邵逸文 孫琪英 曹大偉 趙景輝 趙明芬 王彬

近年來(lái)隨著科技的發(fā)展，藥品生產(chǎn)過(guò)程中對(duì)于裝量的差異越來(lái)越小，但是為了使藥品的裝量保持更好的一致性，保證藥品有效成分的適量攝入，在藥品生產(chǎn)過(guò)程中依然需要對(duì)其裝量進(jìn)行一定的控制與檢查[1]。由于目前市面上藥品種類繁多，藥典針對(duì)不同類型的藥品所提出的裝量差異檢查方法均有所不同，2015 年版《中國(guó)藥典》中提出針對(duì)不同容器，用適宜的溶劑清洗干凈。雖然藥典針對(duì)不同種類藥品提出了不同的裝量差異檢查方法以及計(jì)算方法，但是對(duì)于同一類型的藥品來(lái)說(shuō)，方法過(guò)于單一，存在大量對(duì)裝量差異檢查方法結(jié)果的影響因素[2]。面對(duì)同一類型藥品特殊情況，實(shí)驗(yàn)人員需要對(duì)試驗(yàn)過(guò)程進(jìn)行改進(jìn)。例如針對(duì)維生素E膠囊、復(fù)方三維亞油酸膠丸裝量差異實(shí)驗(yàn)中不易沖洗等問(wèn)題，楊天鳴等[3]使用了加壓沖洗法解決了不易沖洗的問(wèn)題。纖維蛋白原是由肝細(xì)胞合成的一種結(jié)合蛋白質(zhì)[4]，易溶于水[5]，由三對(duì)多肽鏈組成[6]。是組成人血漿蛋白的重要成分[7]。纖維蛋白原對(duì)人體凝血系統(tǒng)來(lái)說(shuō)十分重要[8]，現(xiàn)已運(yùn)用于各種疾病治療之中[9-11]。雖然纖維蛋白原易溶于水，但是在其溶解過(guò)程中易粘于藥品模制瓶瓶壁，不易清理，使裝量差異實(shí)驗(yàn)產(chǎn)生誤差。氫氧化鈉溶液作為蛋白質(zhì)的溶解液廣泛存在于各個(gè)領(lǐng)域[12-15]，氫氧化鈉溶液可以破壞掉蛋白質(zhì)中的氫鍵，使蛋白質(zhì)水解[16]。即使蛋白質(zhì)發(fā)生了變性，氫氧化鈉溶液也可以使其溶解[17]。而對(duì)于附著于物體表面的蛋白質(zhì)，氫氧化鈉溶液作為清洗液也有一定的應(yīng)用[18]。由于裝量差異是藥品質(zhì)量檢驗(yàn)中不可缺少的一項(xiàng)，如何快速、準(zhǔn)確的進(jìn)行實(shí)驗(yàn)是藥企質(zhì)量控制部門不斷探索的目標(biāo)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

實(shí)驗(yàn)所用藥品（人纖維蛋白原規(guī)格：0.5 g/瓶）為凍干類藥品，應(yīng)于2℃～8℃保存，實(shí)驗(yàn)前置于25℃處平衡1 小時(shí)，平衡至25℃后利用注射器針頭破除真空，備用。

1.1.1 不同NaOH 濃度對(duì)人纖維蛋白原的清除能力 取18 瓶經(jīng)上步處理后的人纖維蛋白原，平均分為6 組，每組三瓶，將其編號(hào)為實(shí)驗(yàn)組A、實(shí)驗(yàn)組B、實(shí)驗(yàn)組C、實(shí)驗(yàn)組D、實(shí)驗(yàn)組E、實(shí)驗(yàn)組F。設(shè)置0.1 mol/L、0.5 mol/L、1 mol/L、5 mol/L、10 mol/L、25 mol/L 共6 個(gè)濃度梯度的氫氧化鈉溶液作為清洗液，分別用不同濃度的清洗液清洗不同實(shí)驗(yàn)組的藥品容器。清洗時(shí)每瓶取20 mL 清洗液，分三次進(jìn)行清洗，每次震蕩30 s，清洗后用純化水進(jìn)行沖洗，將清洗液沖洗干凈后的模制瓶置于陰涼干燥處干燥處理。觀察干燥后的模制瓶瓶壁是否殘留可見(jiàn)異物。

1.1.2 NaOH 溶液清洗對(duì)裝量差異的影響 取10 瓶經(jīng)破真空處理后的人纖維蛋白原平均分為兩組，每組5 瓶，將其編號(hào)為實(shí)驗(yàn)組a、實(shí)驗(yàn)組b，將每一瓶供試品稱重備用。取上步實(shí)驗(yàn)中效果最佳濃度的氫氧化鈉清洗液對(duì)實(shí)驗(yàn)組a 進(jìn)行清潔處理，清洗時(shí)每瓶取20 mL 清洗液，分三次進(jìn)行清洗，每次震蕩30 s，清洗后用純化水進(jìn)行沖洗，置于烘箱內(nèi)70℃烘干2 小時(shí)，稱重。實(shí)驗(yàn)組b 用純化水進(jìn)行沖洗，沖洗后進(jìn)行烘干，烘干至恒重后稱重置于烘箱內(nèi)70℃烘干2 小時(shí)，稱重。

對(duì)比觀察兩組干燥后的模制瓶瓶壁是否殘留可見(jiàn)異物，比較分析兩組實(shí)驗(yàn)組的裝量差異結(jié)果與試驗(yàn)時(shí)間。

2 結(jié)果

由實(shí)驗(yàn)結(jié)果（表1）可知，當(dāng)氫氧化鈉溶液濃度低于5 mol/L 時(shí)，模制瓶表面會(huì)有藥品殘留，影響裝量差異檢查實(shí)驗(yàn)的結(jié)果判定。氫氧化鈉溶液濃度高于5 mol/L 時(shí)，模制瓶表面無(wú)明顯殘留物。實(shí)驗(yàn)組D、E、F 三組瓶壁平行樣間均無(wú)可見(jiàn)異物，所以 5 mol/L 以上的氫氧化鈉溶液對(duì)于人纖維蛋白原的清除能力差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＞0.05）。選擇使用氫氧化鈉溶液量最少的5 mol/L 作為清洗液進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)。

由表2 可以看出，對(duì)同一批藥品來(lái)說(shuō)，裝量差異準(zhǔn)確度實(shí)驗(yàn)組a ＞實(shí)驗(yàn)組b。實(shí)驗(yàn)組a 最大裝量差異在0.03%，實(shí)驗(yàn)組b 的最大裝量差異為0.3%，裝量差異準(zhǔn)確度提高了10 倍。而實(shí)驗(yàn)過(guò)程中用于沖洗的時(shí)間則是實(shí)驗(yàn)組a ＜實(shí)驗(yàn)組b，由平均17 min 減少至1.3 min。

3 討論

裝量差異作為對(duì)藥品生產(chǎn)過(guò)程中裝量階段的檢驗(yàn)指標(biāo)，可以保證藥品功效成分的適量攝入，避免因藥品攝入量不足導(dǎo)致的療效不佳和藥品攝入量過(guò)量致使對(duì)人體有較大的副作用，對(duì)藥品生產(chǎn)以及藥品療效來(lái)說(shuō)十分重要，是藥品進(jìn)入市場(chǎng)前重要的檢測(cè)指標(biāo)[19]。而目前來(lái)說(shuō)，裝量差異的檢查仍存在問(wèn)題，針對(duì)不同特性的藥品[20]，裝量差異檢查法仍需要不斷的改進(jìn)。人纖維蛋白質(zhì)主要由一種糖蛋白構(gòu)成[4]，由于其結(jié)構(gòu)的特殊性，在溶解過(guò)程中遇到較強(qiáng)震蕩時(shí)會(huì)形成一種膠狀物，溶解度下降，產(chǎn)生大量泡沫。并且會(huì)黏在瓶壁，不易清理。這導(dǎo)致了人纖維蛋白原在日常檢測(cè)過(guò)程中，效率低下。如果在人纖維蛋白原溶解過(guò)程中提高溫度，會(huì)起到加速溶解的效果，但是如果溫度過(guò)低，加速效果不明顯。而人纖維蛋白原的熱穩(wěn)定性較差，若加熱溫度過(guò)高，超過(guò)56℃時(shí)，會(huì)產(chǎn)生不可逆凝固[21]，無(wú)法清理，從而影響裝量差異實(shí)驗(yàn)結(jié)果。對(duì)于人纖維蛋白原的清理，目前常用的辦法是酸法、堿法和酶法，酶法雖然效果最好，但是由于成本較高，操作復(fù)雜[22]，不適合日常檢測(cè)工作。介于此點(diǎn)，利用氫氧化鈉溶液可以破壞蛋白質(zhì)的二級(jí)結(jié)構(gòu)，使得蛋白質(zhì)更容易溶于水中的原理。將氫氧化鈉溶液作為清洗劑對(duì)人纖維蛋白原進(jìn)行清洗。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)當(dāng)使用濃度大于5 mol/L 的氫氧化鈉溶液對(duì)模制瓶進(jìn)行清洗時(shí)，模制瓶表面無(wú)可見(jiàn)異物，且裝量差異結(jié)果與常規(guī)檢測(cè)方法相比，在利用氫氧化鈉溶液進(jìn)行清洗時(shí)，整個(gè)過(guò)程在2 分鐘之內(nèi)可以完成，對(duì)于檢驗(yàn)工作來(lái)說(shuō)，更能提高檢驗(yàn)工作效率。更重要的是，利用氫氧化鈉清洗后的模制瓶最大裝量差異為0.03%，常規(guī)方法的最大裝量差異為0.3%，裝量差異準(zhǔn)確度提高了10 倍，使得實(shí)驗(yàn)結(jié)果更加準(zhǔn)確，證明藥品的裝量保持較好的一致性，可以保證藥品有效成分能夠被患者適量攝入。

表1 不同濃度氫氧化鈉溶液對(duì)人纖維蛋白原的清洗能力

表2 不同處理方式對(duì)人纖維蛋白原裝量差異的影響