王嘉興 袁二偉 王瑞娟 趙美林 張艷君

(河北北方學院附屬第一醫(yī)院新生兒科，河北 張家口 075000)

新生兒急性肺損傷是指機體因為嚴重的疾病導致肺泡毛細血管膜損傷，引發(fā)肺水腫、肺不張，患兒的主要臨床表現(xiàn)為起病急，呼吸窘迫，嚴重的低氧血癥[1]。也有研究指出，各種危重病均會損傷新生兒肺組織，進而引發(fā)炎癥反應(yīng)，新生兒急性肺損傷發(fā)生[2]。新生兒急性肺損傷重點在于早期治療，肺組織病理學檢查雖然準確，但是難以在臨床重視實現(xiàn)，因此尋找有效的診斷方式對新生兒來說具有重要意義。當炎性介質(zhì)釋放過度，也會引發(fā)新生兒急性肺損傷發(fā)生，肺瘤壞死因子-α(TNF-α)參與組織炎癥損傷過程，對其他炎癥因子有促進釋放的作用[3-4]。血小板活化因子(PAF)也參與新生兒急性肺損傷過程。肺表面活性蛋白A(SP-A)主要存在與肺泡Ⅱ型上皮細胞、細支氣管非纖毛上皮細胞中，表達較強，信號也較為豐富，常作為肺部疾病的監(jiān)測指標[5]。本文探討PAF、TNF-α、SP-A在新生兒急性肺損傷中的表達及相關(guān)性。

1 對象與方法

1.1 研究對象 選取2018年9月～2019年9月在我院就診的急性肺損傷新生兒70例設(shè)為急性肺損傷組，選取同一時期在我院就診的肺炎新生兒50例設(shè)為肺炎組，另外選取在我院健康體檢的新生兒50例設(shè)為對照組。納入標準：患兒均符合急性肺損傷的診斷標準[6]：①起病急，患兒表現(xiàn)為呼吸急促、窘迫。②伴有低氧血癥、PaO2/FiO2值<300 mmHg。③經(jīng)X線胸片檢查發(fā)現(xiàn)患兒兩肺有彌漫性浸潤影。④患兒肺動脈楔壓≤18 mmHg。所有患兒入院時間為24～48h。排除標準：①先天性肺功能不全患兒。②合并肝、腎、心等重要臟器功能損傷患兒。③病歷資料不全患兒。本研究所有患兒家屬均知情并簽署知情通知書。

1.2 方法

1.2.1 標本采集 抽取所有研究對象入院當天的空腹靜脈血液3 mL，以3000 r/min離心速度，離心處理10 min后，分離上層血清，在-80 ℃環(huán)境中保存，待檢。

1.2.2 PAF、TNF-α檢測 采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測PAF、TNF-α水平，具體操作：①將待檢標本使用0.05 mol/L PH為9.6的NaCO3-NaHCO3緩沖液稀釋，加入酶聯(lián)板孔中，每孔加入100 μL稀釋液，在4 ℃過夜保存。②使用PBST洗滌液清洗3次，每次3 min。③每孔中加入5%的小牛血清PBST 200 μL，在37 ℃封閉處理30 min。④使用PBS洗滌液清洗3次，每次3 min。⑤每孔中加入5%的小牛血清PBST稀釋后的酶標單克隆抗體100 μL，37 ℃孵育1 h。⑥使用PBST洗滌液清洗3次，每次3 min。⑦每孔中加入100 μL由(20 mg的鄰苯二胺，24.3 mL 0.1 mol/L的檸檬酸，25.7 mL 0.2 mol/L的Na2HPO4，75 μL 30%的H2O2)配制的底物溶液，37 ℃處理30 min。⑧每孔中滴加2 mol/L的H2SO4給予反應(yīng)終止。觀察結(jié)果。

1.2.3 SP-A檢測 SP-A檢測采用免疫斑點實驗法進行，具體操作：將0.01 M PBS PH為7.4的稀釋抗原液取2 μL，滴入硝酸纖維素膜中，在37 ℃的溫箱中連續(xù)干燥20～30 min，之后滴加封閉液，繼續(xù)在37 ℃的溫箱中干燥10 min，使用洗滌液清洗1～2次，濾紙吸干，滴加待檢的標本，在37 ℃的濕盒中干預30 min，使用洗滌液進行震蕩沖洗3次，每次3 min，之后吸干水分，水洗終止反應(yīng)，觀察結(jié)果。

2 結(jié)果

2.1 3組研究對象一般資料比較 3組研究對象性別、平均胎齡、自然分娩/剖宮產(chǎn)、平均體重等一般資料比較，差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，見表1。

表1 各組研究對象一般資料比較Table 1 Comparison of general data of each group

2.2 PAF、TNF-α、SP-A在新生兒急性肺損傷中的表達 肺炎組和急性肺損傷組PAF、TNF-α表達水平高于對照組，SP-A水平低于對照組，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。急性肺損傷組PAF、TNF-α表達水平高于肺炎組，SP-A水平低于肺炎組，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，見表2。

表2 各組PAF、TNF-α、SP-A表達比較Table 2 Comparison of PAF,TNF -α and SP-A expression in each group

2.3 不同時期患兒PAF、TNF-α、SP-A表達比較 急性期PAF、TNF-α表達水平高于恢復期，SP-A水平低于恢復期，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05),見表3。

表3 不同時期患兒PAF、TNF-α、SP-A表達比較Table 3 Comparison of PAF,TNF -α and SP-A expression in children of different periods

2.4 存活組和死亡組PAF、TNF-α、SP-A表達比較 死亡組PAF、TNF-α表達高于存活組，SP-A水平低于存活組，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，見表4。

表4 存活組和死亡組PAF、TNF-α、SP-A表達比較Table 4 Comparison of expression of PAF,TNF -α and SP-A in survival and death groups

2.5 PAF、TNF-α、SP-A相關(guān)性分析 經(jīng)過Pearson相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，PAF、TNF-α之間呈正相關(guān)(r=0.485,P=0.001)；TNF-α、SP-A之間呈負相關(guān)(r=-0.358,P=0.002)；PAF、SP-A之間呈負相關(guān)(r=-0.245,P=0.041)，見圖1。

圖1 PAF、TNF-α、SP-A相關(guān)性分析Figure 1 Correlation analysis of PAF,TNF -α and SP-A

3 討論

新生兒急性肺損傷發(fā)生時，肺部炎癥表現(xiàn)為瀑布反應(yīng)，呼吸膜結(jié)構(gòu)發(fā)生損傷，增加呼吸膜對液體、溶質(zhì)的通透性，引發(fā)肺水腫[7]。新生兒急性肺損傷屬于新生兒急重癥，引起患兒肺功能出現(xiàn)障礙，導致新生兒死亡。引起新生兒急性肺損傷發(fā)病的因素有很多，主要有機體創(chuàng)傷、酸中毒、休克、感染等，嚴重的新生兒急性肺損傷會發(fā)展成急性呼吸窘迫綜合征[8-9]。相關(guān)研究[10]顯示，缺氧的嚴重程度、器官功能衰竭等均會導致新生兒急性肺損發(fā)病率上升。

PAF屬于一種磷脂介質(zhì)，具有內(nèi)源性及廣泛的生物活性，相關(guān)研究顯示，PAF能促進核因子κB活化，中性粒細胞也因此在肺組織中集聚，造成肺組織損傷，在成人急性肺損傷疾病中，PAF顯示高水平[11-12]。在動物研究中，PAF抑制劑通過調(diào)控PAF水平，抑制急性肺損傷發(fā)展，并且降低PAF活化，能起到抗炎性作用[13]。本研究肺炎組和急性肺損傷組PAF表達水平高于對照組，其中急性肺損傷組PAF表達水平最高。說明PAF在急性肺損傷中顯示高水平，參與其疾病發(fā)展。TNF-α由多種單核吞噬細胞分泌、產(chǎn)生，在炎癥反應(yīng)中發(fā)揮著重要作用，并且對其他的炎性介質(zhì)有誘導、調(diào)節(jié)功能。TNF-α水平升高對血管內(nèi)皮損傷起到直接作用，通過對中性粒細胞進行刺激，釋放脫顆粒以及溶酶體酶，促進細胞因子合成、釋放，對血管活性物質(zhì)的形成產(chǎn)生影響[14-15]。本研究結(jié)果顯示在新生兒急性肺損傷中TNF-α水平較高，可能參與其疾病發(fā)生。分析原因是，TNF-α水平升高，刺激內(nèi)皮細胞、中性粒細胞發(fā)生黏附，釋放PAF、蛋白酶等大量的毒性介質(zhì)；同時刺激單核巨噬細胞，促進IL-8、IL-1等因子釋放，對肺組織帶來損傷[16]。SP-A是一種表面活性物質(zhì)的特異性蛋白，具有復雜的功能和生物學特性，在新生兒急性肺損傷以及急性呼吸窘迫綜合征研究中，SP-A可以作為兩種疾病早期診斷指標[17]。研究認為，新生兒急性肺損傷中SP-A通過被損傷的肺泡-毛細血管膜進入到血液中，導致血液中SP-A含量增加，與肺損傷病情嚴重程度有關(guān)，通過動態(tài)監(jiān)測SP-A表達水平，對疾病的判斷以及預后具有重要作用[18-19]。本文肺炎組和急性肺損傷組SP-A水平低于對照組，急性肺損傷組SP-A水平低于肺炎組，說明SP-A可以作為診斷新生兒急性肺損傷的有效指標。

急性期PAF、TNF-α表達水平高于恢復期，SP-A水平低于恢復期；死亡組PAF、TNF-α表達水平高于存活組，SP-A水平低于存活組。分析原因：SP-A蛋白為雙向流動，在新生兒急性肺損傷中，流入到肺泡腔中的血漿蛋白會將白細胞激活，促進白細胞介素、TNF-α、蛋白酶等釋放，對肺泡-毛細血管膜產(chǎn)生損傷，增加滲透性，從而引發(fā)疾病發(fā)生[20]。經(jīng)Pearson相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，PAF、TNF-α、SP-A之間呈相關(guān)性，其中一種水平發(fā)生變化均會對其他兩者產(chǎn)生影響，PAF、TNF-α、SP-A參與新生兒急性肺損傷發(fā)病，可以作為新生兒急性肺損傷的診斷指標，反應(yīng)患兒病情。

4 結(jié)論

PAF、TNF-α、SP-A在新生兒急性肺損傷中表達異常，三者水平與新生兒急性肺損傷不同患病程度、存活情況有關(guān)，三者之間有一定的相關(guān)性，參與新生兒急性肺損傷的發(fā)生，具有重要臨床意義。