馬小航 徐婧 楊一帆 劉伯陽

齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院

一、引言

眾所周知，世界衛(wèi)生組織已將癌癥、心血管病、齲病 (dental caries)并列為當(dāng)代危害健康的三大疾病。齲病已然成為了全世界人口共同關(guān)注的健康問題[1]。由于齲病進(jìn)展緩慢、不易發(fā)現(xiàn)，常被人們忽視。齲病的產(chǎn)生取決于一些重要條件：在牙表面隱蔽的部位，保持高濃度的致齲菌，并處于能夠持續(xù)發(fā)揮損害作用的口腔環(huán)境。變形鏈球菌(Streptococcus mutans,S.m)是公認(rèn)的主要致齲菌，能夠選擇性地在牙齒表面粘附，形成細(xì)菌生物膜，促進(jìn)菌斑形成，通過糖酵解產(chǎn)生能量時生成大量乳酸，使牙釉質(zhì)脫礦形成齲齒，嚴(yán)重危害人體口腔健康[2]。因此抑制S.m生長可達(dá)到預(yù)防齲病的目的。

由于菌斑的生長是持續(xù)的過程，經(jīng)常漱口可以有效控制菌斑。漱口水滲入牙間隙和窩溝，補充機械性清除菌斑的不足，逐漸被大眾接受。我國市場上常見的非處方性漱口水種類繁多，宣傳側(cè)重點不同。

本研究選擇了三種市面上常見的抑菌漱口水，分別為：漱口水A（有效成分：麝香草酚，對金黃色葡萄球菌、變形桿菌等都有抑制或殺滅作用；桉葉油素）不添加乙醇，適用人群更加廣泛，易被大眾接受；漱口水B（有效成分：西瓜霜，可有效抑制金黃色葡萄球菌和大腸桿菌[3]；乙醇）；漱口水C（有效成分：西吡氯銨，作為表面活性劑，主要通過降低表面張力而抑制和殺滅細(xì)菌；氟化鈉，促進(jìn)釉質(zhì)再礦化防齲、抑制細(xì)菌產(chǎn)酸）。因其成分有所相差，故殺菌效果不一,本實驗研究三種不同有效成分的漱口水對變形鏈球菌的抑菌效果差異，并希望選出能夠適合日?？谇环例x的一款產(chǎn)品。

二、材料與方法

（一）試驗材料

1.試驗菌株

本次實驗中所采用的菌株是S.mutans凍干粉（瑞楚生物ATCC 25175），于4℃冰箱內(nèi)保存。

2.其他材料

漱口水A、漱口水B、漱口水C、無菌生理鹽水、恒溫培養(yǎng)箱、超凈工作臺、接種環(huán)、高壓滅菌鍋、電子顯微鏡、革蘭染色染液、麥?zhǔn)霞?xì)菌濃度比濁管、小試管、濾紙。

（二）實驗方法

1.菌株準(zhǔn)備

首次活化后用接種環(huán)劃板于TSB培養(yǎng)基內(nèi)，利用燭缸法制造厭氧環(huán)境。在37℃溫箱內(nèi)培養(yǎng)48h后，挑選完整菌落進(jìn)行革蘭氏染色，在光鏡下觀察后能夠鑒定為變形鏈球菌。挑取菌落接種于BHIA培養(yǎng)基內(nèi)傳代培養(yǎng)48h，將菌種放入試管中加入蒸餾水，用麥?zhǔn)媳葷峁苷{(diào)整菌液濁度為1.5×106cfu/mL。

2.培養(yǎng)基

本實驗采用腦心浸液瓊脂培養(yǎng)基(Brain heart infusion AGAR，BHIA)，固相成分：牛腦浸粉4g，牛心浸粉4g，蛋白胨5g，酪蛋白胨16g，瓊脂13.5g；液相成分：氯化鈉5g，葡萄糖2g，磷酸氫二鈉2.5g，蒸餾水1000ml。稱BHIA培養(yǎng)基5.2g加熱溶于100ml蒸餾水，121℃高壓滅菌15min平均倒入4個培養(yǎng)皿后靜置冷卻。

3.實驗觀察與結(jié)果判斷

將直徑5.5mm的濾紙片高壓滅菌后充分烘干，放于平皿內(nèi)。用移液器將三組漱口水分別滴在紙片上。在TSB培養(yǎng)基上涂布已經(jīng)調(diào)整好濃度的菌液，每皿放入4片無菌濾紙片，用無菌NaCl溶液作陰性對照，紙片間距≥20mm，紙片中點與平皿邊緣間距≥15mm。分別置于37°恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)厭氧環(huán)境與箱內(nèi)有氧環(huán)境，靜置培養(yǎng)48h，記錄抑菌圈大小，取平均值。結(jié)果判斷：抑菌環(huán)直徑5.5～7.5mm為中度敏感，＞7.5mm為高度敏感，無抑菌圈出現(xiàn)為無效。選擇具有中、高敏感度的漱口水，在厭氧環(huán)境下（實驗證明此環(huán)境下抑菌效果更明顯）重復(fù)試驗，取平均值。

（三）統(tǒng)計學(xué)分析

應(yīng)用SPSS22.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計數(shù)據(jù)分析，計量資料符合正態(tài)分布以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，兩組間比較采用t檢驗，均以P＜0.05表示存在差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

三、結(jié)果與分析

（一）不同環(huán)境下實驗組漱口水對變形鏈球菌生長的影響

本研究用藥敏實驗檢測了不同品牌漱口水在不同條件下對變形鏈球菌的抑菌效果。漱口水A對變形鏈球菌的抑制作用結(jié)果呈現(xiàn)高度敏感，漱口水B組的抑菌環(huán)結(jié)果表現(xiàn)為無效，漱口水C對變形鏈球菌的抑制結(jié)果為中度敏感。并且在厭氧環(huán)境下兩組漱口水對變形鏈球菌抑效制果更加理想。

表1 不同品牌漱口水對變形鏈球菌的抑菌圈大小/mm

（二）抑菌結(jié)果較好的漱口水在厭氧條件下對變形鏈球菌生長的影響

將漱口水A與漱口水C重復(fù)試驗，取平均值，結(jié)果證明，漱口水C對于變形鏈球菌的抑菌能力明顯強于漱口水A。（見表2）

表2 漱口水A與漱口水C對變形鏈球菌生長的抑菌圈大小/mm

四、討論

對口腔主要致齲菌變形鏈球菌的體外抑菌實驗結(jié)果表明，漱口水C和漱口水A對于抑制S.m生長有一定作用。漱口水C的效果遠(yuǎn)優(yōu)于其他兩種品牌，針對齲病的預(yù)防作用更為可靠。

漱口水C的抗菌成分較為豐富，西吡氯銨為陽離子季銨化合物，作為表面活性劑添加其中，主要通過降低表面張力而抑制和殺滅細(xì)菌。梁紅艷等的研究證明，西吡氯銨對如金黃色葡萄球菌、白色念珠菌的革蘭陽性菌具有抑菌能力，能夠有效減少牙菌斑[4]。報道稱，其中添加的氟化鈉能夠降低釉質(zhì)溶解度、阻止釉質(zhì)進(jìn)一步脫礦，同時促進(jìn)釉質(zhì)再礦化，抑制菌斑形成[5]。故此產(chǎn)品防齲抑菌效果優(yōu)秀。

漱口水A主要抗菌成分有: 麝香草酚0．64 g /L，桉油精0.092%，冬青油0.060%，薄荷醇0.042%，具有廣譜抗微生物活性作用，可以快速的滲透牙菌斑生物膜，原位殺死較廣泛的G+菌和G-菌，還能縮小現(xiàn)有牙菌斑和牙齦炎的病灶。梁堅強的研究表明，牙齦炎病人在進(jìn)行牙周基礎(chǔ)治療，輔佐以漱口水A治療，可在一定程度上提高療效，降低牙齦出血情況、減少牙齦炎復(fù)發(fā)[6]。因此產(chǎn)品安全性高，長期使用不易造成口腔菌株改化、牙垢增加和味覺衰退等明顯副作用，也沒有口腔腫瘤和口干癥的風(fēng)險。香料成分對于控制口腔異味有一定的改善作用。

隨著人們對口腔保健的重視，漱口水漸漸走入大眾的視野。細(xì)菌的存在是齲病發(fā)生的關(guān)鍵，抑制變形鏈球菌強大的產(chǎn)酸能力、耐酸能力和附著能力是突破齲病防治的關(guān)鍵。越來越多的研究重點轉(zhuǎn)移到新型抑菌漱口水成分的開發(fā)中[7,8]，漱口水的市場前景可見一斑。