馮長華 ，劉宇晗 ，鄭揚云 ，胡廷婷 ，周顯鳳

（1.南昌市疾病預(yù)防控制中心、傳染病預(yù)防控制國家重點實驗室研究基地，江西 南昌 330038；2.南昌大學(xué)第二附屬醫(yī)院檢驗科、江西省檢驗醫(yī)學(xué)重點實驗室，江西 南昌330006）

艾滋病又稱獲得性免疫缺陷綜合征（Acquired immunodeficiency syndrome, AIDS）, 是由人類免疫缺陷病毒（Human immunodeficiency virus, HIV）感染引起自身免疫功能障礙的嚴(yán)重傳染性疾病，多因反復(fù)繼發(fā)機會性感染而死亡,是目前全球和我國重要的公共衛(wèi)生問題之一[1]。研究表明，HIV 病毒主要攻擊靶標(biāo)是免疫系統(tǒng)的CD4+T 淋巴細胞 （簡稱CD4+T 細胞）, 并在細胞內(nèi)進行復(fù)制和傳播，破壞人體免疫系統(tǒng)[2]。艾滋病無法治愈，但可通過及時治療延緩生命，早診斷、早治療是控制艾滋病患者病程進展的重要手段[3]?！吨袊滩≡\療指南》（2018 版） 中指出 HIV 核酸定量 （病毒載量）和CD4+T 淋巴細胞計數(shù)是判斷疾病進展、臨床用藥、療效和預(yù)后的兩項重要指標(biāo)[4]。因此，探究T 淋巴細胞計數(shù)和病毒載量之間相關(guān)性, 有利于對AIDS患者的病程進行監(jiān)控和指導(dǎo)治療。本研究分析了AIDS 患者血樣T 淋巴細胞計數(shù)和病毒載量檢測結(jié)果。報告如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料 以 2019 年 1 月-2019 年 12 月經(jīng)南昌市疾病預(yù)防控制中心首次確診的未接受抗病毒治療的201 例AIDS 患者作為未治療組，選擇同期210 例接受抗病毒治療的AIDS 患者為治療組和79 例健康的體檢者為健康組。所有的AIDS 患者均符合《艾滋病和艾滋病病毒感染診斷》（WS293-201 9）中AIDS 的診斷標(biāo)準(zhǔn)[5]。健康的體檢者均已經(jīng)過酶聯(lián)免疫吸附試驗篩查，結(jié)果為HIV 抗體陰性。在參與者知情同意條件下獲取血液樣本,檢測未治療組T 淋巴細胞數(shù)量及HIV-1 病毒載量, 檢測治療組及健康組T 淋巴細胞數(shù)量。

1.2 檢測試劑與材料 用于HIV-1 病毒載量檢測的試劑廠家為瑞士Roche 生產(chǎn), 使用儀器型號為Roche COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan；用于 CD 3+細胞、CD4+T 細胞和CD8+T 細胞計數(shù)檢測試劑為美國BD 公司生產(chǎn), 使用儀器型號為BD FACSCalibur。

1.3 檢測方法 采集研究對象兩管EDTA-K3 抗凝的靜脈全血3.0～5.0ml, 采集后立即顛倒混勻,24h內(nèi)使用流式細胞儀完成CD3+細胞、CD4+T 細胞和CD8+T 細胞計數(shù)。剩下的全血2000r/min 離心15分鐘，分離出血漿，使用逆轉(zhuǎn)錄熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)試驗檢測HIV-1 病毒載量。所有操作均嚴(yán)格遵循《全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范》（2015 年修訂版）[6]及各試劑儀器操作說明的規(guī)定。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 將HIV-1 病毒載量濃度取對數(shù)值轉(zhuǎn)換成lg (cp) /ml。采用SPSS25.0 對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。計量資料采用Kolmogorov-Smirnov 檢驗和Levene's 檢驗分別對數(shù)據(jù)正態(tài)性和方差齊性進行檢驗，正態(tài)分布數(shù)據(jù)以表示，偏態(tài)分布數(shù)據(jù)以中位數(shù)(四分位數(shù)間距)[M (QR) ]表示；方差齊且正態(tài)分布的兩兩比較采用兩獨立樣本t 檢驗，方差不齊且正態(tài)分布的兩兩比較采用t' 檢驗， 非正態(tài)分布數(shù)據(jù)間比較采用K-W 檢驗，組內(nèi)倆倆比較采用Mann-Whitney U 檢驗。計數(shù)資料以率(%)表示，差異比較用χ2檢驗。采用Spearman 相關(guān)分析做相關(guān)性分析，P＜0.05 為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 三組研究對象 CD3+、CD4+T 和 CD8+T 細胞計數(shù)比較 未治療組CD4+T 細胞計數(shù)明顯低于治療組和健康對照組，3 組之間的差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；未治療組 CD8+T 細胞計數(shù)高于治療組和健康對照組,CD8+T 細胞計數(shù)在未治療組和健康組之間的差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；CD3+細胞在三組之間的差異均無統(tǒng)計學(xué)意義。見表1。

表1 未治療組與治療組及健康組之間T 淋巴細胞計數(shù)比較

2.2 未治療組一般資料分析 本次研究納入201例首次確診的未經(jīng)治療的AIDS 患者,男性172 例，女性29 例，男女性別比約7：1，不同性別之間的病毒載量、CD3+、CD4+T 和 CD8+T 細胞數(shù)差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)?；颊吣挲g 18～85 歲,平均年齡48.7±19.2 歲。年齡小于 50 歲患者的病毒載量、CD3+、CD4+T 和 CD8+T 細胞數(shù)和大于 50 歲的患者比較，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表 2。

表2 未治療組患者病毒載量、CD3+、CD4+T 和CD8+T 細胞水平比較

2.3 未治療組不同CD4+T 細胞計數(shù)患者的病毒載量、CD3+及 CD8+T 細胞數(shù)比較 以 350(個/μl) CD 4+T 細胞數(shù)為界限將未治療患者分為兩組, 不同CD4+T 細胞組患者的病毒載量、CD3+及CD8+T 細胞比較,差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。CD4+T 細胞＜350(個/μl)患者的病毒載量水平高于 CD4+T 細胞≥350(個/μl)患者水平,CD3+和 CD8+T 細胞數(shù)均低于 CD4+T 細胞≥350(個/μl)患者水平。見表 3。

2.4 未治療組不同指標(biāo)的相關(guān)性分析 Spearmen相關(guān)分析顯示, 未治療的AIDS 患者年齡、 病毒載量、CD3+、CD4+T 和 CD8+T 細胞數(shù)幾個指標(biāo)之間存在相關(guān)性。年齡與病毒載量呈正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)為 0.41。CD3+、CD4+T、CD8+T 細胞均與年齡、病毒載量呈負相關(guān), CD4+T 細胞與CD3+、CD8+T 細胞呈正相關(guān)。見表4 。

3 討論

目前我國的艾滋病感染者仍處于不斷增加的趨勢，艾滋病疫情形勢不容樂觀[7,8]。艾滋病是唯一一個終身攜帶病毒且具有傳染性的慢性疾病，感染后不易被發(fā)現(xiàn)，潛伏期較長，對人體存在不可逆的持續(xù)性損害[9]。T 淋巴細胞是人體重要的免疫細胞，主要分為CD4+T 淋巴細胞亞群和CD8+T 淋巴細胞亞群，分別調(diào)節(jié)人體的體液免疫和細胞免疫，對維持機體免疫平衡、清除外源性病原體、保護自身細胞具有重要作用[10]。HIV 主要借助其表面糖蛋白gp120 與CD4+T 細胞受體和/或共受體結(jié)合進入胞內(nèi)并整合在宿主細胞染色體DNA 中，進而破壞免疫系統(tǒng)[11]。因此CD4+T 細胞計數(shù)能夠直接反映人體免疫功能,是提示艾滋病患者免疫功能損害狀況最明確的指標(biāo)。當(dāng)艾滋病患者的CD4+T 細胞出現(xiàn)進行性或不規(guī)則性下降時,提示其免疫系統(tǒng)受到了嚴(yán)重損害,進而可能會并發(fā)多種機會性感染或腫瘤等相關(guān)癥狀, 所以CD4+T 細胞計數(shù)在監(jiān)測艾滋病病程發(fā)展過程中具有重要作用[12]。

表3 未治療組不同CD4+T 細胞計數(shù)患者的病毒載量、CD3+及CD8+T 細胞數(shù)比較

表4 未治療組不同指標(biāo)間的相關(guān)系數(shù)r 值和P 值

艾滋病的診斷依賴于抗體檢測,HIV 感染后，一般需要經(jīng)過1-3 個月的窗口期甚至更長時間才能產(chǎn)生抗體， 在窗口期無法查到抗體或者表現(xiàn)為抗體不確定[13]。個別晚期AIDS 患者體內(nèi)病毒大量復(fù)制導(dǎo)致免疫系統(tǒng)崩潰,造成抗體種類嚴(yán)重丟失而使抗體檢測結(jié)果不確定[4]。因此許多樣本經(jīng)抗體檢測時不能判斷患者是否感染。臨床可通過檢測病毒載量來解決抗體不確定問題。病毒載量是發(fā)現(xiàn)早期HIV 窗口期感染者、觀察患者病情進展、抗病毒藥物治療效果及觀察藥物耐藥性的重要參考指標(biāo)。HIV 病毒載量較高時，提示患者體內(nèi)的病毒可對免疫系統(tǒng)產(chǎn)生較強的破壞性,且患者處于強傳染狀態(tài)，同時有研究證明，血液中檢測不到病毒載量時，患者在性行為中不具有傳染性[14]。因此，檢測患者體內(nèi)的病毒載量,不僅有助于發(fā)現(xiàn)抗體不確定患者避免發(fā)生診斷延誤甚至漏診，做好提前干預(yù)。同時也有助于及時準(zhǔn)確的對患者進行有效的抗病毒治療，延長患者生命。

未治療組的CD4+T 細胞數(shù)低于治療組和健康人群, 未治療組和已治療組CD8+T 細胞數(shù)均比健康人群高,上述比較差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05),提示機體在感染病毒后,未經(jīng)治療的患者CD4+T細胞較治療患者和健康人破壞嚴(yán)重,免疫系統(tǒng)被破壞的同時也會被異常激活, 增殖的CD8+T 細胞可被激活分泌抑制因子,在一定程度上減弱或抑制免疫應(yīng)答，導(dǎo)致機體免疫監(jiān)視功能下降[15]。本研究的未經(jīng)治療的AIDS 患者年齡分布在18～86 歲，幾乎涉及每個年齡段，表明艾滋病的感染人群范圍廣，每個年齡段的人均普遍易感， 這與黃慧的報道相符合[16]。本研究有97 例患者年齡大于50 歲，所占比例為48.3%，表明老年人已成為艾滋病感染的重點人群[17]。年齡大于50 歲患者較50 歲以下患者的病毒載量水平高，而CD4+T 細胞數(shù)低，說明年齡越大，病毒復(fù)制水平越高，患者的免疫狀況越差,體內(nèi)的免疫功能不足以抵抗病毒的侵犯， 形成惡性循環(huán)，產(chǎn)生一定的級聯(lián)效應(yīng)。近年來,國家提倡“發(fā)現(xiàn)即治療”醫(yī)治方案，建議 CD4+T 細胞數(shù)≤350 個/μl即可對艾滋病感染者或患者進行規(guī)范早期的抗病毒治療[18]。本研究中有 148 例患者 CD4+T 淋巴細胞計數(shù)＜350 個/μl,所占比例為73.6%，可考慮對該批人群進行抗病毒治療及定期監(jiān)測淋巴細胞計數(shù)和病毒載量, 以期改善人體免疫力降低機會性感染，提高患者的生存質(zhì)量。本研究也發(fā)現(xiàn)，AIDS 患者的CD4+T 細胞計數(shù)與病毒載量、年齡呈負相關(guān)，這與嚴(yán)亞軍等人的研究結(jié)果一致[19]，在沒有條件檢測病毒載量時,可依靠檢測CD 3+、CD4+T 和CD8+T 細胞計數(shù)及患者的臨床癥狀來推斷HIV 病毒在患者體內(nèi)的復(fù)制情況。

綜上所述,未經(jīng)治療的艾滋病患者免疫系統(tǒng)受損嚴(yán)重，且隨著年齡的增長，CD4+T 細胞水平逐漸下降，病毒載量水平逐漸升高。同時,也表明HIV-1病毒載量及T 淋巴細胞檢測在艾滋病臨床診斷和病程監(jiān)測中具有重要的指導(dǎo)作用。