及病理分級的增高而逐漸降低（P<0.05），與患者年齡和組織學(xué)類型無關(guān)（P>0.05）（表1）。

表1 不同類型宮頸癌組織中Suvivin蛋白和CBP/p300 相關(guān)因子表達陽性表達率的比較

2.2 Survivin蛋白和p300/CBP相關(guān)因子在宮頸癌中表達的相關(guān)性

Survivin蛋白和p300/CBP相關(guān)因子在宮頸癌中的表達有密切的關(guān)聯(lián)性（χ2=16.385，P<0.001，C=0.539）（表2）。Survivin蛋白和p300/CBP相關(guān)因子在宮頸癌中的表達呈負(fù)相關(guān)（r=0.64，P<0.05）。

表2 Survivin蛋白和p300/CBP相關(guān)因子在宮頸癌中表達的相關(guān)性（例）

3 討論

Survivin蛋白是凋亡抑制蛋白家族的新成員，廣泛表達于人類多種惡性腫瘤中，涉及腫瘤細(xì)胞的分化增殖及浸潤轉(zhuǎn)移。Survivin蛋白對腫瘤的影響主要表現(xiàn)在干擾細(xì)胞凋亡、調(diào)控細(xì)胞周期促進細(xì)胞的有絲分裂、促進血管形成。Survivin蛋白通過多種復(fù)雜機制參與腫瘤細(xì)胞凋亡，如可以與促凋亡蛋白Smac/Diablo結(jié)合，從而對抗其促凋亡的功能[3]?？梢耘c半胱天冬酶-3（Caspase-3）和半胱天冬酶-7（Caspase-7）直接結(jié)合，從而防止它們裂解和被半胱天冬酶-9（Caspase-9）激活，進而阻斷細(xì)胞凋亡[4]。在細(xì)胞增殖過程中，高表達Survivin蛋白的細(xì)胞可越過G2/M，直接完成異常有絲分裂，造成細(xì)胞周期縮短，導(dǎo)致腫瘤增殖速度加快[5]。有研究結(jié)果顯示，Survivin蛋白具有促進血管內(nèi)皮生長因子誘導(dǎo)腫瘤新生毛細(xì)血管形成的作用，從而為腫瘤的無限增殖創(chuàng)造了良好的營養(yǎng)環(huán)境[6]。近年來，已經(jīng)有研究發(fā)現(xiàn)針對腫瘤相關(guān)抗原的免疫事件，能夠在一定程度上延緩腫瘤的生長速度，提高腫瘤凋亡率。小鼠乳腺癌模型中Survivin蛋白和促黃體激素釋放激素融合蛋白的聯(lián)合免疫治療可顯著抑制腫瘤生長，增強腫瘤抑制作用[7]。Survivin蛋白作為一種新的重要的凋亡抑制蛋白，以其為靶點的抗癌藥物的研究亦成為熱點。Dang[8]研究發(fā)現(xiàn)富半胱氨酸蛋白61 可以抑制Survivin 的表達、激活p53，從而誘導(dǎo)了食管腺癌腫瘤細(xì)胞的凋亡。本研究結(jié)果提示，Survivin蛋白在正常宮頸組織中不表達，這與以往人們研究的結(jié)果一致[9]。本研究結(jié)果顯示，隨著宮頸癌腫瘤分期及病理分級的增高，Survivin蛋白的陽性表達率逐漸增高（P＜0.05）。提示Survivin蛋白的陽性率越高，腫瘤的侵襲性越強，患者的愈后愈差，Survivin蛋白可作為評估宮頸癌預(yù)后的一種潛在性指標(biāo)。同時本研究為宮頸癌的免疫治療及靶向治療提供了理論基礎(chǔ)。

組蛋白的乙?；鳛橐环N重要的表觀遺傳修飾，與腫瘤的關(guān)系極為密切，腫瘤細(xì)胞的組蛋白大部分呈現(xiàn)低乙?；癄顟B(tài)。p300/CBP相關(guān)因子是真核細(xì)胞內(nèi)一種重要的組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶，通過乙酰化組蛋白和非組蛋白的方式參與基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控，與細(xì)胞分化、凋亡、腫瘤發(fā)生等密切相關(guān)。p300/CBP相關(guān)因子與多種惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展存在一定聯(lián)系，在多種腫瘤細(xì)胞中p300/CBP相關(guān)因子表達下調(diào)，并且與患者不良預(yù)后密切相關(guān)。在大多數(shù)原發(fā)性肝細(xì)胞肝癌中p300/CBP相關(guān)因子呈現(xiàn)低表達，并發(fā)現(xiàn)p300/CBP相關(guān)因子的下調(diào)與門靜脈侵犯顯著相關(guān)。p300/CBP相關(guān)因子可以誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞的凋亡和自噬、抑制肝癌轉(zhuǎn)移[10]。在結(jié)腸癌的研究中發(fā)現(xiàn)，p300/CBP相關(guān)因子的降低損害p53 的乙?；?，減弱p53 依賴性p21 的轉(zhuǎn)錄，從而導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞周期蛋白D1 和磷酸化增加[11]。p300/CBP相關(guān)因子對骨肉瘤細(xì)胞有正向調(diào)節(jié)作用，p300/CBP相關(guān)因子通過靶向自噬相關(guān)基因5（ATG5）和ATG7 調(diào)節(jié)骨肉瘤細(xì)胞組蛋白H3S28 磷酸化，進而促進瘤細(xì)胞的自噬[12]。p300/CBP相關(guān)因子亦可以抑制細(xì)胞周期的進展，抵消腺病毒癌蛋白E1A 的有絲分裂活性[13]。目前表觀遺傳學(xué)藥物的研究取得了巨大的進步，有些藥物已應(yīng)用于臨床并取得較好的療效。Mazzà 等[14]研究發(fā)現(xiàn)，p300/CBP相關(guān)因子促進鋅指轉(zhuǎn)錄因子Gli1 的泛素化進而來抑制Hh 信號通路對DNA 損傷的反應(yīng)，提示p300/CBP相關(guān)因子是Hh 信號通路依賴性腫瘤潛在的治療靶點。本研究結(jié)果顯示，宮頸癌組p300/CBP相關(guān)因子陽性表達率低于非宮頸癌組，并且隨著宮頸癌的腫瘤分期及病理分級增高，p300/CBP相關(guān)因子蛋白的陽性表達率顯著降低（P＜0.05），提示p300/CBP相關(guān)因子可能是一個潛在預(yù)測宮頸癌患者預(yù)后的分子標(biāo)志物。本研究又為宮頸癌的個性化治療提供一個新的方向。

本研究結(jié)果顯示，Survivin蛋白和p300/CBP相關(guān)因子兩種蛋白在宮頸癌中的表達密切相關(guān)，提示這兩種蛋白可能共同參與了宮頸癌的發(fā)生發(fā)展過程，并在局部的浸潤和局部或遠(yuǎn)處的轉(zhuǎn)移中發(fā)揮協(xié)同作用。p53、Fas 等細(xì)胞凋亡基因可被高表達的Survivin蛋白抑制，導(dǎo)致細(xì)胞的凋亡減少，促進腫瘤的無限增殖。Adamkov 等[15]研究發(fā)現(xiàn)p53 蛋白的過度表達可抑制基底細(xì)胞癌細(xì)胞中Survivin蛋白的表達及其抗凋亡活性。另有研究發(fā)現(xiàn)宮頸癌組織中Survivin 的表達與p53 和Bcl-2 蛋白的異常表達密切相關(guān)[16]。p300/CBP相關(guān)因子是抑癌基因p53 的共激活子，其影響細(xì)胞分化、凋亡與腫瘤形成的原理是通過調(diào)節(jié)p53 的活性及其蛋白的穩(wěn)定性來使細(xì)胞周期停滯和細(xì)胞凋亡[17]。由此說明Survivin蛋白和p300/CBP相關(guān)因子這兩種蛋白可能通過p53 基因在宮頸癌的發(fā)生發(fā)展中存在著千絲萬縷的聯(lián)系，具體機制有待于進一步研究。

綜上所述，宮頸癌的發(fā)生是多個基因共同作用的復(fù)雜過程。本研究證明隨著宮頸癌的臨床分期和組織學(xué)分級的增高，Survivin蛋白的陽性表達率逐漸增高而p300/CBP相關(guān)因子的陽性表達率逐漸降低，并且兩種蛋白之間存在密切的關(guān)聯(lián)性。這一結(jié)果為宮頸癌的預(yù)后判斷提供新的分子標(biāo)志物，給宮頸癌的精準(zhǔn)治療提供了新思路和新方法。