王 霞，代紅偉，徐 丹

高血壓是老年人群的常見癥狀之一，我國老年高血壓發(fā)病率高達(dá)50%左右[1]。早期研究認(rèn)為，高血壓是人體老齡化的生理現(xiàn)象，但隨著研究深入，臨床發(fā)現(xiàn)老年高血壓嚴(yán)重影響病人生活質(zhì)量，而積極地治療可降低心血管事件發(fā)生率[2]。因此，分析老年高血壓發(fā)病機(jī)制并積極介入治療極其必要。血漿蛋白Z是抗凝血輔因子的一種，其基因具有14個單核苷酸基因多態(tài)性，有研究發(fā)現(xiàn)，這些基因位點突變與多種心血管事件密切相關(guān)[3]。本研究探討老年高血壓病人血漿蛋白Z水平變化及蛋白Z內(nèi)含子FG79A基因多態(tài)性的臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2018年1月—2019年1月在我院治療的老年高血壓病人220例作為觀察組，其中高血壓1級65例，高血壓2級110例，高血壓3級45例。納入標(biāo)準(zhǔn)：符合世界衛(wèi)生組織制定的原發(fā)性高血壓診斷標(biāo)準(zhǔn)；年齡≥60歲，漢族；病人及家屬知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并惡性腫瘤、肝腎功能障礙、甲狀腺疾病、自身免疫性疾病等其他基礎(chǔ)性疾??；近3個月內(nèi)有出血史或手術(shù)史。選取同期健康體檢者220名作為對照組，兩組年齡和性別比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。詳見表1。

表1 兩組年齡和性別比較

1.2 實驗方法 抽取兩組研究對象靜脈血5mL，采用Promega 全血DNA提取試劑盒進(jìn)行DNA提取，之后選用賽默飛世爾科技ABI Veriti 梯度PCR儀進(jìn)行擴(kuò)增，反應(yīng)體系：1 μL dNTP，2 μL 10×buffer，0.5 μL Taq酶，1 μL上下游引物(引物由上海桑尼生物科技有限公司提供)，2 μL DNA模板，12 μL 去離子水。反應(yīng)條件：94 ℃，3 min；94 ℃，30 s；58 ℃，30 s；70 ℃，30 s；共32個循環(huán)，70 ℃，延伸5 min，采用2%瓊脂糖凝膠電泳PCR產(chǎn)物，之后進(jìn)行酶切反應(yīng)。體系如下：10 μL PCR產(chǎn)物，2 μL 10×buffer Tango，7 μL ddH2O，1 μL KspAI酶，將樣本置于37 ℃條件下水浴過夜，之后采用EB進(jìn)行染色并電泳，采用英國馬爾文凝膠成像儀讀取結(jié)果。采用酶聯(lián)免疫吸附法測定兩組研究對象血漿蛋白Z表達(dá)水平，試劑盒由法國Stago公司生產(chǎn)。相關(guān)操作參照說明書進(jìn)行。

2 結(jié) 果

2.1 蛋白Z內(nèi)含子FG79A基因型 經(jīng)KspA1酶酶切結(jié)果顯示：蛋白Z內(nèi)含子FG79A基因型包括GG、GA、AA 3種基因型。詳見圖1。

圖1 蛋白Z內(nèi)含子FG79A位點酶切結(jié)果電泳圖(M為Marker；1和4為GG型，2為GA型，3為AA型)

2.2 觀察組和對照組蛋白Z內(nèi)含子FG79A基因型及等位基因比較 觀察組和對照組蛋白Z內(nèi)含子FG79A基因型分布符合Hardy-Weinberg平衡檢驗(P>0.05)；觀察組和對照組蛋白Z內(nèi)含子FG79A基因型和等位基因分布比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。詳見表2。

表2 兩組蛋白Z內(nèi)含子FG79A基因型及等位基因比較 單位：例(%)

2.3 觀察組不同高血壓分級病人性別、年齡、基因型比較 觀察組不同高血壓分級病人性別、年齡、蛋白Z內(nèi)含子FG79A基因型分布比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。詳見表3。

表3 觀察組不同高血壓分級病人性別、年齡、基因型比較

2.4 兩組血漿蛋白Z水平比較 觀察組血漿蛋白Z高于對照組(P<0.01)。詳見表4。

表4 兩組血漿蛋白Z水平比較(±s) 單位：g/L

2.5 觀察組不同高血壓分級病人血漿蛋白Z水平比較 高血壓分級越高病人血漿蛋白Z水平越高，其中高血壓分級3級病人血漿蛋白Z高于高血壓1級和2級病人(P<0.05)。詳見表5。

表5 觀察組不同高血壓分級病人血漿蛋白Z水平比較(±s) 單位：g/L

2.6 觀察組不同基因型病人血漿蛋白Z水平比較 觀察組血漿蛋白Z內(nèi)含子FG79A不同基因型病人血漿蛋白Z水平比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。詳見表6。

表6 觀察組不同基因型病人血漿蛋白Z水平比較(±s) 單位：g/L

3 討 論

目前臨床未明確老年高血壓發(fā)病機(jī)制，相關(guān)研究認(rèn)為，動脈壁內(nèi)膜、中層變厚，脂質(zhì)、鈣鹽沉積，凝血因素及遺傳等因素與疾病發(fā)生密切相關(guān)[4]。蛋白Z是肝臟合成的一種單鏈糖蛋白，是參與凝血、抗凝的重要因子。蛋白Z基因位于人體染色體13q34，有8個內(nèi)含子和9個外顯子[5]。有研究發(fā)現(xiàn)，蛋白Z基因啟動子A-13G及內(nèi)含子FG79A基因多態(tài)性與缺血性腦卒中密切相關(guān)，且蛋白Z基因FG79A基因具有保護(hù)缺血性腦卒中的作用，其機(jī)制可能與FG79A等位基因突變導(dǎo)致蛋白Z水平降低有關(guān)[6]。相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，蛋白Z基因FG79A位點頻率與蛋白Z蛋白水平降低有關(guān)[7]。關(guān)于蛋白Z基因FG79A位點多態(tài)性與老年高血壓之間關(guān)系的臨床研究較少。

本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，觀察組和對照組蛋白Z內(nèi)含子FG79A基因型和等位基因比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；觀察組不同高血壓分級病人蛋白Z內(nèi)含子FG79A基因型分布比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，表明老年高血壓病人蛋白Z內(nèi)含子FG79A基因型和等位基因與健康人群相似，提示蛋白Z內(nèi)含子FG79A基因型和等位基因與老年高血壓關(guān)系不顯著。有研究發(fā)現(xiàn)，高血壓病人蛋白Z內(nèi)含子FG79A基因多態(tài)性與健康對照組相似，蛋白Z內(nèi)含子FG79A基因多態(tài)性與高血壓無關(guān)[8]，與本研究結(jié)果一致，提示可從其他基因多態(tài)性探討高血壓病機(jī)。相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，不同人種蛋白Z內(nèi)含子FG79A基因型分布比例不同，歐洲人種蛋白Z內(nèi)含子FG79A基因G→A突變比例低于漢族人種，表明不同種族蛋白Z基因多態(tài)性不同，對某些疾病的易感性可能不一樣[9]。

蛋白Z可誘導(dǎo)凝血酶與凝血因子Ⅹ結(jié)合并參與止血，促使蛋白Z依賴性蛋白酶抑制物抑制凝血因子Ⅹa活性[10-11]。機(jī)體蛋白Z表達(dá)不足，減弱蛋白Z對多種凝血因子抑制效應(yīng)，病人血液處于高凝狀態(tài)，最終出現(xiàn)動脈粥樣硬化、高血壓等心腦血管疾病[12]。本研究結(jié)果顯示，觀察組血漿蛋白Z表達(dá)水平高于對照組，且高血壓分級越高的病人血漿蛋白Z水平越高，表明老年高血壓病人存在蛋白Z水平應(yīng)激性高表達(dá)，對病人血液高凝狀態(tài)調(diào)節(jié)具有重要意義。蛋白Z高表達(dá)對維持機(jī)體抗凝平衡具有重要作用，較多研究認(rèn)為，蛋白Z高表達(dá)是心腦血管缺血性疾病的獨立危險因素[13-14]。有研究發(fā)現(xiàn)，雖然高血壓人群蛋白Z表達(dá)水平升高，若病人曾發(fā)生心肌梗死或腦梗死，蛋白Z表達(dá)水平大幅下降，且低于健康人群，分析原因可能為該類病人血漿含有大量炎性因子，而炎性因子具有促蛋白Z低表達(dá)的作用[15]。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，觀察組蛋白Z內(nèi)含子FG79A不同基因型病人血漿蛋白Z水平比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，表明蛋白Z內(nèi)含子FG79A基因多態(tài)性與血漿蛋白Z表達(dá)水平無關(guān)，分析心肌梗死或腦梗死病人蛋白Z低表達(dá)可能與自身消耗有關(guān)。

本研究亞組分析結(jié)果顯示，血漿蛋白Z水平高表達(dá)是老年高血壓的影響因素，但與蛋白Z內(nèi)含子FG79A基因多態(tài)性無關(guān)，同時蛋白Z內(nèi)含子FG79A基因多態(tài)性與老年高血壓無關(guān)。蛋白Z基因是以多態(tài)性還是聯(lián)合其他因子參與高血壓尚無結(jié)論，有待進(jìn)一步研究。綜上所述，蛋白Z內(nèi)含子FG79A基因多態(tài)性與老年高血壓疾病進(jìn)展無關(guān)，而血漿蛋白Z水平在老年高血壓發(fā)病過程中可能發(fā)揮一定的作用。