范許洲，王偉，嚴(yán)京梅，黃雪蓮，欒建鳳

（東部戰(zhàn)區(qū)總醫(yī)院輸血醫(yī)學(xué)科（原南京軍區(qū)南京總醫(yī)院），江蘇 南京210002）

輸血相關(guān)傳染病檢測是確保血液及血液制品安全和減少醫(yī)療糾紛的重要措施。目前常規(guī)使用酶聯(lián)免疫檢測（ELISA）方法實(shí)施輸血相關(guān)四項(xiàng)傳染病檢測（簡稱傳染病四項(xiàng)，包括乙肝肝炎表面抗原、丙型肝炎抗體、梅毒抗體和艾滋病抗體），雖然ELISA 已經(jīng)具有了較高的靈敏度和特異性，但各家試劑的差異及試驗(yàn)干擾會(huì)產(chǎn)生試驗(yàn)結(jié)果的差異，干擾了檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。為保障血液的安全，獻(xiàn)血者的血液必須用兩家不同廠家的試劑檢測兩次，任何一家試劑檢測陽性均作陽性處理，兩家檢測均陰性的血液再用核酸檢測（NAT）[1-3]。獻(xiàn)血者血液的檢測為我們評價(jià)ELISA 試劑的檢測結(jié)果提供了基礎(chǔ)，并為實(shí)施患者輸血前檢測提供借鑒。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取 2016 年 1 月至 2018 年 10 月本血液中心39824 份無償獻(xiàn)血者傳染病四項(xiàng)檢測。

1.2 方法

1.2.1 試劑及儀器 ELISA 檢測試劑初檢為廈門英科新創(chuàng)科技有限公司,復(fù)檢試劑乙型肝炎肝表面抗原、丙型肝炎抗體、梅毒為北京金豪制藥股份有限公司，人類免疫缺陷病毒(HIV1/2)抗原抗體檢測試劑盒為北京萬泰藥業(yè)股份有限公司。核酸檢測儀器：科華核酸提取儀、熒光 PCR 儀（ABI7500）試劑為科華核酸檢測試劑盒。STAR 全自動(dòng)加樣儀（瑞士HAMILTON），F(xiàn)AME24/32 全自動(dòng)酶免分析系統(tǒng)（瑞士HAMILTON）。所有試劑均為經(jīng)檢驗(yàn)合格且在有效期內(nèi)使用； 所有儀器設(shè)備均按要求進(jìn)行維護(hù)保養(yǎng)，并確保能夠正常工作。

1.2.2 試驗(yàn)結(jié)果的判讀 兩種ELISA 檢測試劑結(jié)果一致，判讀結(jié)果，若只有一種出現(xiàn)陽性結(jié)果時(shí)，用同樣的試劑對原試管進(jìn)行雙孔復(fù)檢,結(jié)果均為陰性則表示合格；任意一孔出現(xiàn)陽性且復(fù)檢后仍為陽性則表示不合格；ELISA 檢測后,剔除酶免雙試劑陽性、單試劑陽性的樣本及重度脂溶血樣本，其余樣本進(jìn)行核酸檢測。核酸混樣檢測結(jié)果陰性為合格，混樣陽性進(jìn)行拆分實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證, 拆分結(jié)果陰性為合格，拆分結(jié)果陽性為不合格。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用 GraphPadPrism5.0 統(tǒng)計(jì)軟件處理數(shù)據(jù), 兩組數(shù)據(jù)之間的相互比較采用 t 檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料采用百分率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 ELISA 檢測結(jié)果 總陽性見表1。

表1 2016-2018 年39824 例獻(xiàn)血者傳染病四項(xiàng)ELISA 檢測結(jié)果

表2 2016-2018 年獻(xiàn)血者傳染病四項(xiàng)ELISA 檢測雙試劑與單試劑陽性結(jié)果

2.2 ELISA 檢測單試劑與雙試劑陽性結(jié)果 見表2、圖 1。

圖1 2016-2018 年獻(xiàn)血員傳染病四項(xiàng)酶免檢測雙側(cè)與單側(cè)反應(yīng)陽性比較

2.3 核酸檢測結(jié)果 35431 例酶免檢測陰性且質(zhì)量合格的標(biāo)本進(jìn)行HIV-RNA、HCV-RNA、HBV-DN A 檢測,只有 HBV-DNA 陽性標(biāo)本 12 例：2016 年 5例，2017 年 4 例，2018 年 3 例。其它標(biāo)本各項(xiàng)目核酸檢測均為陰性，不同年份不合格率比較：χ2=2.73,P＞0.05，見表 3。

3 討論

本文中39824 例無償獻(xiàn)血者血液樣本，ELISA檢測的總陽性率為1.88%,剔除ELISA 雙試劑及單試劑陽性標(biāo)本及質(zhì)量不合格標(biāo)本后，35431 例血液樣本進(jìn)行核酸檢測,總陽性率為0.13%,且均為HB V-DNA 陽性（15 例），低于王湘屏[4]等人報(bào)道核酸陽性率0.278%、梁浩堅(jiān)[5]等人報(bào)道核酸陽性率0.22%，但高于楊琳琳[6]等人報(bào)道核酸陽性率0.06%，葉祖興[7]等人報(bào)道核酸陽性率0.07%。提示：一是雖然血液樣本經(jīng) ELISA 檢測為陰性，但HBsAg 仍有一定比例核酸檢測陽性率；二是雙試劑ELISA 檢測有效提高了血液的安全性。

表3 2016-2017 年酶免檢測陰性標(biāo)本核酸檢測結(jié)果

將無償獻(xiàn)血者血液樣本ELISA 檢測的雙試劑和單試劑陽性率進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)HBsAg、抗-HCV與抗-HIV 和/或P24 檢測中單側(cè)陽性率均高于雙側(cè),且新創(chuàng)試劑與金豪試劑檢測陽性率不同,HBsAg與抗-HCV 兩種試劑陽性率存在差異且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,提示不同廠家的ELISA 試劑檢測結(jié)果存在差異。這可能是由于試劑的穩(wěn)定性、特異性、敏感度不同以及操作等原因造成[8-11]。有研究報(bào)道，ELISA單試劑有反應(yīng)標(biāo)本經(jīng)核酸檢測陽性檢出率達(dá)0.752 %,ELISA 無反應(yīng) （S/CO≤0.7）標(biāo)本中，陽性檢出率0.27%,兩者相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=8.801, P=0.003）。本統(tǒng)計(jì)中抗-TP 結(jié)果一致性高，可能與獻(xiàn)血人群的年齡段分布有關(guān),據(jù)報(bào)道，抗TP-ELISA 假陽性多出現(xiàn)于老年人、有多次妊娠史及患免疫系統(tǒng)疾病的人群[12-16]，而本報(bào)道中的獻(xiàn)血者主要年齡段在青少年[17]。

以上的分析結(jié)果提示,單ELISA 試劑的檢測存在一定的假陽性和假陰性。提示：一是作為獻(xiàn)血者血液的檢測單試劑陽性血液均應(yīng)列為不合格血液，以提高血液使用的安全性；二是對于采供血機(jī)構(gòu)應(yīng)提倡對這些獻(xiàn)血者做進(jìn)一步的確認(rèn),以免使?jié)撛诘墨I(xiàn)血員被誤屏蔽；三是對于獻(xiàn)血者和輸血者，假陰性和假陽性均會(huì)給他們帶來不良后果。假陰性延誤治療；誤判陽性，尤其是艾滋和梅毒的誤判有時(shí)甚至導(dǎo)致嚴(yán)重的社會(huì)問題，檢驗(yàn)人員對ELISA單試劑陽性的結(jié)果需謹(jǐn)慎,首先應(yīng)該用原試劑復(fù)查原始管，確保實(shí)驗(yàn)無誤，仍為相同結(jié)果時(shí)，最好用確認(rèn)方法確認(rèn)后發(fā)放結(jié)果。