顏紅麗，鄭麗華，白昌民，邵美麗

(西北婦女兒童醫(yī)院/陜西省婦幼保健院婦產(chǎn)科，陜西 西安 710061)

子宮肌瘤為常見婦科生殖系統(tǒng)良性腫瘤，其主要是因子宮平滑肌細胞增生引起，故稱為子宮平滑肌瘤較為確切，簡稱子宮肌瘤[1]。對于希望保留生育功能的子宮肌瘤患者而言，子宮肌瘤剔除術(shù)具有傷口美觀、術(shù)后恢復快、微創(chuàng)、安全等優(yōu)勢，但其術(shù)后復發(fā)率較高[2]。近年研究顯示，雌激素介導的促有絲分裂活動對子宮肌瘤發(fā)生、進展具有重要作用，而這種作用是通過如胰島素樣生長因子-I(Insulin like growth factor-I,IGF-I)、表皮生長因子受體(Epidermal growth factor receptor,EGFR)等生長因子來實現(xiàn)[3]。但關(guān)于IGF-I、EGFR在子宮肌瘤復發(fā)中的作用尚不明確[4]?；诖?，本研究回顧性分析了子宮肌瘤復發(fā)與未復發(fā)患者子宮不同組織中的IGF-I、EGFR表達情況，報道如下。

1 資料與方法

1.1臨床資料:選擇2018年1月至2018年12月于醫(yī)院行子宮肌瘤剔除術(shù)的子宮肌瘤患者為研究對象，實際入組875例，按照1：7比例隨機抽取，最終納入125例患者。納入標準：①均符合子宮肌瘤診斷標準，且經(jīng)術(shù)后病理活檢、宮腔鏡、超聲檢查等確診者；②希望保留生育能力，且符合子宮肌瘤剔除術(shù)指征者；③年齡為26～40歲者；④患者及其家屬知情同意。排除標準：①合并其他婦科惡性腫瘤者；②合并心、肝、肺、腎等器官嚴重功能障礙者；③術(shù)前3個月激素類藥物使用史者；④合并甲狀腺功能異常、糖尿病等影響內(nèi)分泌代謝疾病者；⑤不符合子宮肌瘤剔除術(shù)指征者；⑥術(shù)后拒絕隨訪者；⑦妊娠、哺乳期者。

1.2方 法

1.2.1手術(shù)方法:術(shù)前常規(guī)消毒鋪巾，靜脈全麻，囑患者取膀胱截石位。行氣腹針穿刺，輸入二氧化碳(CO2)，構(gòu)建人工氣腹，保持腹內(nèi)壓在12～14mmHg范圍內(nèi)，穿刺部位選擇為臍左旁、右下腹、左下腹、臍輪上緣等處，放置手術(shù)器械及腹腔鏡；在肌壁和肌瘤交匯處注入用生理鹽水稀釋過的垂體后葉素，在周圍組織變白后，縱向切開子宮肌瘤最明顯突出處，并依次將子宮漿膜、子宮肌層、肌瘤假包膜切開，暴露肌瘤表面，牽引肌瘤，沿假包膜剝離、剔除子宮肌瘤，然后放置旋切器，將肌瘤粉碎并從套管內(nèi)取出；最后用可吸收線連續(xù)或間斷逐層縫合創(chuàng)口。

1.2.2檢測方法:①標本采集及處理：術(shù)中留取部分子宮肌瘤中心處肌瘤組織、子宮肌層(距肌瘤包膜外>5cm)及肌瘤旁組織(距肌瘤包膜外1cm)各1份，標本大小均為1×1×0.2cm3，使用10%甲醛液進行固定，再石蠟包埋，切4μm厚切片待檢。②IGF-I、EGFR表達檢測：采用免疫組化SABC法檢測3種標本中的IGF-I、EGFR表達情況，主要試劑為兔抗人IGF-I多克隆抗體(試劑1)、兔抗人EGFR單克隆抗體(試劑2)均購自美國Abcam公司。具體檢測方法見表1。③結(jié)果判定：以已知IGF-I、EGFR陽性片作為陽性對照，以PBS代替一抗作為陰性對照。①IGF-I：高倍鏡下(×400)，隨機選取5個視野，觀察切片顯色情況，細胞漿內(nèi)有棕黃色顆粒為IGF-I陽性表現(xiàn)。最終結(jié)果采用陽性細胞百分比與陽性細胞染色深度計分總和判定：陽性細胞百分比計分：細胞著色≤5%計0分、細胞著色≤25%計1分、細胞著色≤50%計2分、細胞著色≤75%計3分、細胞著色>75%計4分。陽性細胞染色深度：未見染色計0分、輕度染色計1分、中度染色計2分、深度染色計3分?？偡?～2分為陰性，≥3分為陽性。②EGFR：高倍鏡下(×400)，隨機選取5個視野，觀察切片顯色情況，細胞質(zhì)、細胞膜內(nèi)有棕黃色顆粒為EGFR陽性表現(xiàn)。根據(jù)著色癌細胞占總細胞百分數(shù)判定EGFR表達強度，具體標準如下：陰性(-)：陽性細胞≤5%；弱陽性(+)：陽性細胞占6%～30%；中等陽性(++)：陽性細胞占31%～60%；強陽性(+++)：陽性細胞>60%。

1.3免疫組化SABC法操作過程:1.將切片放入二甲苯溶液中脫蠟、水化；2.用磷酸緩沖鹽溶液(PBS)沖洗，2次，5min/次；3.用蒸餾水或PBS配置新鮮的3%H2O2，室溫封閉5～10min，蒸餾水洗3次；4.放入乙二胺四乙酸(EDTA)緩沖液中，抗原高壓熱修復；5.PBS沖洗5min；6.滴加正常山羊血清封閉液，室溫20min。甩去多余液體；7.滴加(試劑1/試劑2)，室溫1h或者4℃過夜或者37℃1h(4℃過夜后在37℃復溫45min)；8.PBS沖洗，3次，2min/次；9.滴加生物素化二抗，20℃～37℃20min；10.PBS沖洗，3次，2min/次；11.滴加試劑SABC(鏈霉卵白素+辣根酶標記生物素)，20℃～37℃20min；12.PBS沖洗，4次，5min/次；13.DAB(二氨基聯(lián)苯胺)顯色：DAB顯色試劑盒或者自配顯色劑顯色(鏡下掌握顯色程度)；14.蒸餾水洗。蘇木素復染2min、鹽酸酒精分化；15.脫水、透明、封片、鏡檢。

1.4觀察指標:術(shù)后隨訪1年，根據(jù)肌瘤是否復發(fā)分為復發(fā)組(37例)和未復發(fā)組(88例)。收集兩組患者的臨床資料(年齡、病程、BMI、肌瘤平均直徑、肌瘤發(fā)病情況、疾病類型(依據(jù)肌瘤與子宮壁的關(guān)系分類)、文化程度、典型癥狀)，并行回顧性分析。分析并比較兩組患者3種子宮組織(肌瘤組織、子宮肌層及肌瘤旁組織)中的IGF-I、EGFR表達情況。肌瘤復發(fā)標準[5]：術(shù)后3個月未檢出新發(fā)肌瘤，但術(shù)后6個月后經(jīng)婦科檢查、盆腔超聲等手段檢出新發(fā)肌瘤，且直徑超過5cm。

2 結(jié) 果

2.1兩組患者臨床資料比較:兩組患者的年齡、病程、BMI、肌瘤平均直徑、肌瘤發(fā)病情況、疾病類型、文化程度、典型癥狀等臨床資料比較，差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，具有可比性，見表1。

表1 兩組患者臨床資料比較

2.2兩組患者不同子宮組織中的IGF-I、EGFR表達情況比較:IGF-I、EGFR在不同子宮組織中的表達情況比較，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。復發(fā)組患者肌瘤組織、瘤旁組織、肌層組織中的IGF-I、EGFR表達情況均高于未復發(fā)組患者，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，見表2、表3。

表2 兩組患者不同子宮組織中的IGF-I陽性表達情況比較n(%)

表3 兩組患者不同子宮組織中的EGFR表達情況比較

3 討 論

子宮肌瘤系一類常見激素依賴性婦科良性腫瘤，發(fā)病率呈逐年上升趨勢[6]。目前，尚未完全探明子宮肌瘤的發(fā)病機制，推測其可能主要與雌性激素、生長因子有關(guān)。研究顯示，在應用抗孕激素藥物米非司酮及選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑三苯氧胺治療患者中，雖可獲得不錯療效，但無法徹底治愈[7]。提示除性激素外，還有其他因素參與了子宮肌瘤的發(fā)生、進展過程[8]。

胰島素樣生長因子-I(IGF-I)系一類多肽類促有絲分裂原，對機體各類組織細胞的增殖、分類、凋亡抑制等具有刺激作用，且在多種生理、病理調(diào)節(jié)過程中扮演重要角色。宋瑜[9]報道顯示，IGF-I在多種腫瘤中表達增高，但在正常組織中低表達甚至不表達，表明IGF-I在促進腫瘤細胞增殖中發(fā)揮作用。鄒曉嵐等[10]研究稱，子宮肌瘤患者肌瘤組織中的IGF-I表達水平遠高于瘤旁組織及肌層組織。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，兩組患者肌瘤組織中的IGF-I表達水平均明顯高于瘤旁組織及正常肌層組織，與大多數(shù)研究結(jié)果一致。分析原因為：肌瘤中的高表達IGF-I與其受體(IGF-IR)結(jié)合，并通過酪氨酸激酶及β亞單位跨膜區(qū)，催化位于β亞單位內(nèi)的磷酸化位點，啟動有絲分裂原激活蛋白激酶及磷脂酰肌醇-3激酶激活途徑等2條信號傳遞鏈，將代謝與有絲分裂信號傳遞至細胞核中，誘導肌瘤細胞有絲分裂并增殖，因而IGF-I表達強度呈向周圍遞減態(tài)勢。

EGFR為1186個氨基酸殘基構(gòu)成單鏈跨膜蛋白，特異性結(jié)合其細胞外配基(EGF)后參與細胞生長調(diào)節(jié)，EGFR所介導信號轉(zhuǎn)導通路被證實與肌瘤細胞增殖有關(guān)。文獻提出[11]，子宮肌瘤為單克隆良性腫瘤，由肌瘤母細胞增殖、分裂產(chǎn)生，其發(fā)生與EFGR高表達密切相關(guān)。趙欣等[12]表示，EGFR在肌瘤組織中的陽性表達率較瘤旁組織及正常肌層組織更高，說明EGFR表達強度增強在肌瘤細胞增殖過程中起到關(guān)鍵作用，推測其為子宮肌瘤細胞持續(xù)增殖重要因素。本研究結(jié)果顯示，兩組患者肌瘤組織中的EGFR表達水平顯著高于瘤旁組織及正常肌層組織。推測此結(jié)果與EGFR與其特異性配基EGF結(jié)合引發(fā)細胞增殖、分化并惡性轉(zhuǎn)化有關(guān)。

陳霞等[13]研究結(jié)果表明，子宮肌瘤患者行子宮剔除術(shù)后的復發(fā)率達33.3%，說明子宮肌瘤患者術(shù)后復發(fā)率較高。因此，有必要對子宮肌瘤患者術(shù)后復發(fā)原因進行分析。本研究結(jié)果顯示，術(shù)后隨訪1年的125例子宮肌瘤患者中，37例出現(xiàn)復發(fā)情況，復發(fā)率達29.6%。復發(fā)組患者不同子宮組織內(nèi)的IGF-I表達情況均高于未復發(fā)組患者，結(jié)果顯示IGF-I高表達可能促進了子宮肌瘤術(shù)后復發(fā)。此外，EGFR在復發(fā)組患者不同子宮組織內(nèi)的表達亦高于未復發(fā)組患者，提示EGFR可能為子宮肌瘤患者術(shù)后復發(fā)的潛在推動因子。究其原因為高表達IGF-I、EGFR會與其特異性受體結(jié)合，從而促進肌瘤組織周圍組織不斷增殖分裂，最終導致肌瘤復發(fā)，提高術(shù)后復發(fā)風險，但具體機制有待進一步深入研究。

綜上所述，IGF-I、EGFR在子宮肌瘤患者肌瘤組織中的表達水平高于瘤旁組織及肌層組織，且IGF-I、EGFR的表達強度增強可能為肌瘤復發(fā)的潛在因素之一。