劉 潔溫學(xué)娜馮 英李元元?jiǎng)⒂览?/p>

(1.石家莊市第四醫(yī)院產(chǎn)科,石家莊 050011; 2.辛集市第一醫(yī)院產(chǎn)科,河北辛集 052360)

妊娠期糖尿病(gestational diabetes mellitus,GDM)指妊娠期首次發(fā)現(xiàn)的胰島素相對(duì)、絕對(duì)缺乏或胰島素抵抗引起的高血糖臨床綜合征,我國(guó)發(fā)病率約1%～5%且呈逐年上升趨勢(shì)[1]。 多數(shù)學(xué)者認(rèn)為GDM 與胰島素抵抗有密切關(guān)系,因妊娠期婦女本身存在葡萄糖相對(duì)不耐受。 隨著孕期增加、機(jī)體對(duì)胰島素敏感性增強(qiáng),孕婦機(jī)體不能分泌足夠胰島素來(lái)滿足機(jī)體需求而引起GDM[2-3]。 GDM 患者體內(nèi)異常的胰島素抵抗作用可導(dǎo)致體內(nèi)代謝和生理指標(biāo)異常,且對(duì)促進(jìn)胰島β 細(xì)胞分泌具有顯著作用。 增強(qiáng)胰島素抵抗作用、促進(jìn)胰島β 細(xì)胞分泌是治療GDM 重要方向[4]。 miR-335-5P 抑制劑靜脈給藥可增強(qiáng)GDM 胰島抵抗作用,可防止胰島β 細(xì)胞過(guò)度分泌[5]。 miR 作為小型非編碼 RNA,涉及轉(zhuǎn)錄抑制、靶向降解和基因沉默等生物過(guò)程[6]。 miR-335-5P 早被證實(shí)與人體胰島素分泌指數(shù)呈顯著負(fù)相關(guān)關(guān)系[7];且有文獻(xiàn)顯示在GDM 小鼠體內(nèi)miR-335-5P 呈高表達(dá),轉(zhuǎn)化因子-β(transforming factor-β,TGF-β)也呈高表達(dá),考慮兩者具有協(xié)同促進(jìn)作用[8]。 綜合可得,miR-335-5P、TGF-β 可能與 GDM發(fā)生和發(fā)展有關(guān),但目前對(duì)TGF-β 增強(qiáng)機(jī)制及對(duì)GDM 的影響尚存在爭(zhēng)議。 因此本研究就此展開(kāi)報(bào)道,以期探討 miR-335-5P、TGF-β 與 GDM 胰島素抵抗和胰島β 細(xì)胞分泌的關(guān)系,現(xiàn)將研究結(jié)果報(bào)道如下。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SPF 級(jí) Balb/c 小鼠 105 只,雌性小鼠 70 只,雄性小鼠 35 只;體重 20～25 g,平均(23.56±2.54)kg,6～8 周,購(gòu)于河北省中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)藥研究院[SYXK(冀)2020-006]。 動(dòng)物使用和處理符合中華人民共和國(guó)國(guó)家衛(wèi)生研究院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物保護(hù)法和使用指導(dǎo)要求,且通過(guò)河北省石家莊市醫(yī)學(xué)動(dòng)物倫理委員會(huì)批準(zhǔn)(IACUC20180105),于河北醫(yī)科大學(xué)(實(shí)驗(yàn)動(dòng)物公共服務(wù)平臺(tái))[SYXK(冀)2020-002]完成實(shí)驗(yàn),提供實(shí)驗(yàn)環(huán)境:室溫 18℃ ～22℃、濕度 45% ～50%、12 h 明/12 h 暗、動(dòng)物自由攝食攝水。 以雌性和雄性小鼠以 2 ∶1于 18℃ ～25℃溫度、40%～70%濕度系統(tǒng)中合籠飼養(yǎng);每天早晨7 點(diǎn)對(duì)雌性小鼠進(jìn)行陰栓檢查,發(fā)現(xiàn)陰栓即行陰超檢查,于光鏡下觀察精子,精子和陰栓同時(shí)可見(jiàn)記為妊娠第1 天;持續(xù)觀察7 d,7 d 內(nèi)妊娠雌性小鼠(n=60)列為研究對(duì)象。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中掌握熟練輕柔的操作技巧、經(jīng)常觀察小鼠狀態(tài)、對(duì)廢棄小鼠實(shí)施安樂(lè)死等,嚴(yán)格遵守動(dòng)物實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的3R 原則。

1.2 主要試劑與儀器

鏈脲佐菌素(湖南匯百侍生物科技有限公司,國(guó)藥準(zhǔn)字 H20020475);無(wú)義序列NC(北京百奧萊博科技有限公司);miR-335-5P 模擬物、miR-335-5P抑制劑、si-TGF-β 均購(gòu)自上?？泼羯锟萍加邢薰?酶聯(lián)免疫試劑盒(北京索萊寶科技有限公司);注射用異戊巴比妥鈉(上海上藥新亞藥業(yè)有限公司, 國(guó)藥準(zhǔn)字 H31021725); 磷酸緩沖鹽溶液(Phosphate buffer solution, PBS)購(gòu)于南京科佰生物科技有限公司;飽和碳酸鋰(上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司);4%多聚甲醛(上海立瑤生物有限公司);二甲苯(北京百奧萊博科技有限公司);75%乙醇、80%乙醇、95%乙醇、100%乙醇購(gòu)于上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司;蘇木素-伊紅(Hematoxylin eosin,HE)染色液試劑盒購(gòu)于邁瑞生物科技有限公司;中性樹(shù)膠(南京科佰生物科技有限公司);鼠抗人TGF-β 多克隆抗體(上海田源生物技術(shù)有限公司);DAB顯色試劑盒(北京百奧萊博科技有限公司);羊抗鼠IgG(上海立瑤生物有限公司);檸檬酸鈉緩沖液(長(zhǎng)沙達(dá)爾鋒生物科技有限公司);總RNA 提取試劑盒(上海碩嘉生物科技有限公司);異丙醇(蘇州駿宇化工有限公司);反轉(zhuǎn)錄試劑盒(山東佰仟化工有限公司);miR-335-5P、TGF-β、c-Myc 引物均購(gòu)自上?？禎?rùn)生物科技有限公司;瓊脂糖(四川科倫藥業(yè)有限公司);PCR 反應(yīng)液(北京索萊寶科技有限公司);RT-PCR 擴(kuò)增試劑盒購(gòu)于Sigma;TRIzol 裂解液購(gòu)于邁瑞生物科技有限公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 建模及干預(yù)方法

①將60 只妊娠小鼠分開(kāi)喂養(yǎng),隨機(jī)分為空白組(n=10)和 GDM 組(n=50),禁食 12 h 后 GDM 組腹腔注射50 mg/kg 鏈脲佐菌素(必要時(shí)用0.1 mol/L檸檬酸溶液稀釋,15 min 內(nèi)完成),空白組注射等量檸檬酸溶液;4 h 后投喂普通飼料,自由飲水;于妊娠18 d 采用口服葡萄糖耐量試驗(yàn)(OGTT)測(cè)量空腹血糖(fasting blood sugar, FBG)、空腹胰島素(FIRI)和胰島素抵抗指數(shù)(IRI)。 GDM 組共得GDM 模型小鼠48 只,構(gòu)建GDM 小鼠成功標(biāo)準(zhǔn):妊娠第18 天妊娠小鼠 FBG<5.1 mmol/L,且 FIRI、IRI 均升高;②將48 只成功構(gòu)建GDM 模型的小鼠隨機(jī)分成A、B、C、D、E、F 組,每組各 8 只小鼠,A 組(模型組)、B 組(模型組+無(wú)義序列 NC 溶媒)、C 組(模型組+miR-335-5P 模擬物)、D 組(模型組+miR-335-5P 抑制劑)、E 組(模型組+si-TGF-β)、F 組(模型組+miR-335-5P 抑制劑+si-TGF-β),均經(jīng)尾靜脈注射,注射后可正常飲食和飲水。

1.3.2 OGTT 實(shí)驗(yàn)

妊娠第17 天晚上禁食禁水8 ～10 h,次日晨抽取空腹尾靜脈血后灌喂2.0 g/kg 葡萄糖水溶液,并于服糖后0.5 h、1 h、2 h 同法抽取尾靜脈血,1000 r/min 離心20 min 進(jìn)行血清分離并存于-80℃冰箱中;采用血糖儀和血糖試紙條測(cè)量血糖濃度,圖譜記錄口服葡萄糖耐量;放射免疫法測(cè)定FINS,儀器為I2000sk 化學(xué)發(fā)光免疫分析儀(美國(guó)雅培生物有限公司);根據(jù)公式 IRI=-Ln(1/FINS×FPG)計(jì)算IRI,IRI 越大,表明機(jī)體對(duì)胰島素敏感度越低,胰島素抵抗力越強(qiáng)。

1.3.3 高葡萄糖鉗夾技術(shù)

妊娠第19 天從GDM 組中各選擇4 只小鼠共24 只、空白組中選擇5 只小鼠進(jìn)行高血糖鉗夾技術(shù):禁食4 h,經(jīng)腹腔麻醉注射劑量為50 mg/kg 戊巴比妥鈉,固定和頸靜脈插管;待小鼠狀態(tài)穩(wěn)定后通過(guò)尾尖收集血樣50 μL 用于測(cè)定FBG 和FINS;通過(guò)頸靜脈插管注射初始劑量葡萄糖100 mg/kg 后,連續(xù)注射20%葡萄糖溶液,每5 min 監(jiān)測(cè)血糖;調(diào)節(jié)葡萄糖輸注速率(glucose infusion rate, GIR)使血糖維持于(14.0±0.5)mmol/L;在血糖穩(wěn)定后5 個(gè)時(shí)間點(diǎn)獲得平均GIR 作為穩(wěn)態(tài)GIR;收集初始劑量葡萄糖負(fù)荷后1～15 min 內(nèi)處于穩(wěn)定狀態(tài)的血液樣品,確定第一時(shí)相胰島素和最大胰島素分泌;根據(jù)GIR 值觀察β 細(xì)胞功能。

1.3.4 HE 染色

妊娠第19 天選擇未經(jīng)高血糖鉗夾技術(shù)小鼠(GDM 組中各4 只小鼠共24 只、空白組中5 只小鼠)進(jìn)行空氣栓塞法處死,取小鼠胰島組織用10%甲醛溶液固定,修剪,梯度乙醇脫水,二甲苯透明,石蠟包埋成塊,切成5 μm 連續(xù)切片,二甲苯脫蠟,梯度乙醇脫水,蘇木素染色,流水沖洗,1%鹽酸溶液分化數(shù)秒,流水沖洗,伊紅染色,梯度乙醇脫水,二甲苯透明,中性樹(shù)膠封片,顯微鏡下觀察HE 染色結(jié)果。

1.3.5 免疫組織化學(xué)法

取得“1.3.4”中樣品于10%甲醛溶液中進(jìn)行固定,脫水,用石蠟包埋,切成4 μm 連續(xù)切片,依次脫蠟、修復(fù)、梯度乙醇水化、PBS 漂洗、內(nèi)源性過(guò)氧化物酶活性消除;滴加小鼠抗人TGF-β 多克隆抗體(濃度1 ∶100)4℃孵育過(guò)夜,PBS 漂洗;滴加即用型生物素化二抗37℃孵育30 min,PBS 漂洗;滴加辣根酶標(biāo)記鏈霉卵白素工作液,37℃孵育20 min,PBS 漂洗,經(jīng)DAB 顯色、蘇木素復(fù)染、脫水,透明,封片,用于觀察TGF-β 表達(dá)。 判定標(biāo)準(zhǔn):由兩名具有執(zhí)業(yè)資格的病理科醫(yī)生采用雙盲法對(duì)結(jié)果進(jìn)行判斷和分析,染色強(qiáng)度:0 分為不著色,1 分為淡黃色,2 分為深黃色,3 分為棕黃色;陽(yáng)性細(xì)胞百分率:0 分為陽(yáng)性細(xì)胞百分率0%～5%,1 分為陽(yáng)性細(xì)胞率5%～25%,2 分為陽(yáng)性細(xì)胞率26%～50%,3 分為陽(yáng)性細(xì)胞率51%～75%,4 分為陽(yáng)性細(xì)胞百分率>75%;兩項(xiàng)之和進(jìn)行綜合判定:≤3 分為陰性,>3 分為陽(yáng)性。

1.3.6 RT-PCR 法

采用總RNA 提取試劑盒提取血液總RNA,總RNA 逆轉(zhuǎn)錄成cDNA,以此cDNA 為模板參照引物和探針序列進(jìn)行擴(kuò)增,反應(yīng)條件為:95℃預(yù)變性120 s,95℃變性30 s,72℃退火延伸15 s,35 次循環(huán)。 根據(jù)擴(kuò)增曲線讀取循環(huán)數(shù)(Ct),基因的相對(duì)表達(dá)量=2-△△Ct,以 β-actin 和 GAPDH 為內(nèi)參照,計(jì)算 GDM小鼠血清中 miR-335-5P、TGF-β、c-Myc 含量。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 21.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,多組間計(jì)量資料比較采用單因素方差分析,兩組間比較采用Snk-q檢驗(yàn);采用非參數(shù)檢驗(yàn)Mann-Whitney 法檢驗(yàn)分級(jí)資料;P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組OGTT 實(shí)驗(yàn)指標(biāo)比較

空白組給藥前后 FBG、FIRI、IRI 均低于 GDM 組(P<0.05);給藥前,GDM 各組 FBG、FIRI、IRI 比較P>0.05;給藥后,A、B 組 FBG、FIRI、IRI 與給藥前比較 P>0.05,D、F 組 FBG、FIRI、IRI 低于給藥前低于C、E 組(P<0.05);見(jiàn)表1。

2.2 各組胰島β 細(xì)胞功能比較

空白組給藥前后GIR、第一時(shí)相胰島素、最大胰島素均高于 GDM 組(P<0.05);給藥前,GDM 組GIR、第一時(shí)相胰島素、最大胰島素比較P>0.05;給藥后,A、B 組GIR、第一時(shí)相胰島素、最大胰島素與給藥前比較P>0.05,D、F 組GIR、第一時(shí)相胰島素、最大胰島素高于給藥前高于C、E 組(P<0.05),C、E組GIR、第一時(shí)相胰島素、最大胰島素低于給藥前(P<0.05);見(jiàn)表2。

2.3 各組胰島 β 細(xì)胞中 miR-335-5P、TGF-β 通路關(guān)鍵因子表達(dá)水平

空白組胰島 β 細(xì)胞中 miR-335-5P、TGF-β、c-Myc 表達(dá)低于 GDM 組(P<0.05);C、E 組 miR-335-5P、TGF-β、c-Myc 表達(dá)升高,D、F 組 miR-335-5P、TGF-β、c-Myc 表達(dá)下降;且 D、F 組 miR-335-5P、TGF-β、c-Myc 表達(dá)低于 C、E 組低于 A、B 組(P<0.05);見(jiàn)圖1。

2.4 miR-335-5P 與 TGF-β、c-Myc 關(guān)系

TGF-β 在胰島β 細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)表達(dá)、為棕黃色,c-Myc 在胰島β 細(xì)胞胞質(zhì)或細(xì)胞膜內(nèi)表達(dá)、可顯示為黑色顆粒,在胰島β 細(xì)胞中檢測(cè)到miR-335-5P 表達(dá)時(shí),TGF-β、c-Myc 均有不同程度表達(dá),見(jiàn)圖2。 D、F組 TGF-β 表達(dá)高于 C、E 組高于 A、B 組(P<0.05),見(jiàn)圖3、圖4。

表1 各組OGTT 實(shí)驗(yàn)指標(biāo)比較( ±s)Table 1 Comparison of OGTT experimental indexes among groups

表1 各組OGTT 實(shí)驗(yàn)指標(biāo)比較( ±s)Table 1 Comparison of OGTT experimental indexes among groups

注:給藥后,與 A 組比較,①P<0.05;與 B 組比較,②P<0.05;與 C 組比較,③P<0.05;與 D 組比較,④P<0.05;與 E 組比較,⑤P<0.05。Note.After administration, Compared with group A, ①P<0.05.Compared with group B, ②P<0.05.Compared with group C, ③P<0.05.Compared with group D, ④P<0.05.Compared with group E, ⑤P<0.05.

組別Groups例數(shù)n空腹血糖(mmol/L)FBG空腹胰島素(mIU/L)FIRI胰島素抵抗指數(shù)IRI給藥前Before給藥后After給藥前Before給藥后After給藥前Before給藥后After空白組Blank group 10 2.63±0.41 2.58±0.36 19.11±6.63 18.44±5.21 2.43±0.65 2.41±0.74 A 組Group A 8 5.43±1.54 5.51±1.69 26.68±8.46 27.32±7.54 6.21±2.30 6.30±2.18 B 組Group B 8 5.55±1.62 5.49±1.73 25.71±9.97 26.01±8.66 6.18±2.26 6.28±2.24 C 組Group C 8 5.34±1.60 8.21±2.65①②④ 24.88±9.63 40.52±12.67①②④ 6.24±2.34 4.15±1.41①②④D 組Group D 8 5.60±1.46 3.11±0.42①②③⑤ 25.93±9.89 20.20±4.33①②③⑤ 6.30±2.18 3.05±0.06①②③⑤E 組Group E 8 5.62±1.55 8.33±2.53①②④ 26.35±8.57 41.36±13.68①②④ 6.23±2.41 4.22±1.23①②④F 組Group F 8 5.51±1.44 5.36±1.01①②③④⑤ 26.42±8.84 25.16±7.60①②③④⑤ 6.34±2.27 3.66±0.68①②③④⑤

表2 各組胰島β 細(xì)胞功能比較( ±s)Table 2 Comparison of islet β cell function in each group

表2 各組胰島β 細(xì)胞功能比較( ±s)Table 2 Comparison of islet β cell function in each group

注:給藥后,與 A 組比較,①P<0.05;與 B 組比較,②P<0.05;與 C 組比較,③P<0.05;與 D 組比較,④P<0.05;與 E 組比較,⑤P<0.05。Note.After administration, Compared with group A, ①P<0.05.Compared with group B, ②P<0.05.Compared with group C, ③P<0.05.Compared with group D, ④P<0.05.Compared with group E, ⑤P<0.05.

組別Groups例數(shù)n葡萄糖輸注速率mg/(kg·min)GIR第一時(shí)相胰島素(ng/mL)First-phase insulin最大胰島素(ng/mL)Maximum insulin給藥前Before給藥后After給藥前Before給藥后After給藥前Before給藥后After 5 30.54±12.36 30.10±15.45 18.26±5.64 18.51±5.14 202.43±50.65 203.61±49.87空白組Blank group A 組Group A 4 20.11±13.02 19.89±12.04 11.13±3.21 10.65±3.36 126.32±32.30 128.32±32.61 B 組Group B 4 20.43±12.65 20.14±11.58 10.79±3.55 11.06±3.43 128.63±30.54 126.74±30.87 C 組Group C 4 19.86±12.87 13.02±8.54①②④ 11.26±3.31 6.24±2.16①②④ 126.51±29.87 100.30±12.35①②④D 組Group D 4 20.33±13.13 28.63±14.21①②③⑤ 11.22±3.54 17.68±4.21①②③⑤ 126.74±30.51 193.54±35.30①②③⑤E 組Group E 4 20.14±12.25 13.32±8.36①②④ 10.87±3.20 6.13±2.30①②④ 127.69±32.13 104.15±11.36①②④F 組Group F 419.87±12.3621.49±10.72①②③④⑤ 11.16±3.18 15.09±3.54①②③④⑤ 1 2 6.59±33.06178.62±15.78①②③④⑤

圖1 各組胰島β 細(xì)胞中miR-335-5P、TGF-β 通路關(guān)鍵因子表達(dá)水平Figure 1 Expression level of miR-335-5P and TGF - β key factors in islet β cells of each group

3 討論

目前,關(guān)于GDM 發(fā)病機(jī)制主要?dú)w納為:孕婦妊娠期間分泌孕激素、糖皮質(zhì)激素、胎盤生乳素等具有胰島素抵抗作用的激素;且隨著孕周增加含量隨之升高,造成體內(nèi)肝、肌肉等組織對(duì)胰島素敏感性下降,若無(wú)法補(bǔ)償胰島素抵抗的增加,可引起體內(nèi)高胰島素和高血糖,進(jìn)而發(fā)展為GDM[9]。 GDM 可導(dǎo)致孕婦血糖、脂肪、蛋白質(zhì)代謝功能紊亂,發(fā)生巨大兒、羊水過(guò)多、自然流產(chǎn)、胎兒畸形、死胎、死產(chǎn)、新生兒低血糖、高膽紅素血癥、孕婦酮癥酸中毒等,對(duì)母嬰危害較大[10]。 基于GDM 發(fā)病機(jī)制,最新研究認(rèn)為胰島素抵抗和胰島β 細(xì)胞分泌與該病發(fā)生和發(fā)展關(guān)系密切。

圖2 miR-335-5P 與 TGF-β、c-Myc 關(guān)系Figure 2 Relationship between miR-335-5P,TGF-β and c-Mycall

圖3 TGF-β 陽(yáng)性表達(dá)圖Figure 3 TGF - β positive expression

注:A、B、C、D、E、F 分別表示為 A 組、B 組、C 組、D 組、E 組、F 組。圖4 免疫組織化學(xué)染色圖Note.A, B, C, D, E and F were expressed as group A, B, C, D, E and F, respectively.Figure 4 Immunohistochemical staining

早有研究證實(shí),TGF-β 信號(hào)可調(diào)控細(xì)胞增殖、分化、凋亡及胚胎發(fā)育等,而TGF-β 信號(hào)通路的精準(zhǔn)調(diào)控對(duì)疾病治療具有積極意義[11]。 有研究指出在胰島細(xì)胞損傷應(yīng)答過(guò)程中,miR-335-5P 與TGF-β 信號(hào)通路間存在一定交叉對(duì)話,提示miR-335-5P 可能對(duì)調(diào)控 TGF-β 有一定價(jià)值[12]。 張琳[13]的研究指出,miR-335-5P 通過(guò)與胰島表皮因子競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合位點(diǎn)抑制胰島α 細(xì)胞糖化,由此激活各種細(xì)胞因子引起的TGF-β 信號(hào)通路,從而阻斷其分泌胰高血糖素。miR-335-5P 現(xiàn)已廣泛應(yīng)用于各種疾病治療,且在肝癌、乳腺癌等多種腫瘤疾病中均有應(yīng)用。 本研究結(jié)果顯示,miR-335-5P 上調(diào),可提高 FBG、FIRI、IRI 水平,進(jìn)一步減少胰島素分泌,這與趙茜等[14]的研究結(jié)果較為一致。 探討miR-335-5P 作用機(jī)制,考慮其臨床有效性與激活TGF-β 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路,提高 c-Myc 表達(dá)有關(guān)。 c-Myc 是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的一個(gè)新的TGF-β 信號(hào)調(diào)控因子;且在多篇研究中已指出 c-Myc 可提高TGF-β 穩(wěn)定性,促進(jìn)其信號(hào)傳遞和靶基因轉(zhuǎn)錄[15-16];石永英等[17]文獻(xiàn)指出c-Myc 可提高TGF-β 對(duì)癌細(xì)胞增殖、分化抑制作用。 綜合文獻(xiàn)可得,探討c-Myc、TGF-β 表達(dá)水平可提高對(duì)機(jī)體分化和死亡情況預(yù)測(cè)價(jià)值。 另Tagoma 等[18]在研究中已表明,miR-335-5P 對(duì)減少胰島素信號(hào)傳導(dǎo)及脂質(zhì)代謝相關(guān)基因有重要價(jià)值;Wang 等[19]發(fā)現(xiàn)miR-335-5P 表達(dá)較高組,胰島素表達(dá)下降;Osorio-Yanez等[20]將miR-335-5P 作用于人胰島細(xì)胞,發(fā)現(xiàn)其能特異性阻斷炎性因子介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路,而激活TGF-β 通路信號(hào)。 這些發(fā)現(xiàn)與本研究結(jié)果一致,提示 miR-335-5P 可提高 TGF-β 表達(dá)。 為進(jìn)一步證實(shí)miR-335-5P 與TGF-β 之間的關(guān)系,本文對(duì)其相對(duì)表達(dá)量進(jìn)行探討分析,得在胰島β 細(xì)胞中miR-335-5P表達(dá)時(shí),TGF-β、c-Myc 均有不同程度表達(dá),且 miR-335-5P 上調(diào)時(shí) TGF-β、c-Myc 表達(dá)也升高。 而當(dāng)TGF-β、c-Myc 和 miR-335-5P 均呈高表達(dá)時(shí),發(fā)現(xiàn)胰島β 細(xì)胞中液泡和無(wú)序細(xì)胞減少,提示TGF-β、miR-335-5P 對(duì)GDM 小鼠葡萄糖耐量和胰島素抵抗改善具有促進(jìn)作用。

綜上,miR-335-5P 通過(guò)激活TGF-β 信號(hào)通路對(duì)GDM 胰島素抵抗和胰島β 細(xì)胞分泌產(chǎn)生積極作用,可為GDM 治療提供臨床依據(jù)。 但由于本實(shí)驗(yàn)受時(shí)間限制,且實(shí)驗(yàn)主要涉及動(dòng)物有待探索更多研究對(duì)象作進(jìn)一步研究。