賈妮亞，王彩麗，劉 丹，孫笑丁

（內(nèi)蒙古科技大學(xué)包頭醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院，內(nèi)蒙古 包頭 014010）

本文研究了整合素αγβ3在IgA腎病腎組織中的表達(dá)與臨床意義，現(xiàn)報(bào)告如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料

摘選2017年1月～2018年1月我院接手術(shù)治療的腎腫瘤患者15例作為A組，取同期我院接收院的IgA腎病患者15例作為B組，A組：男9例，女6例；年齡：24～64歲，平均（45.12±3.89）歲，病程：2個(gè)月～2年，平均（1.42±0.37）年；B組：男10例，女5例；年齡：25～65歲，平均（45.22±3.74）歲；IgA腎病病程：3個(gè)月～3年，平均（1.38±0.45）年；病情分級(jí)：4例Ⅰ級(jí)，4例Ⅱ級(jí)，5例Ⅲ級(jí)，2例Ⅳ級(jí)；此研究已獲我院倫理委員會(huì)同意，且2組患者一般資料對(duì)比顯示，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），可作對(duì)比。

入組標(biāo)準(zhǔn)：活檢前無其他藥物治療；石蠟切片顯示出每1張當(dāng)中的非硬化腎小球個(gè)數(shù)均＞5個(gè)；患者及（或）家屬均同意參與研究。

排標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)：非IgA腎??；肝硬化性腎小球硬化者。

1.2 方法

儀器材料：腎活檢針、石蠟切片機(jī)、光學(xué)顯微鏡、病理圖像分析儀、電熱恒溫培養(yǎng)箱、臺(tái)式干燥箱、羊抗人αγβ3多克隆抗體、3%的H2O2去離子水、聚合物增強(qiáng)劑、辣根酶標(biāo)記羊抗兔/小鼠IgG多聚體、EDTA組織抗原修復(fù)液、檸檬酸鹽緩沖液、APES防脫片劑，DAB顯色劑以及中性樹膠。先采用二甲苯脫蠟，以梯度乙醇進(jìn)行脫水直到發(fā)生水化，再對(duì)αγβ3開展抗原修復(fù)處理，具體步驟為：

（1）選擇EDTA作為抗原修復(fù)液，劑量為10 mL，取490 mL蒸餾水混合為500 mL的工作液，先在壓力鍋中裝入清水1500 mL，將其置入，加熱煮沸，再進(jìn)行脫蠟直到水化之后的組織切片，放于不銹鋼切片架上方，入到煮沸后的緩沖液風(fēng)，將鍋蓋蓋住，再次加熱，直至噴氣，開始計(jì)時(shí)，1.5 min后停止加熱，冷卻到室溫，將玻片取出。

（2）取蒸餾水行10 min沖洗。

（3）以PBS緩沖液重復(fù)3次沖洗，5 min/次。

（4）取3%的過氧化氫滴入，于室溫下濕盒內(nèi)孵育10 min。

（5）以PBS緩沖行3次沖洗，5 min/次。

（6）滴入羊抗人αγβ3多克隆抗體，以1：100作為比例，在同1張切片內(nèi)，使用PBS進(jìn)行一抗代替，然后做陰性對(duì)照，置于4℃的濕盒當(dāng)中一夜。

（7）以PBS緩沖行3次沖洗，5 min/次。

（8）加入聚合物增強(qiáng)劑，于37℃濕盒中孵育20 min。

（9）以PBS緩沖行3次沖洗，5 min/次。

（10）滴入辣根酶標(biāo)記羊抗兔/小鼠IgG 聚體工作液，于℃濕盒中孵育20 min。

（11）以PBS緩沖行3次沖洗，5 min/次。

（12）滴入DAB顯色劑，顯色2 min，取自來水進(jìn)行沖洗，使得染色被終止，再采用蘇木素實(shí)施復(fù)染，持續(xù)3 min，再次進(jìn)行沖洗。

（13）采用鹽酸乙醇（1%）與氨水（1%）實(shí)施返藍(lán)，時(shí)間為20 s，然后使用自水全面沖洗

（14）取中性質(zhì)的樹膠封片，在顯微鏡觀察下分析結(jié)果。

1.3 指標(biāo)觀察

檢測(cè)A、B兩組患者以及B組不同疾病分級(jí)患者的整合素αγβ3的陽(yáng)性表達(dá)情況。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

以SPSS 22.0軟件分析所得數(shù)據(jù)，計(jì)量資料代表式：（±s），以t作檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)數(shù)據(jù)代表式：[n（%）]代表，以x2作檢驗(yàn)，若P＜0.05，則示差異有意義。

2 結(jié) 果

B組患者腎小球內(nèi)的整合素αγβ3陽(yáng)性表達(dá)與A組相比明顯更高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；

B組內(nèi)，Ⅰ-Ⅲ級(jí)患者其αγβ3陽(yáng)性表達(dá)呈現(xiàn)為Ⅲ級(jí)＞Ⅰ級(jí)＞Ⅱ級(jí)＞Ⅳ級(jí)，Ⅳ級(jí)表達(dá)與Ⅲ級(jí)相比明顯下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），且Ⅳ級(jí)病變患者的αγβ3表達(dá)率則明顯低于其他組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

表1 整合素αγβ3在IgA腎病腎組織中的表達(dá)情況分析（±s）

表1 整合素αγβ3在IgA腎病腎組織中的表達(dá)情況分析（±s）

腎間質(zhì)αγβ3陽(yáng)性表達(dá)/%組別 腎小球內(nèi)αγβ3陽(yáng)性表達(dá)/%A組（n=15） 10.21±7.49 10.85±4.61Ⅰ級(jí)（n=4） 16.18±1.98 11.11±1.21Ⅱ級(jí)（n=4） 19.58±0.99 11.49±0.79Ⅲ級(jí)（n=5） 28.35±1.99 12.56±0.85Ⅳ級(jí)（n=2） 17.72±2.17 7.79±2.44

3 討 論

IgA腎病在臨床中非常常見，雖然目前臨床關(guān)于該病具體的發(fā)病機(jī)制還未給出明確答案，但諸多研究顯示該病的發(fā)生與細(xì)胞外基質(zhì)異常積聚相關(guān)。整合素主要是指α與β亞基以非共價(jià)鍵連接形成的一種異二聚體，其可以對(duì)細(xì)胞與細(xì)胞、細(xì)胞與基質(zhì)相互之間的作用進(jìn)行介導(dǎo)，使得細(xì)胞發(fā)生增殖、遷徙，同時(shí)對(duì)其分化與凋亡也有誘導(dǎo)作用，此外，對(duì)細(xì)胞的外基質(zhì)沉積現(xiàn)象也有介導(dǎo)作用[3]。

在健康人體的腎組織當(dāng)中，整合素αγβ3主要于腎小球系膜細(xì)胞、上皮細(xì)胞以及內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)，但在狼瘡性腎炎腎組織也發(fā)現(xiàn)有αγβ3上升現(xiàn)象，有研究在腎小球內(nèi)部的間質(zhì)疤痕還有受損的腎小管當(dāng)中都發(fā)現(xiàn)了αγ增強(qiáng)表達(dá)現(xiàn)象，而間質(zhì)和小管αγ異常與組織發(fā)生慢性損傷存在一定關(guān)系，就明慢性腎臟疾病發(fā)展中中有整合素有一定作用[5]。本次研究顯示，B組患者腎組織中的整合素αγβ3陽(yáng)性表達(dá)與A組相比明顯更高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；而在B組患者中，Ⅲ級(jí)病變患者的腎小球內(nèi)整合素αγβ3陽(yáng)性表達(dá)高于Ⅰ級(jí)、Ⅱ級(jí)以及Ⅳ級(jí)，Ⅳ級(jí)表達(dá)與Ⅲ級(jí)相比明顯下降，但與Ⅰ級(jí)、Ⅱ級(jí)病變則無明顯差異；關(guān)于腎病的腎間質(zhì)表達(dá)，Ⅰ-Ⅲ級(jí)病變患者的整合素αγβ3表達(dá)率與A組無明顯差異，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），但Ⅳ級(jí)病變患者的αγβ3表達(dá)率則明顯低于其他組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

綜上所述，整合素αγβ3于IgA腎病患者的腎組織確實(shí)存在異常表達(dá)現(xiàn)象，αγβ3表達(dá)越強(qiáng)表明患者的腎組織病變?cè)街兀A(yù)后則越差，提示整合素αγβ3在IgA腎病發(fā)展有著復(fù)雜且重要的作用，故臨床可以通過整合素αγβ3表達(dá)強(qiáng)度對(duì)IgA腎病患者的預(yù)后效果進(jìn)行預(yù)測(cè)，若αγβ3高強(qiáng)度表達(dá)則提示可能預(yù)后不良。