代小蘭 竺東杰 陳小麗 李紅霞

缺血性腦卒中是臨床常見(jiàn)的腦血管疾病，具有較高的致殘、致死率和復(fù)發(fā)率。通過(guò)藥物溶栓或血管介入手術(shù)恢復(fù)血流再灌注、挽救缺血半暗帶神經(jīng)元是改善缺血性腦卒中患者預(yù)后的關(guān)鍵。但再灌注過(guò)程將病理性刺激炎癥因子大量釋放、誘導(dǎo)缺血半暗帶神經(jīng)元凋亡，破壞血腦屏障通透性而繼發(fā)血管源性腦水腫等，即腦缺血再灌注（ischemia reperfusion，I/R）損傷，是導(dǎo)致缺血性腦損傷加重甚至死亡的重要因素[1-2]。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)是普遍存在于真核細(xì)胞中的一種膜性細(xì)胞器，是機(jī)體調(diào)控炎癥反應(yīng)、細(xì)胞凋亡的重要通路[3-4]。白芍總苷（total glucosides of paeony，TGP）是從中藥白芍中提取的一類(lèi)活性化合物，具有良好的抗炎、抗凋亡等藥理作用[5-6]；能夠通過(guò)抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激減輕心肌I/R 損傷[7]。本實(shí)驗(yàn)研究TGP 對(duì)大鼠腦I/R 損傷及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的影響，現(xiàn)將研究結(jié)果報(bào)道如下。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SPF 級(jí)成年雄性SD 大鼠240 只，8周齡，體質(zhì)量220～260g，購(gòu)自寧波大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心[SYXK（浙）2019-0005]，動(dòng)物合格證號(hào)：20191106 013。實(shí)驗(yàn)前于光照/黑暗12h 交替、溫度（25±1）℃、相對(duì)濕度（60±10）%的環(huán)境中適應(yīng)性飼養(yǎng)7 天。本實(shí)驗(yàn)經(jīng)中國(guó)人民解放軍聯(lián)勤保障部隊(duì)第906 醫(yī)院倫理委員會(huì)審核通過(guò)，審批號(hào)：（2019）倫審（062）號(hào)。

1.2 藥物與試劑 TGP 膠囊（規(guī)格：0.3g/粒，批號(hào)201904012，含芍藥苷不少于104mg）購(gòu)自寧波立華制藥有限公司；尼莫地平片（nimodipine，NMP，規(guī)格：30mg/片，批號(hào)190527）購(gòu)自湖南百草制藥有限公司。原位末端轉(zhuǎn)移酶標(biāo)記（TUNEL） 試劑盒購(gòu)自德國(guó)Roche 公司（批號(hào)2101401）；腫瘤壞死因子-α（TNFα）、白細(xì)胞介素-1β（IL-1β）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）酶聯(lián)免疫（ELISA）試劑盒購(gòu)自北京索萊寶生物技術(shù)有限公司（貨號(hào)：SEKR-0009、SEKR-0002、SEKR-0005）；葡萄糖調(diào)控蛋白78（GRP78）、磷酸化胰腺內(nèi)質(zhì)網(wǎng)激酶（p-PERK）、C/EBP 同源蛋白（CHOP）、核因子-κB （NF-κB）、激活型半胱胺酸蛋白酶-12（Cleaved Caspase-12）、激活型半胱胺酸蛋白酶-3（Cleaved Caspase-3）、β-actin 抗體購(gòu)自北京博奧森生物技術(shù)有限公司（貨號(hào)：bs-1219R、bs-23340R、bs-1630R、bs-23217R、bs-1105R、bsm-33199M、bs-0061R）；IgG 二抗購(gòu)自杭州華安生物技術(shù)有限公司（批號(hào)G190319）；ECL 顯色試劑盒購(gòu)自上海翊圣生物科技有限公司（批號(hào)36208ES60）。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 動(dòng)物分組、給藥與造模 將240 只SD 大鼠按照隨機(jī)數(shù)字表法分為六組，分別為假手術(shù)組，模型組，TGP 低（50mg/kg）、中（100mg/kg）、高（200mg/kg）劑量組和尼莫地平（NMP，15mg/kg）組，每組40 只。造模前7 天開(kāi)始，TGP 低、中、高劑量組大鼠分別1次/天給予濃度50、100、200mg/mL 的TGP 溶液灌胃，NMP 組1 次/天給予濃度15mg/mL 的NMP 溶液灌胃，假手術(shù)組和模型組1 次/天給予生理鹽水灌胃，給藥劑量均為1mL/kg。除假手術(shù)組外，其余各組大鼠均參照甘雨等[8]報(bào)道的方法復(fù)制腦I/R 大鼠模型：術(shù)前12h 禁食、自由飲水，實(shí)施麻醉后取仰臥位，沿頸部正中切口，鈍性分離右側(cè)頸總、頸外、頸內(nèi)動(dòng)脈，夾閉頸總動(dòng)脈并結(jié)扎頸外動(dòng)脈后，在頸外動(dòng)脈切口并插入線栓進(jìn)入頸內(nèi)動(dòng)脈，遇阻力止（深度距頸外、頸內(nèi)動(dòng)脈分叉處約18mm），固定線栓，即堵塞大腦中動(dòng)脈，逐層縫合并消毒；2h 后提拉線栓至遇阻力止，即實(shí)現(xiàn)再灌注。假手術(shù)組大鼠鈍性分離右側(cè)頸總、頸外、頸內(nèi)動(dòng)脈，不做插線栓處理。

2.2 mNSS 評(píng)分法進(jìn)行大鼠神經(jīng)功能缺損評(píng)分 各組隨機(jī)取10 只大鼠，采用18 分制的改良神經(jīng)功能缺損評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)（modified neureological severity scores，mNSS）[9]，由2 名實(shí)驗(yàn)人員對(duì)每只大鼠獨(dú)立進(jìn)行mNSS 評(píng)分后取平均值，得分越高則說(shuō)明神經(jīng)功能缺損越嚴(yán)重。

2.3 伊文思藍(lán)滲透法檢測(cè)血腦屏障通透性 mNSS評(píng)分完成后，以4mL/kg 劑量通過(guò)尾靜脈注入濃度2%的伊文思藍(lán)溶液，1h 后麻醉、開(kāi)胸，經(jīng)左心室-右心耳通路灌注300mL 生理鹽水，斷頭取右側(cè)大腦、研磨勻漿后，加入3 倍量濃度50%的甲酰胺溶液，60℃孵育24h 后離心（離心半徑10cm，轉(zhuǎn)速3000rpm、時(shí)間10min）取上清液，通過(guò)酶標(biāo)儀檢測(cè)610nm 處吸光度值（A 值），根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算伊文思藍(lán)含量，伊文思藍(lán)含量越高則說(shuō)明血腦屏障通透性越高。

2.4 2，3，5-氯化三苯基四氮唑（TTC）染色法檢測(cè)腦組織梗死體積 各組再隨機(jī)取10 只大鼠，麻醉后頸椎處死，斷頭取腦，去除小腦、腦干后，-20℃冷凍20min 后，沿視交叉水平行方向等距切片（厚度2mm）。置于37℃的1%濃度的TTC 溶液中，避光孵育，每5min 翻動(dòng)1 次，共30min。染色后觀察，灰白色為腦梗死區(qū)、紅色為正常腦組織區(qū)域，拍照后應(yīng)用Image-Pro Plus 6.0 圖像分析系統(tǒng)計(jì)算梗死面積，腦梗死體積（%）=（梗死面積×切片厚度/腦體積）×100%。

2.5 腦組織病理學(xué)檢查和神經(jīng)細(xì)胞凋亡觀察 各組再隨機(jī)取10 只大鼠，麻醉后開(kāi)胸，經(jīng)左心室-右心耳通路依次灌注300mL 生理鹽水、300mL 4%多聚甲醛溶液，斷頭取腦，去除小腦、腦干后，置4%多聚甲醛溶液中固定24h，然后依次進(jìn)行梯度乙醇脫水、二甲苯透明、石蠟包埋，4μm 厚度連續(xù)切片，脫蠟水化后，（1）行常規(guī)HE 染色（蘇木精染色10min、0.5%鹽酸乙醇分化3s、0.5%尹紅乙醇染色1min、80%乙醇分化3s 后脫水）、中性樹(shù)膠封片后通過(guò)光學(xué)顯微鏡觀察腦組織病理學(xué)改變并照相保存；（2）遵照TUNEL 試劑盒操作說(shuō)明，行TUNEL 染色，50%甘油封片后通過(guò)光學(xué)顯微鏡觀察神經(jīng)細(xì)胞凋亡狀況，細(xì)胞核黃褐色為陽(yáng)性著色；計(jì)算凋亡指數(shù)（apoptosis index，AI）：每只大鼠分別取5 張相同腦部位TUNEL 染色切片，由2 名實(shí)驗(yàn)人員于顯微鏡下獨(dú)立計(jì)數(shù)細(xì)胞總數(shù)和凋亡細(xì)胞數(shù)，取平均值，AI（%）=（凋亡細(xì)胞數(shù)/細(xì)胞總數(shù)）×100%。

2.6 腦組織TNF-α、IL-1β、IL-6 水平檢測(cè) 取各組剩余的10 只大鼠，麻醉后脊椎脫臼處死，在冰上斷頭取腦，去除小腦、腦干，加入9 倍量4℃裂解液，研磨勻漿，4℃離心（半徑10cm，轉(zhuǎn)速3500rpm、時(shí)間5min）取上清液，遵照ELISA 試劑盒操作說(shuō)明進(jìn)行處理，通過(guò)酶標(biāo)儀檢測(cè)TNF-α、IL-1β、IL-6 水平。

2.7 腦組織蛋白表達(dá)檢測(cè) 取腦組織勻漿液，4℃離心（半徑10cm，轉(zhuǎn)速6000rpm、時(shí)間10min）取上清液，然后4℃離心（半徑10cm，轉(zhuǎn)速12000rpm、時(shí)間30min）取沉淀，Bradford 法測(cè)定總蛋白量后95℃水浴使蛋白變性，然后通過(guò)Western blot 法檢測(cè)蛋白表達(dá)：以30μg 總蛋白量上樣，十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳分離，濕法轉(zhuǎn)PVDF 膜，5%脫脂牛奶室溫封閉1h，TBST 洗膜3 次后滴加目標(biāo)蛋白和β-actin 一抗4℃孵育過(guò)夜，TBST 洗膜3 次后滴加IgG 二抗室溫孵育2h，TBST 洗膜3 次后滴加ECL 顯色并通過(guò)凝膠成像儀形成條帶；通過(guò)Image J 軟件檢測(cè)條帶灰度值，以β-actin 為內(nèi)參計(jì)算目標(biāo)蛋白相對(duì)表達(dá)量。

2.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 17.0 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（） 表示，多組間比較采用單因素方差分析，兩組間比較行LSD 檢驗(yàn)，P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 TGP 對(duì)腦I/R 大鼠mNSS 評(píng)分和腦組織伊文思藍(lán)滲透量的影響 與假手術(shù)組比較，模型組大鼠mNSS 評(píng)分、腦組織伊文思藍(lán)滲透量均顯著升高（P均<0.01）；與模型組比較，TGP 中、高劑量組和NMP組mNSS 評(píng)分、伊文思藍(lán)滲透量顯著降低（P 均<0.01）；與NMP 組比較，TGP 高劑量組mNSS 評(píng)分和伊文思藍(lán)滲透量顯著降低（P 均<0.01）。見(jiàn)表1。

3.2 TGP 對(duì)腦I/R 大鼠腦梗死體積的影響 與假手術(shù)組比較，模型組大鼠腦梗死體積顯著增大（P<0.01）；與模型組比較，TGP 中、高劑量組和NMP 組腦梗死體積顯著縮?。≒ 均<0.01）；TGP 高劑量組和NMP 組大鼠腦梗死體積比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見(jiàn)表1。

3.3 TGP 對(duì)腦I/R 大鼠腦組織病理學(xué)改變的影響假手術(shù)組大鼠大腦皮質(zhì)神經(jīng)細(xì)胞形態(tài)規(guī)則、結(jié)構(gòu)清晰完整，未見(jiàn)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)；模型組大鼠大腦皮質(zhì)神經(jīng)細(xì)胞數(shù)量減少，形態(tài)呈三角形或多邊形，排列不規(guī)則，胞膜破裂、邊界不清，胞核固縮、深染，空泡化變性，大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)等病理改變；與模型組比較，TGP 各劑量組和NMP 組皮質(zhì)神經(jīng)細(xì)胞上述缺血性病理學(xué)呈不同程度減輕，其中TGP 高劑量組皮質(zhì)神經(jīng)細(xì)胞排列較為整齊、空白變性較少、僅少量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，效果優(yōu)于其他組。見(jiàn)圖1。

3.4 TGP 對(duì)腦I/R 大鼠神經(jīng)細(xì)胞凋亡的影響 假手術(shù)組大鼠大腦皮質(zhì)可見(jiàn)極少量凋亡神經(jīng)細(xì)胞；與假手術(shù)組比較，模型組大鼠大腦皮質(zhì)神經(jīng)細(xì)胞凋亡數(shù)量明顯增多，AI 顯著升高（P<0.01）；與模型組比較，TGP 各劑量組和NMP 組大腦皮質(zhì)神經(jīng)細(xì)胞凋亡數(shù)量不同程度減少，TGP 低、中、高劑量組和NMP 組AI顯著降低（P<0.05 或P<0.01）；與NMP 組比較，TGP高劑量組AI 顯著降低（P<0.01）。見(jiàn)表1、圖2。

3.5 TGP 對(duì)腦I/R 大鼠腦組織TNF-α、IL-1β、IL-6水平的影響 與假手術(shù)組比較，模型組大鼠腦組織TNF-α、IL-1β、IL-6 水平顯著升高（P 均<0.01）；與模型組比較，TGP 中、高劑量組和NMP 組TNF-α、IL-1β、IL-6 水平顯著降低（P 均<0.01）；與NMP 組比較，TGP 高劑量組TNF-α、IL-6 水平顯著降低（P 均<0.01），兩組IL-1β 水平比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見(jiàn)表2。

3.6 TGP 對(duì)腦I/R 大鼠腦組織GRP78、p-PERK、CHOP 蛋白表達(dá)的影響 與假手術(shù)組比較，模型組大鼠腦組織GRP78、p-PERK、CHOP 蛋白表達(dá)量顯著增加（P 均<0.01）；與模型組比較，TGP 中、高劑量組和NMP 組GRP78、p-PERK、CHOP 表達(dá)量顯著減少（P<0.05 或P<0.01）；與NMP 組比較，TGP 高劑量組GRP78、p-PERK、CHOP 表達(dá)顯著減少（P 均<0.01）。見(jiàn)表3、圖3。

3.7 TGP 對(duì)腦I/R 大鼠腦組織NF-κB、Cleaved Caspase-12、Cleaved Caspase-3 蛋白表達(dá)的影響與假手術(shù)組比較，模型組大鼠腦組織NF-κB、Cleaved Caspase-12、Cleaved Caspase-3 蛋白表達(dá)量顯著增加（P 均<0.01）；與模型組比較，TGP 中、高劑量組和NMP 組NF-κB、Cleaved Caspase-12、Cleaved Caspase-3 表達(dá)量顯著減少（P<0.05 或P<0.01）；與NMP 組比較，TGP 高劑量組NF-κB、Cleaved Caspase-3 表達(dá)顯著減少（P<0.01），兩組Cleaved Caspase-12 表達(dá)量比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見(jiàn)表4、圖4。

表1 TGP 對(duì)腦I/R 大鼠mNSS 評(píng)分、腦組織伊文思藍(lán)滲透量、腦梗死體積和AI 的影響（）

表1 TGP 對(duì)腦I/R 大鼠mNSS 評(píng)分、腦組織伊文思藍(lán)滲透量、腦梗死體積和AI 的影響（）

注：假手術(shù)組和模型組予生理鹽水1mL/kg 灌胃；TGP 低、中、高劑量組予濃度50、100、200mg/mL 的TGP 溶液1mL/kg 灌胃；NMP 組予濃度15mg/mL 的NMP 溶液1mL/kg 灌胃；I/R 為缺血再灌注；mNSS 為改良神經(jīng)功能缺損評(píng)分；AI 為凋亡指數(shù)；TGP 為白芍總苷；NMP 為尼莫地平；與假手術(shù)組比較，aP<0.01；與模型組比較，bP<0.05，bbP<0.01；與NMP 組比較，cP<0.01

圖1 TGP 對(duì)腦I/R 大鼠腦組織病理學(xué)改變的影響（HE ×200）

圖2 TGP 對(duì)腦I/R 大鼠神經(jīng)細(xì)胞凋亡的影響（TUNEL ×200）

4 討論

腦I/R 過(guò)程將病理性刺激炎癥因子大量釋放而引發(fā)系列炎癥反應(yīng)。趙瑩等[10]研究發(fā)現(xiàn)，腦I/R 后小膠質(zhì)細(xì)胞迅速活化并釋放IL-1β，使IL-1β 在腦I/R后1h 即達(dá)到峰值，是促進(jìn)B 細(xì)胞和T 細(xì)胞活化而觸發(fā)免疫反應(yīng)的重要因子，并且IL-1β 能夠刺激巨噬細(xì)胞、星形膠質(zhì)細(xì)胞、單核細(xì)胞等進(jìn)一步合成與分泌TNF-α 等炎癥因子。IL-6 則能夠誘導(dǎo)白細(xì)胞黏附并造成微循環(huán)障礙，引起缺血區(qū)細(xì)胞損傷。

缺血半暗帶神經(jīng)細(xì)胞凋亡是導(dǎo)致缺血性腦損傷進(jìn)行性加重的重要機(jī)制。細(xì)胞凋亡過(guò)程受多種基因蛋白調(diào)控，其中Caspase-3 在Bax、Cleaved Caspase-12、CHOP 等作用下裂解活化后，能夠酶解切割細(xì)胞結(jié)構(gòu)蛋白、修復(fù)蛋白等而破壞細(xì)胞內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定，從而參與細(xì)胞凋亡啟動(dòng)和執(zhí)行過(guò)程[11]。血腦屏障能夠阻止有害大分子物質(zhì)由血管進(jìn)入腦組織，對(duì)維持中樞神經(jīng)內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定具有重要意義。血腦屏障通透性升高是血管源性腦水腫的主要原因，而腦水腫是缺血性腦病致殘、致死的重要病理基礎(chǔ)。研究發(fā)現(xiàn)，TNF-α和IL-1β 能夠直接破壞血腦屏障結(jié)構(gòu)，并且能夠通過(guò)激活黏附因子而間接破壞血腦屏障結(jié)構(gòu)[12]。正常生理狀態(tài)下伊文思藍(lán)在血管內(nèi)與蛋白結(jié)合而不能通過(guò)血腦屏障，當(dāng)血腦屏障結(jié)構(gòu)受損、通透性異常升高時(shí)伊文思藍(lán)則可進(jìn)入腦組織，所以伊文思藍(lán)滲透量能夠反映血腦屏障通透性。

表2 TGP 對(duì)腦I/R 大鼠腦組織TNF-α、IL-1β、IL-6水平的影響（）

表2 TGP 對(duì)腦I/R 大鼠腦組織TNF-α、IL-1β、IL-6水平的影響（）

注：假手術(shù)組和模型組予生理鹽水1mL/kg 灌胃；TGP 低、中、高劑量組予濃度50、100、200mg/mL 的TGP 溶液1mL/kg 灌胃；NMP 組予濃度15mg/mL 的NMP 溶液1mL/kg 灌胃；I/R 為缺血再灌注；TNF-α 為腫瘤壞死因子-α；IL-1β 為白細(xì)胞介素-1β；IL-6 為白細(xì)胞介素-6；TGP 為白芍總苷；NMP 為尼莫地平；與假手術(shù)組比較，aP<0.01；與模型組比較，bP<0.01；與NMP 組比較，cP<0.01

圖3 TGP 對(duì)腦I/R 大鼠腦組織GRP78、p-PERK、CHOP 蛋白表達(dá)的影響

表3 TGP 對(duì)腦I/R 大鼠腦組織GRP78、p-PERK、CHOP 蛋白表達(dá)的影響（）

表3 TGP 對(duì)腦I/R 大鼠腦組織GRP78、p-PERK、CHOP 蛋白表達(dá)的影響（）

注：假手術(shù)組和模型組予生理鹽水1mL/kg 灌胃；TGP 低、中、高劑量組予濃度50、100、200mg/mL 的TGP 溶液1mL/kg 灌胃；NMP 組予濃度15mg/mL 的NMP 溶液1mL/kg 灌胃；I/R 為缺血再灌注；GRP78 為葡萄糖調(diào)控蛋白78；p-PERK 為磷酸化胰腺內(nèi)質(zhì)網(wǎng)激酶；CHOP 為C/EBP 同源蛋白；TGP 為白芍總苷；NMP 為尼莫地平；與假手術(shù)組比較，aP<0.01；與模型組比較，bP<0.05，bbP<0.01；與NMP 組比較，cP<0.01

圖4 TGP 對(duì)腦I/R 大鼠腦組織NF-κB、Cleaved Caspase-12、Claeved Caspase-3 蛋白表達(dá)的影響

表4 TGP 對(duì)腦I/R 大鼠腦組織NF-κB、Cleaved Caspase-12、Cleaved Caspase-3 蛋白表達(dá)的影響（）

表4 TGP 對(duì)腦I/R 大鼠腦組織NF-κB、Cleaved Caspase-12、Cleaved Caspase-3 蛋白表達(dá)的影響（）

注：假手術(shù)組和模型組予生理鹽水1mL/kg 灌胃；TGP 低、中、高劑量組予濃度50、100、200mg/mL 的TGP 溶液1mL/kg 灌胃；NMP 組予濃度15mg/mL 的NMP 溶液1mL/kg 灌胃；I/R 為缺血再灌注；NF-κB 為核因子-κB；Cleaved Caspase-12 為激活型半胱胺酸蛋白酶-12、Cleaved Caspase-3 為激活型半胱胺酸蛋白酶-3；TGP 為白芍總苷；NMP 為尼莫地平；與假手術(shù)組比較，aP<0.01；與模型組比較，bP<0.05，bbP<0.01；與NMP 組比較，cP<0.01

TGP 為中藥白芍的主要有效成分，具有抗炎、抗凋亡等多種生物學(xué)活性。NMP 是一種Ca2+通道阻滯劑，能夠通過(guò)抑制神經(jīng)細(xì)胞凋亡而對(duì)腦I/R 損傷起到保護(hù)作用，是腦I/R 損傷防治藥物研究相關(guān)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)常用的陽(yáng)性對(duì)照藥物[13]。本研究結(jié)果顯示，經(jīng)TGP 干預(yù)能夠顯著降低腦I/R 大鼠神經(jīng)功能缺損評(píng)分、伊文思藍(lán)滲透量和腦梗死體積，明顯改善缺血區(qū)神經(jīng)細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)病變和神經(jīng)細(xì)胞凋亡狀況，降低TNF-α、IL-1β、IL-6 水平，并且TGP 高劑量組上述作用優(yōu)于NMP 組，提示TGP 對(duì)腦I/R 損傷具有保護(hù)作用，其機(jī)制可能與抑制炎癥反應(yīng)和神經(jīng)細(xì)胞凋亡有關(guān)。

內(nèi)質(zhì)網(wǎng)對(duì)維持細(xì)胞內(nèi)鈣穩(wěn)態(tài)、蛋白折疊等發(fā)揮著重要調(diào)控作用。腦缺血及再灌注后，在氧自由基損傷、能量耗竭等病理狀態(tài)下導(dǎo)致內(nèi)質(zhì)網(wǎng)功能障礙，導(dǎo)致未折疊或折疊錯(cuò)誤的蛋白產(chǎn)生，刺激內(nèi)質(zhì)網(wǎng)啟動(dòng)自我修復(fù)機(jī)制，即內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激，主要通過(guò)磷酸化胰腺內(nèi)質(zhì)網(wǎng)激酶抑制蛋白合成從而減少未折疊蛋白的產(chǎn)生，上調(diào)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)伴侶蛋白GRP78 表達(dá)以修復(fù)未折疊蛋白[14]。但是，當(dāng)折疊錯(cuò)誤蛋白過(guò)度積累且內(nèi)質(zhì)網(wǎng)功能難以修復(fù)時(shí)，將激活Caspase-12 和CHOP 而啟動(dòng)細(xì)胞凋亡程序；因此，短期適度的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激具有保護(hù)作用，而長(zhǎng)期過(guò)度的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激則促進(jìn)細(xì)胞凋亡[15]。劉沖等[16]研究發(fā)現(xiàn)，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激能夠誘導(dǎo)NF-κB 表達(dá)。杜成成等[17]研究發(fā)現(xiàn)NF-κB 分子中p65 亞基能夠與DNA 特異性位點(diǎn)結(jié)合而誘導(dǎo)單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞大量合成與釋放TNF-α、IL-1β、IL-6 等，進(jìn)而介導(dǎo)炎癥反應(yīng)。本研究結(jié)果顯示，經(jīng)TGP 干預(yù)能夠顯著降低腦I/R 大鼠腦組織GRP78、p-PERK、CHOP、NFκB、Cleaved Caspase-12、Cleaved Caspase-3 蛋白表達(dá)，并且TGP 高劑量組上述作用除Cleaved Caspase-12 均優(yōu)于NMP 組，提示TGP 對(duì)大鼠腦I/R 后炎癥反應(yīng)和細(xì)胞凋亡的抑制作用可能與抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)炎癥和凋亡通路有關(guān)。

綜上所述，TGP 對(duì)大鼠腦I/R 損傷具有保護(hù)作用，其作用機(jī)制可能與TGP 抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)炎癥和凋亡通路有關(guān)。氧化應(yīng)激是腦I/R 損傷的另一重要機(jī)制，TGP 是否能夠通過(guò)抑制氧化應(yīng)激減輕腦I/R損傷及其與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的關(guān)系，還有待進(jìn)一步研究。