文 莉何 濤康 婷熊 琳朱婷婷歐三桃?

(1.西南醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院腎病內(nèi)科,四川瀘州 646000; 2.四川省腎臟疾病臨床醫(yī)學(xué)研究中心,四川瀘州 646000)

慢性腎病(chronic kidney disease,CKD)是一種嚴(yán)重危害人類健康的常見(jiàn)的慢性疾病,而腎小管間質(zhì)纖維化(tubulointerstitial fibrosis,TIF)是各種腎疾病進(jìn)展到終末期的共同途徑和主要病理學(xué)特征之一[1]。 CKD 進(jìn)展過(guò)程中,腎小管上皮細(xì)胞和腎間質(zhì)成纖維細(xì)胞可以轉(zhuǎn)化為肌成纖維細(xì)胞,進(jìn)而合成和分泌大量細(xì)胞外基質(zhì)促使腎小管間質(zhì)纖維化[2-3]。腎小管間質(zhì)纖維化程度可以反映腎功能下降嚴(yán)重程度,并可作為判斷患者預(yù)后最重要的指標(biāo)之一[4],了解其發(fā)病機(jī)制對(duì)指導(dǎo)治療十分重要。

腎間質(zhì)纖維化病變機(jī)制復(fù)雜,受多種細(xì)胞因子和多條信號(hào)通路的調(diào)控,目前研究較多的是TGF-β/Smad3、JAK/STAT 和 PI-3 K 通路等[5-6]。過(guò)去關(guān)于c-Myc、RhoA 和YAP 的研究多集中在腫瘤的發(fā)生發(fā)展領(lǐng)域,但是近年來(lái)也有研究發(fā)現(xiàn),c-Myc 和RhoA 均具有促纖維化作用[7-8],YAP 的持續(xù)過(guò)度活化也可促進(jìn)腎間質(zhì)纖維化的發(fā)生[9-10],但關(guān)于三者在慢性腎病腎間質(zhì)纖維化模型中的表達(dá)情況,以及其與腎間質(zhì)纖維化的相關(guān)關(guān)系尚無(wú)報(bào)道。 RhoA-YAP 信號(hào)軸可促進(jìn)多囊腎(Autosomal dominant polycystic kidney disease,ADPKD) 的發(fā)展,而c-Myc-YAP 相互作用可促進(jìn)腫瘤進(jìn)展,故推測(cè)在慢性腎病腎間質(zhì)纖維化方面,c-Myc-RhoAYAP 之間可能也存在一定聯(lián)系進(jìn)而加速腎纖維化進(jìn)程。 因此,本研究主要觀察c-Myc、RhoA 和YAP在腺嘌呤誘發(fā)慢性腎病大鼠腎小管間質(zhì)纖維化中的表達(dá)情況,并分析其與腎小管間質(zhì)纖維化之間的關(guān)系。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SPF 級(jí)雄性 SD 大鼠 30 只,體重(200±10) g,8周齡,購(gòu)自西南醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心[SCXK(川)2018-17]。 于西南醫(yī)科大學(xué)附屬中醫(yī)醫(yī)院中西醫(yī)結(jié)合研究中心動(dòng)物房飼養(yǎng)并取材[SYXK(川)2018-065]。 本實(shí)驗(yàn)經(jīng)西南醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理委員會(huì)審批(20180306114),并按實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用的3R 原則給予人道的關(guān)懷。

1.2 主要試劑與儀器

腺嘌呤(貨號(hào)V900471,批號(hào)XWBC5614 V,規(guī)格100 g,Sigma 公司,美國(guó));天狼星紅染色液(批號(hào):19.09,貨號(hào):BM1403-2×50 mL,規(guī)格 2×50 mL,合肥博美公司);RhoA 抗體、c-Myc 抗體、α-SMA 抗體(批號(hào)分別為:00048176、00060703、00070177,貨號(hào)分別為:10749-1-AP、10828-1-AP、14395-1-AP,規(guī)格:50 μL,武漢三鷹公司);YAP 抗體(貨號(hào):BS1701,規(guī)格:50 μL,bioworld 公司,美國(guó));Col1 抗體(貨號(hào):XS20180914013,bioworld 公司,美國(guó));即用型ABC 試劑盒(bioworld 公司,美國(guó)),DAB 顯色試劑盒(貨號(hào):c02-04001,武漢博士德公司);熒光定量PCR 試劑盒(Thermo scientific,美國(guó)),上下游引物:c-Myc、RhoA、YAP、Vimentin、Col1、α-SMA、GAPDH 均購(gòu)自上海生物工程有限公司。

高速冷凍離心機(jī)(Eppendorf 公司,德國(guó));全自動(dòng)生化分析儀(西門(mén)子,德國(guó));石蠟切片機(jī)(Thermo公司,美國(guó));光學(xué)顯微鏡(Nikon 公司,日本);POLYTRON?臺(tái)式勻漿機(jī)(Kinematica 公司,瑞士);逆轉(zhuǎn)錄儀(Eppendorf 公司,德國(guó));實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 儀(Eppendorf 公司,德國(guó))

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 分組及造模

30 只8 周齡雄性SD 大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1 周,大鼠依次編號(hào)后隨機(jī)將編號(hào)進(jìn)行分組,分為對(duì)照組(n=15)和模型組(n=15)。 腺嘌呤溶于蒸餾水,制成2.5%混懸液,CKD 組第1 ～4 周每日定時(shí)給予腺嘌呤混懸液 250 mg/(kg·d)灌胃,第 5 ～8 周腺嘌呤混懸液200 mg/(kg·d)隔日灌胃;對(duì)照組給予等體積生理鹽水灌胃,兩組均予以普通飼料喂養(yǎng)。 所有大鼠自由進(jìn)食及飲水,光照時(shí)間明暗各半,室溫18℃～25℃。

1.3.2 標(biāo)本采集

分別于第4、6、8 周末處死大鼠,經(jīng)腹主動(dòng)脈采血,測(cè)定腎功(血清尿素氮BUN、肌酐 SCr、胱抑素CysC);留取24 h 尿液做24 h 尿蛋白定量(24 h Pro)檢測(cè);留取腎組織置于10%中性福爾馬林液中固定,制成石蠟切片,另一部分腎組織凍存于-80℃冰箱中用。

1.3.3 HE 染色觀察腎病理改變

取大鼠腎組織石蠟塊切片(4 μm),常規(guī)脫蠟,至水后蘇木精液染色、透明、封片,觀察腎病理改變,包括腎小球、腎小管和腎間質(zhì)等,重點(diǎn)觀察小管間質(zhì)情況。 參考Radford 等[11]腎間質(zhì)損傷的評(píng)分標(biāo)準(zhǔn),每張標(biāo)本隨機(jī)選取皮質(zhì)區(qū)的10 個(gè)不含腎小球的非重復(fù)視野(×200),根據(jù)以下8 個(gè)參數(shù)判定腎小管間質(zhì)損傷情況(腎小管上皮細(xì)胞空泡變性、壞死;腎小管擴(kuò)張;小管萎縮;紅細(xì)胞管型;蛋白管型;間質(zhì)水腫;間質(zhì)細(xì)胞浸潤(rùn);間質(zhì)纖維化程度),具體評(píng)分細(xì)則見(jiàn)表1。 每個(gè)視野小管間質(zhì)評(píng)分 0 ～24 分,以10 個(gè)視野的均值作為該標(biāo)本的腎間損傷指數(shù)。

1.3.4 天狼星紅染色觀察腎間質(zhì)纖維化

腎組織固定,常規(guī)脫水包埋,切片,常規(guī)脫蠟至水;天狼星紅染色液滴染1 h;流水稍微沖洗,去除切片表面染液;Mayer 蘇木素染色液染細(xì)胞核5 ～8 min;流水沖洗10 min;常規(guī)脫水透明,中性樹(shù)膠封固、觀察。

參照膠原纖維相對(duì)面積的評(píng)定方法[12],評(píng)估天狼星紅染色膠原纖維沉積情況:每例切片選取10 個(gè)非重復(fù)視野(×200),以紅色染色為陽(yáng)性表達(dá)。 著色面積評(píng)分標(biāo)準(zhǔn):每個(gè)視野中,無(wú)損傷,間質(zhì)纖維化少于皮質(zhì)區(qū)5%=0 分;輕度損傷,間質(zhì)纖維化占皮質(zhì)區(qū)的6%～25%=1 分;中度損傷,間質(zhì)纖維化占皮質(zhì)區(qū)26%～50%=2 分;中度損傷,間質(zhì)纖維化大于皮質(zhì)區(qū)50%=3 分。 把10 個(gè)視野總分值求和后取平均值,得到該切片的纖維化程度評(píng)分。

1.3.5 免疫組化檢測(cè)大鼠腎組織 c-Myc、RhoA、YAP、Col1、α-SMA 蛋白表達(dá)

腎組織石蠟切片經(jīng)脫蠟至水處理后,按照ABC法依次行熱修復(fù)抗原,3% H2O2滅活內(nèi)源性過(guò)氧化物酶10 min,山羊血清封閉非特異抗原,滴加一抗、二抗、ABC 復(fù)合物、DAB 顯色液,蘇木素復(fù)染,常規(guī)脫水、透明、中性樹(shù)膠封片,顯微鏡下觀察,出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽(yáng)性信號(hào)。

表1 腎小管間質(zhì)損傷指數(shù)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)Table 1 Scoring criteria of renal tubulointerstitial injury

1.3.6 RT-PC 檢測(cè) c-Myc、RhoA、YAP、Col1、α-SMA、Vimentin mRNA 水平

根據(jù)試劑盒說(shuō)明書(shū)提取腎組織總RNA,再用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒將mRNA 反轉(zhuǎn)錄為cDNA。 再采用PCR 儀進(jìn)行PCR 反應(yīng),擴(kuò)增條件為:95℃預(yù)變性10 min,40 個(gè)循環(huán)(95℃ 5 s,55℃ 15 s,72℃ 30 s)。 實(shí)時(shí)記錄cDNA 的擴(kuò)增,然后進(jìn)行常規(guī)溶解曲線分析。 依據(jù)樣本PCR 反應(yīng)的CT 值,以2-△△CT表示目的基因的相對(duì)表達(dá)量。

引物序列:c-Myc 上游:5’-TTCTATCACCAG CAACAGCAGAGC-3’ 下 游: 5’-CGTAGCGACCGC AACATAGGAC-3’; RhoA 上 游: 5’-GCTTGTGGT AAGACATGCTTGCTC-3’ 下 游: 5’-GGCCTCAGA CGGTCATAATCTTCC-3 ’; YAP 上 游: 5 ’-GCCATGAACCAGAGGATCACTCAG-3’ 下 游: 5’-AGCCTCTCCTTCTCCATCTGTAGC-3’; Col-1 上 游:5’-TGTTGGTCCTGCTGGCAAGAATG-3’ 下游:5’-GTCACCTTGTTCGCCTGTCTCAC-3’;α-SMA 上游:5’-GCGTGGCTATTCCTTCGTGACTAC-3’ 下游:5’-CCATCAGGCAGTTCGTAGCTCTTC-3’; Vimentin 上游:5’-GTCCGTGTCCTCGTCCTCCTAC-3’ 下游:5’-TAGAGGCTGCGGCTAGTGCTG-3’。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 22.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,符合正態(tài)分布的計(jì)量資料采用平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示,兩組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn),兩變量間的相關(guān)性分析用Pearson檢驗(yàn),以P<0.05 為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

2 結(jié)果

2.1 兩組大鼠不同時(shí)間點(diǎn)血、尿指標(biāo)情況

與對(duì)照組比較,CKD 組各時(shí)間點(diǎn)血BUN、Scr、CysC 均明顯升高,CKD 組大鼠24 hPro 水平從 6 周開(kāi)始較對(duì)照組升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01;圖1)。

2.2 大鼠腎組織HE 染色和腎間質(zhì)損傷評(píng)分情況

HE 染色結(jié)果:對(duì)照組大鼠整體腎組織結(jié)構(gòu)清晰,皮、髓質(zhì)分界清楚,腎小球、腎小管和腎間質(zhì)的形態(tài)結(jié)構(gòu)均無(wú)明顯異常;CKD 組腎組織:第4 周末可見(jiàn)腎小管擴(kuò)張,以近端小管為主,管腔內(nèi)可見(jiàn)棕褐色物質(zhì)沉積;第6 周末可見(jiàn)遠(yuǎn)端腎小管和腎小球囊腔擴(kuò)張;第8 周末,腎組織結(jié)構(gòu)紊亂,腎小球部分萎縮,腎小管擴(kuò)張明顯,小管上皮細(xì)胞變性壞死,有較多炎細(xì)胞浸潤(rùn)(圖2)。

與對(duì)照組比較,CKD 組大鼠腎間質(zhì)損傷評(píng)分明顯增高(P<0.01),且腎間質(zhì)損傷評(píng)分隨時(shí)間延長(zhǎng)而逐漸升高,CKD 組6 周腎間質(zhì)損傷評(píng)分較4 周有所增加,但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;CKD 8 周較6 周腎間質(zhì)損傷評(píng)分顯著增高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05;圖3)。

注:與 CKD 組比較,#P<0.05;與 Con 組比較,??P<0.01。圖1 兩組大鼠不同時(shí)間點(diǎn)血、尿生化指標(biāo)變化Note.Compared with the CKD group, #P<0.05.Compared with the Con group, ??P<0.01.Figure 1 Changes of blood and urine biochemical indexes in the two groups of rats at different time points

圖2 兩組大鼠腎組織HE 染色Figure 2 HE staining of renal tissue in two groups of rats

注:與CKD 組前一時(shí)間點(diǎn)比較,#P <0.05;與Con 組同一時(shí)間點(diǎn)比較,??P <0.01圖3 腎間質(zhì)損傷評(píng)分Note.Compared with the previous time point of CKD group, #P <0.05.Compared with the same time point of Con group, ??P <0.01.Figure 3 Renal interstitial injury score

2.3 大鼠腎組織天狼星紅染色情況及腎間質(zhì)纖維化評(píng)估

天狼星紅染色結(jié)果可見(jiàn):對(duì)照組大鼠腎組織無(wú)明顯膠原纖維沉積;CKD 組自第4 周開(kāi)始可見(jiàn)腎間質(zhì)少許淡紅色膠原纖維沉積;隨著造模時(shí)間的延長(zhǎng),CKD組6 周時(shí)腎間質(zhì)紅染膠原纖維較前增多,8 周時(shí)可見(jiàn)腎間質(zhì)有大量淡紅色膠原纖維沉積(圖4)。 天狼星紅染色半定量評(píng)分結(jié)果顯示,自第6 周開(kāi)始腎間質(zhì)膠原面積較對(duì)照組明顯增加,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05;圖5),而CKD 組不同時(shí)間點(diǎn)膠原面積雖然是逐漸增加的,但差異并無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.4 兩組大鼠腎組織免疫組化染色結(jié)果

對(duì)照組大鼠腎組織中RhoA 和c-Myc 在腎小球和腎小管細(xì)胞胞核中幾乎不表達(dá);而CKD 大鼠腎小球細(xì)胞胞核可出現(xiàn)RhoA 和c-Myc 表達(dá),而腎小管細(xì)胞胞核中表達(dá)較對(duì)照組均明顯增加,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),但各時(shí)間點(diǎn)之間無(wú)明顯差異。對(duì)照組大鼠腎小球細(xì)胞無(wú)YAP 表達(dá),腎小管細(xì)胞胞質(zhì)中僅有YAP 少量表達(dá);CKD 大鼠腎小球細(xì)胞核中也有少量YAP 表達(dá),第4 周和6 周腎小管細(xì)胞胞質(zhì)和胞核中YAP 表達(dá)均有所增加,但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;第8 周 CKD 大鼠腎小管細(xì)胞胞質(zhì)和胞核中YAP 表達(dá)明顯增加,且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),以胞核表達(dá)增加更為顯著。 另外,對(duì)照組大鼠腎間質(zhì)中幾乎不表達(dá)Col1 和α-SMA,但在CKD大鼠中腎間質(zhì)Col1 和α-SMA 表達(dá)明顯增加,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),且 CKD 大鼠腎小球Col1 表達(dá)也明顯增加,見(jiàn)圖6。

2.5 大鼠腎組織 c-Myc、RohA、YAP、Col1、α-SMA和 Vimentin 的 RT-PCR 結(jié)果

RT-PCR 結(jié)果顯示:CKD 組大鼠腎組織各時(shí)間點(diǎn) c-Myc、 RohA、 YAP、 Col1、 α-SMA 和VimentinmRNA 表達(dá)量均較對(duì)照組顯著增高,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05;圖7)。

2.6 相關(guān)性分析

c-Myc、RhoA 和 YAP mRNA 表 達(dá) 與 α-SMA mRNA 表達(dá)水平均呈顯著正相關(guān)關(guān)系(r=0.818,P=0.004;r=0.77,P=0.009;r=0.83,P=0.003),與Col1mRNA 的表達(dá)水平也呈明顯正相關(guān)(r=0.988P=0.000;r=0.745P=0.013;r=0.927P=0.000),表明 RhoA、YAP 和 c-Myc 表達(dá)與腎纖維化程度密切相關(guān)。 為了進(jìn)一步探討這三者之間的關(guān)系,進(jìn)行 c-Myc、YAP 與 RhoA 相關(guān)性的分析,結(jié)果顯示:YAP 與 RhoA、c-Myc 與 RhoA 之間同樣存在著明顯的正相關(guān)關(guān)系(r= 0.661P= 0.038;r=0.721P=0.019;圖8)

圖4 大鼠腎組織天狼星紅染色Figure 4 Sirius red staining of rat kidney tissue

注:與 Con 組同一時(shí)間點(diǎn)比較,??P <0.01。圖5 天狼星紅染色膠原面積半定量評(píng)分Note.Compared with the same time point of Con group, ??P<0.01.Figure 5 Semi-quantitative scoring of collagen area by Sirius red staining

3 討論

腎小管間質(zhì)纖維化是終末期腎疾病的主要病變之一,主要表現(xiàn)為腎損傷后過(guò)量的細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)的合成和聚集,其病變機(jī)制復(fù)雜,可受多種細(xì)胞因子和信號(hào)通路的調(diào)控。 近年來(lái)有學(xué)者提出Hippo 信號(hào)通路在腎間質(zhì)纖維化過(guò)程中扮演著重要角色,其中 YAP 是關(guān)鍵因素。 c-Myc、RhoA 與 YAP在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中存在著聯(lián)系,也有研究表明他們可能參與腎纖維化進(jìn)程,但關(guān)于這三者在慢性腎病腎小管的表達(dá)情況及其與腎間質(zhì)纖維化之間的關(guān)系尚未開(kāi)展研究。 腎纖維化動(dòng)物模型造模方法眾多,包括藥物或毒物誘導(dǎo)、手術(shù)以及基因敲除等[13]。 在本研究中,我們選用腺嘌呤誘發(fā)的大鼠慢性腎病腎纖維化模型,通過(guò)檢測(cè)尿素氮、肌酐、胱抑素C 和24 h 尿蛋白定量等腎損傷的指標(biāo),再結(jié)合腎組織HE 染色結(jié)果等證實(shí)CKD 動(dòng)物造模成功;天狼星紅染色顯示模型大鼠腎間質(zhì)出現(xiàn)明顯淡紅色膠原纖維沉積,α-SMA、Col1 和 Vimentin 纖維化相關(guān)標(biāo)志物的mRNA 水平較對(duì)照組明顯增加,證實(shí)腺嘌呤誘發(fā)慢性腎病的大鼠出現(xiàn)了腎小管間質(zhì)的纖維化,且隨時(shí)間延長(zhǎng)逐漸加重。 腎纖維化的分子機(jī)制較為復(fù)雜,其中腎小管上皮細(xì)胞的損傷、修復(fù)功能障礙是導(dǎo)致腎纖維化的重要機(jī)制之一[14]。 因此,本研究的研究重點(diǎn)主要是在腎小管間質(zhì)部分。

c-Myc 是Myc 家族中最重要的成員,作為一種原癌基因,它可以刺激細(xì)胞過(guò)度生長(zhǎng)和增加新陳代謝[15-16]。 Kim 等[17]發(fā)現(xiàn)在腫瘤細(xì)胞中,c-Myc 的表達(dá)激活可導(dǎo)致RhoA 表達(dá)增加,而c-Myc 的缺失可導(dǎo)致RhoA 的缺失。 在我們的研究中,c-Myc 在腺嘌呤誘發(fā)慢性腎病大鼠的腎小管細(xì)胞胞核中高表達(dá),其mRNA 相對(duì)表達(dá)量與纖維化相關(guān)因子呈明顯正相關(guān),且c-Myc 和RhoA mRNA 之間也存在著明顯的正相關(guān)關(guān)系,提示腎間質(zhì)纖維化進(jìn)程中也可能存在c-Myc-RhoA 信號(hào)軸的激活,該過(guò)程可能還伴有TGF-β 信號(hào)通路的活化[18],但具體機(jī)制還有待進(jìn)一步的研究。

RhoA 是RhoA-GTP 酶的家族成員之一,它的表達(dá)受 c-Myc、HIF-1α/2α、Stat 6 和 NF-κB 等幾種microRNA 的調(diào)控[19],又可調(diào)控YAP 活性,但 YAP的激活又可誘導(dǎo)ARHGAP29 轉(zhuǎn)錄從而抑制RhoA活性[20]。 在我們的研究中,RhoA 和YAP 在腺嘌呤誘發(fā)CKD 大鼠腎小管細(xì)胞胞核中均高表達(dá),且mRNA 相對(duì)表達(dá)量與 α-SMA、Col1mRNA 的相對(duì)表達(dá)量均呈明顯正相關(guān)關(guān)系,表明二者可能參與了腎小管間質(zhì)纖維化進(jìn)程,且可能是通過(guò)RhoA 轉(zhuǎn)錄調(diào)控YAP 活性而實(shí)現(xiàn)的。

注:與CKD 組前一時(shí)間點(diǎn)比較,#P<0.05;與Con 組同一時(shí)間點(diǎn)比較,?P<0.05,??P<0.01。圖7 mRNA 相對(duì)表達(dá)量Note.Compared with the previous time point of CKD group, #P <0.05.Compared with the same time point of Con group, ?P<0.05, ??P<0.01.Figure 7 Relative mRNA expression

圖8 相關(guān)性分析Figure 8 Correlation analysis

目前針對(duì)YAP 在腎損傷中所扮演的角色尚無(wú)統(tǒng)一定論。 Leach 等[21]人認(rèn)為,在缺血損傷的心肌細(xì)胞中抑制YAP 活性,可以促使心肌細(xì)胞再生并改善心功能,并認(rèn)為這可能同樣適用于腎損傷及其修復(fù)。 但也有人認(rèn)為,心臟特異YAP 的表達(dá)缺失會(huì)阻礙心肌再生,導(dǎo)致心肌纖維化[22]。 我們的研究結(jié)果顯示,在腺嘌呤誘發(fā)的CKD 大鼠模型中,YAP 在腎小管細(xì)胞胞核中的表達(dá)量是明顯增加的,YAP mRNA 表達(dá)量較對(duì)照組也明顯增加,8 周末達(dá)到最高。 將8 周末YAP mRNA 表達(dá)水平與纖維化標(biāo)志物α-SMA 和Col1mRNA 的表達(dá)水平進(jìn)行相關(guān)性分析,結(jié)果顯示YAP mRNA 表達(dá)量與纖維化標(biāo)志物mRNA 呈明顯正相關(guān)關(guān)系,表明在慢性腎病中YAP的表達(dá)活化可能促進(jìn)腎間質(zhì)纖維化。 但需要注意的是,YAP 在腎小管上皮細(xì)胞中的早期表達(dá)可能是幫助AKI 所致腎小管損傷修復(fù)的[23],但當(dāng)其表達(dá)超過(guò)某一界限值則可導(dǎo)致腎間質(zhì)纖維化的發(fā)生,因此如何界定其界限范圍尚有待更進(jìn)一步的研究。

綜上所述,c-Myc、RhoA、YAP 在腺嘌呤誘發(fā)CKD 大鼠的表達(dá)可能促進(jìn)了腎小管間質(zhì)纖維化過(guò)程。 此外,RhoA 和 c-Myc、YAP 之間也存在正相關(guān)關(guān)系,推測(cè)RhoA 可能是聯(lián)系c-Myc 和YAP 的橋梁,調(diào)控c-Myc-RhoA-YAP 信號(hào)軸的活化可能延緩腎間質(zhì)纖維化進(jìn)程,但具體的機(jī)制有待進(jìn)一步深入研究證實(shí)。