朱獻(xiàn)斐

浙江省義烏市中心醫(yī)院病理科，浙江義烏 322000

結(jié)腸癌是常見的一種消化道惡性腫瘤，其發(fā)病率呈不斷上升趨勢，嚴(yán)重威脅患者生命健康且影響患者生活質(zhì)量[1-2]。若不能及時有效地診斷和治療，患者病死率明顯增加[3-4]。腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因-1（TMSG-1）主要是從人前列腺癌細(xì)胞系中克隆出來的腫瘤轉(zhuǎn)移抑制相關(guān)基因，在腎臟、肝臟等多種惡性腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)[5]。趨化因子與其相對應(yīng)的受體結(jié)合后，在腫瘤、炎癥、胚胎發(fā)育及血管生成等病理或者生理過程中發(fā)揮重要作用。研究顯示[6]，趨化因子受體4（CXCR4）與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展關(guān)系緊密。本文主要探討結(jié)腸癌中TMSG-1 和CXCR4 表達(dá)與臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系，為診斷和治療結(jié)腸癌提供可靠的參考價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2016 年9 月—2017 年9 月浙江省義烏市中心醫(yī)院就診的結(jié)腸癌患者58 例為研究對象，收集經(jīng)手術(shù)切除的癌組織與距腫瘤部位＞5 cm 的癌旁組織。納入標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)病理證實為結(jié)腸癌；②臨床資料完整；③隨訪資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：①遺傳性非息肉病性結(jié)腸癌；②直腸及盲腸和肛管惡性腫瘤；③其他部位惡性腫瘤。納入的58 例患者男38 例，女20 例；年齡34～75 歲，平均（59.83±6.56）歲；腫瘤直徑（4.78±1.59）cm；TNM 分期：Ⅰ～Ⅱ期21 例，Ⅲ～Ⅳ期37 例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移26 例；遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移20 例。

1.2 主要試劑和儀器

主要試劑：免疫組織化學(xué)染色試劑盒（北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司，貨號：QY-5560）；DAB 顯色試劑盒（基因科技上海股份有限公司，貨號：GK347010）；鼠抗人單克隆抗體TMSG-1 抗體（北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司，貨號：CPM-0270）；兔抗人CXCR4 多克隆抗體（上海基因股份有限公司，貨號：SPC-1293D）。

主要儀器：光學(xué)顯微鏡（德國徠卡公司；型號：DM500）。

1.3 方法

1.3.1 免疫組織化學(xué)法測定TMSG-1 和CXCR4 表達(dá)TMSG-1 抗體稀釋比為（1∶100），CXCR4 抗體稀釋比為（1∶200），以磷酸鹽緩沖液（PBS）代替一抗作為陰性對照，嚴(yán)格按照免疫組化染色試劑盒說明書進(jìn)行實驗。切片經(jīng)二甲苯、酒精脫蠟、脫水后用雙氧水溶液浸泡15 min。在檸檬酸鹽緩沖液中加熱10 min，再以PBS 沖洗3 次,切片，甩干后滴加牛血清蛋白（0.25%），室溫孵育4 min。加入TMSG-1 和CXCR4 抗體，4℃孵育14 h。復(fù)溫90 min，PBS 清洗后加生物素標(biāo)記的二抗，39℃孵育25 min，取出后再以PBS 溶液清洗3 次，每次清洗5 min。用DAB 顯色劑顯色，10 min 后蘇木精復(fù)染1 min，沖洗、脫水后二甲苯進(jìn)行固定，風(fēng)干后封片。顯微鏡下觀察，由2 名高年資病理科醫(yī)師獨立閱片。

1.3.2 結(jié)果判定 于光學(xué)顯微鏡下觀察染色結(jié)果，著色的結(jié)果判定采用半定量法[7]，首先以細(xì)胞著色強(qiáng)弱度評分：無著色記0 分，淺黃色記1 分，棕黃色者記2 分，棕褐色記3 分。記錄鏡下陽性細(xì)胞數(shù)所占比例：無陽性細(xì)胞記0 分，陽性細(xì)胞≤10%記1 分，＞10%～50%記2 分，＞50%～75%記4 分。再按照上述兩者所得評分相乘結(jié)果劃分等級：其中積分≤3 分即為陰性，＞3 分為陽性：＞3～5 分為弱陽性，＞5～8 分為中等陽性，＞8～12 分則為強(qiáng)陽性。低表達(dá)指積分≤5 分高表達(dá)指積分>5 分。

1.4 觀察指標(biāo)

觀察癌組織與癌旁正常組織TMSG-1 和CXCR4陽性表達(dá)情況；不同病理特征TMSG-1 和CXCR4 表達(dá)情況；隨訪至2020 年9 月30 日，每月隨訪1 次，以患者死亡作為隨訪終點事件。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 22.0 統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，兩組間比較采用t 檢驗；計數(shù)資料用例數(shù)或百分率表示，組間比較采用χ2檢驗；采用Kaplan-Meier 法分析患者生存情況，采用Log-rank 檢驗比較生存曲線的差異。以P < 0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 癌組織與癌旁組織TMSG-1 和CXCR4 陽性表達(dá)比較

癌組織TMSG-1 和CXCR4 陽性表達(dá)率高于癌旁組織（P < 0.05）。見表1。

表1 癌組織與癌旁組織TMSG-1 和CXCR4 陽性表達(dá)比較[例（%）]

2.2 不同病理特征TMSG-1 和CXCR4 表達(dá)比較

不同性別、年齡和腫瘤直徑與TMSG-1 和CXCR4陽性表達(dá)無關(guān)聯(lián)（P > 0.05）；TNM 分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移與TMSG-1 和CXCR4 陽性表達(dá)有關(guān)聯(lián)（P < 0.05）。見表2。

2.3 TMSG-1 和CXCR4 表達(dá)與預(yù)后相關(guān)性

TMSG-1 低表達(dá)的結(jié)腸癌患者總體生存情況高于TMSG-1 高表達(dá)者（χ2=8.099，P < 0.05）；CXCR4 低表達(dá)的結(jié)腸癌患者總體生存情況高于CXCR4 高表達(dá)者（χ2=4.726，P < 0.05）。見圖1。

3 討論

結(jié)腸癌早期發(fā)病不易被確診，大部分患者入院治療時已進(jìn)展至中晚期，錯失最佳手術(shù)根治時機(jī)[8-15]。因此，早期診斷和治療結(jié)腸癌方法具有重要意義。隨著近年來對結(jié)腸癌發(fā)病機(jī)制的不斷研究，尋找可早期預(yù)警及提示預(yù)后的分子標(biāo)志物具有重要價值[16-21]。

TMSG-1 主要位于人類1 號染色體1q21.2，cDNA序列全長2392 bp 的TMSG-1 基因編碼的一種蛋白質(zhì)，由1 個TRAM-LAG1-CLN8 結(jié)構(gòu)域和1 個Homeodomain 組成，有6 個跨膜區(qū)，相對分子質(zhì)量為4.5×104，主要定位于高爾基體、細(xì)胞膜和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，而其中少量可能定位于細(xì)胞核。TMSG-1 屬新型的腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因，主要由前列腺癌細(xì)胞系克隆產(chǎn)生[22]。研究顯示[23-24]，TMSG-1 在膀胱癌、肺癌及肝細(xì)胞癌等腫瘤細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移具有抑制效果。本研究結(jié)果顯示，癌組織TMSG-1 陽性表達(dá)率高于癌旁組織（P<0.05），由此可見結(jié)腸癌組織中TMSG-1 高表達(dá)；TNM 分期Ⅲ～Ⅳ期TMSG-1 陽性表達(dá)率高于Ⅰ～Ⅱ期，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移TMSG-1 陽性表達(dá)率高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移TMSG-1 陽性表達(dá)率高于無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，提示TMSG-1表達(dá)與TNM 分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移有關(guān)聯(lián)；TMSG-1 低表達(dá)的結(jié)腸癌患者總體生存情況高于TMSG-1 高表達(dá)（P < 0.05），提示TMSG-1 表達(dá)與結(jié)腸癌預(yù)后密切相關(guān)。

表2 不同病理特征TMSG-1 表達(dá)和CXCR4 表達(dá)比較[例（%）]

圖1 TMSG-1 和CXCR4 表達(dá)與患者生存情況的關(guān)系

CXCR4 屬具有7 次跨膜結(jié)構(gòu)域的一種G 蛋白偶聯(lián)受體超家族成員，并且是腫瘤細(xì)胞表達(dá)最常見的一種趨化因子受體。CXCR4 主要通過與CXCL12 相互作用構(gòu)成生物反應(yīng)軸，從而激活抑制的多種信號通路，參與機(jī)體的多種病理過程和生理過程，如血管生成、淋巴細(xì)胞和造血系統(tǒng)的發(fā)育和成熟、炎癥細(xì)胞的活化和遷移、造血肝細(xì)胞的歸巢[25-27]。CXCR4 在惡性腫瘤的轉(zhuǎn)移和生長過程中，主要促進(jìn)血管的形成和生長，從而參與淋巴系統(tǒng)和造血系統(tǒng)的發(fā)育和成熟[28-29]。本研究結(jié)果顯示，癌組織CXCR4 陽性表達(dá)率高于癌旁組織（P<0.05），提示結(jié)腸癌組織中CXCR4 高表達(dá)；TNM 分期Ⅲ～Ⅳ期CXCR4 陽性表達(dá)率高于Ⅰ～Ⅱ期，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移CXCR4 陽性表達(dá)率高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移CXCR4 陽性表達(dá)率高于無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，提示CXCR4 表達(dá)與TNM 分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移相關(guān)聯(lián)；CXCR4 低表達(dá)的結(jié)腸癌患者總體生存情況高于CXCR4 高表達(dá)者（P < 0.05），提示CXCR4 表達(dá)與結(jié)腸癌預(yù)后密切相關(guān)。

綜上所述，結(jié)腸癌中TMSG-1 和CXCR4 呈高表達(dá)，且與TNM 分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和預(yù)后密切相關(guān)。但本研究存在一些局限之處，納入樣本量相對較少，觀察指標(biāo)相對較少，故而還需在后續(xù)中增加樣本量和觀察指標(biāo)深入研究，提供可靠的參考價值。